鋅在不同磷源條件下對銅綠微囊藻生長與產(chǎn)毒的影響

王舉，李婧，陳榮,*，沈瑩

1. 西安建筑科技大學環(huán)境與市政工程學院，西安 710055 2. 西安建筑科技大學建筑設(shè)計研究院，西安 710055

水體富營養(yǎng)化現(xiàn)象是引發(fā)水華問題的首要因素，在水體富營養(yǎng)化過程中藍藻門的微囊藻是最為常見的一種有害藻種[1]，其繁殖速度較快，易在富營養(yǎng)化水體中大量生長且伴隨有藻毒素的產(chǎn)生。在對水體富營養(yǎng)化問題的研究中發(fā)現(xiàn)，氮磷營養(yǎng)鹽調(diào)控是最為可行有效的一種控制水華現(xiàn)象的方法[2-3]，其中營養(yǎng)元素磷在控制淡水水體水華方面起著關(guān)鍵作用[4-6]。自然水體中藻細胞可直接吸收利用溶解性無機磷的含量很低，往往不能滿足藻細胞對磷的需求[7]，而溶解性有機磷可以作為藻類利用的磷源促進藻細胞的生長[8-9]。研究發(fā)現(xiàn)在一些溶解性無機磷含量不足的湖水中溶解性有機磷是藍藻水華過程中主要的磷源[10]，藻細胞可通過合成堿性磷酸酶對部分溶解性有機磷水解從而補充磷源供藻細胞使用[11-12]。但通過對氮磷等營養(yǎng)物質(zhì)的調(diào)控，水體富營養(yǎng)化問題并沒有解決。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)微量元素對水華的形成也起到重要作用。微量元素鋅屬于過渡型金屬，是藻細胞生長過程中所必需的微量元素之一，主要通過藻細胞表面的金屬結(jié)合位點進入藻細胞體內(nèi)[13]，在藻類許多生理過程中起著重要作用，對藻類的光合作用、生長代謝以及藻細胞內(nèi)能量的產(chǎn)生都有一定影響[14]。鋅在許多酶系統(tǒng)中也起著重要作用，是堿性磷酸酶的輔助因子[15]，對堿性磷酸酶的生成有限制作用[16]。過高的鋅含量會影響細胞的增殖、光合作用以及對營養(yǎng)鹽的吸收[17-18]，會導致藻細胞的滲透性增加，使電解質(zhì)漏失，降低葉綠素含量，延長藻細胞的生長周期，促進核酸的降解，使藻細胞形態(tài)發(fā)生變異，甚至引起藻細胞的裂解死亡[19]。張鐵明等[20]在無機磷充足的條件下，研究發(fā)現(xiàn)低濃度鋅更有利于銅綠微囊藻的生長；Zeng和Wang[21]在不同磷濃度條件下，研究藻細胞對鋅的吸收中發(fā)現(xiàn)，銅綠微囊藻細胞中磷含量增加會促進鋅的吸收；Lukac和Aegerter[22]研究發(fā)現(xiàn)鋅對銅綠微囊藻的生長與產(chǎn)毒也有促進作用；雷振[23]在多種無機磷濃度條件下研究鋅對銅綠微囊藻生長的影響，發(fā)現(xiàn)低無機磷條件下鋅元素對藻細胞增殖的作用更顯著。由于有機磷對藻細胞生長有很大作用，但對于磷源與微量元素鋅共同作用對銅綠微囊藻生長與產(chǎn)毒的研究較少。本文主要致力于探討低磷濃度條件下，有機磷與微量元素鋅對微囊藻的生長與產(chǎn)毒產(chǎn)生影響，為抑制藍藻爆發(fā)，解決水體富營養(yǎng)化問題提供參考。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 材料

實驗所用藻種為產(chǎn)毒型銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosa)，購置于中國科學院水生生物研究所，藻種編號為FACHB-912。采用BG-11培養(yǎng)基在恒溫光照培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為(25±1) ℃，光照強度為3 000 lux，光暗時間比為12 h:12 h。本研究選擇3種具有代表性磷：無機磷磷酸氫二鉀(K2HPO4)，小分子有機磷甘油磷酸鈉(C3H7Na2O6P·5.5H2O)和大分子有機磷卵磷脂(C40H82NO9P)，實驗藥品均為國產(chǎn)科密歐分析純試劑。

1.2 培養(yǎng)基設(shè)置

培養(yǎng)基除氮、磷、鋅元素外，其他均依照BG-11的營養(yǎng)條件來設(shè)置。由于再生水補水已經(jīng)成為當前城市景觀水體補水的重要方式，因此氮濃度設(shè)置依據(jù)GB18918—2002中一級A排放標準來設(shè)定(TN≤15 mg·L-1)，實驗中以NaNO3為氮源設(shè)置硝氮濃度為10 mg·L-1，分別以3種不同形態(tài)磷為磷源，總磷濃度設(shè)置為0.1 mg·L-1；鋅元素采用七水硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)配制，在課題組對西安市城市景觀水體的調(diào)研中發(fā)現(xiàn)，微量元素鋅的含量相對較高從幾微克每升至幾百微克每升，雷振[23]在實驗中發(fā)現(xiàn)低磷(無機磷)條件下鋅的作用更加顯著，鋅的最佳作用濃度范圍在0.5 μg·L-1～5 μg·L-1，因此本次實驗設(shè)置3個濃度梯度，分別為0.5 μg·L-1、5 μg·L-1和50 μg·L-1。

1.3 饑餓及接種

將正常培養(yǎng)至對數(shù)期的藻種在25 ℃、6 000 r·min-1離心10 min，去掉上清液后用15 mg·L-1的NaHCO3洗滌3次，將離心得到的藻細胞接種至饑餓處理的培養(yǎng)基(不含氮、磷、鋅元素)中培養(yǎng)7 d。預(yù)培養(yǎng)結(jié)束后按上述方法再次離心只留下藻細胞，并接入配制不同鋅濃度梯度培養(yǎng)基中，接種初始藻密度約為2×105cell·mL-1，初始培養(yǎng)時培養(yǎng)液總體積為500 mL，培養(yǎng)瓶采用總?cè)莘e為1 000 mL的廣口錐形瓶。接種好的培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。為確保實驗準確性，設(shè)置3個平行樣；每天手動搖培養(yǎng)瓶3～4次，并將其隨機放置以減少光強對藻類生長的影響。

1.4 指標測定

1.4.1 藻密度的測定和增長率的計算

藻密度的測定采用細胞計數(shù)分析儀(Cellometer Auto T4，達科為，中國)，每次測定取樣量為1 mL。實驗過程中，從接種至結(jié)束每隔1 d測定一次藻密度。藻細胞比增長率采用如下公式計算：μ=ln(Xt/X0)/t

式中，Xt為某一時間間隔終結(jié)時的藻細胞數(shù)量，X0為某一時間間隔開始時的藻細胞數(shù)量，t為某一時間間隔(d)，當連續(xù)2 d的μ值小于5%時即認為藻細胞停止生長。

1.4.2 葉綠素a的測定

葉綠素a的測定采用乙醇提取法，每2 d測定一次，每次取10 mL藻液。將取出的藻液加入適量飽和碳酸鎂混勻后經(jīng)真空抽濾裝置抽濾，將濾紙用剪刀剪碎后加入5 mL體積分數(shù)為90%的乙醇，置于4 ℃冰箱中，黑暗提取8～12 h，離心后取上清液經(jīng)分光光度計測定。具體的計算公式如下：

C=11.64(OD663-OD750)-2.16(OD645-OD750)+0.1(OD630-OD750)

1.4.3 堿性磷酸酶活性(APA)的測定[24-25]

取5 mL藻樣，加入已經(jīng)滅菌的比色管中，隨后加入1 mL Tris-HCl緩沖液(pH 8.5)，搖勻后加入1 mL反應(yīng)底物對硝基苯磷酸二鈉(p-nitrophenyl phosphate, PNP-P, MP Blomedicals)。將比色管避光處理放在30 ℃的生化培養(yǎng)箱中，反應(yīng)6 h，用1 mL的0.5 mol·L-1的NaOH溶液來終止反應(yīng)。用紫外分光光度計在410 nm處測定反應(yīng)產(chǎn)物對硝基苯酚(p-nitrophenol, PNP)的產(chǎn)生量，并計算單位時間所產(chǎn)生的對硝基苯酚(nitrophenol, PNP)，并以此作為細胞APA的單位。

1.4.4 藻毒素(MC-LR)的測定

標準藻毒素樣品購置于Sigma(純度98%)，以GB/T 20466—2006中藻毒素的測定方法為標準，采用液相色譜裝置測定(LC-2000，日立，日本)藻毒素含量，分離柱尺寸為250 mm×4.6 mm (SB-C18，安捷倫，USA)。從培養(yǎng)第2天開始每隔1天測定一次藻細胞胞內(nèi)藻毒素含量，第2天藻液取樣量為15 mL以后每次為10 mL，樣品的制備參考Long[26]的制備方法。

1.5 數(shù)據(jù)分析

文中所有實驗數(shù)據(jù)均采用Excel 2010處理，各圖采用Origin9.1繪制，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS20.0，P值表明各組數(shù)據(jù)之間存在顯著性差異，P<0.05有顯著性差異，P>0.05無顯著性差異。

2 結(jié)果與討論(Results and discussion)

2.1 微囊藻生長狀況

從圖1可以看出，無機磷K2HPO4最有利于藻細胞的生長，大分子有機磷LEC對藻細胞生長的促進作用最弱。以K2HPO4為磷源時，不同濃度的鋅含量并未對藻細胞的生長產(chǎn)生顯著影響，而當以有機磷為磷源時，不同濃度的鋅含量對藻細胞生長的影響有顯著性差異。以小分子有機磷NaGly為磷源時，在鋅濃度(CZn2+)為0.5 μg·L-1時最有利藻細胞的生長，CZn2+為50 μg·L-1時藻細胞的生長狀況優(yōu)于CZn2+為5 μg·L-1時藻細胞的生長狀況；以大分子有機磷LEC為磷源時，在CZn2+為0.5 μg·L-1時最有利藻細胞的生長，CZn2+為50 μg·L-1與CZn2+為5 μg·L-1時藻細胞的生長狀況并無差異。磷是影響藻細胞生長的重要因素，鋅在小分子有機磷NaGly條件下也會對藻細胞的生長產(chǎn)生影響，鋅的作用與磷形態(tài)有關(guān)，藻細胞對磷的依賴要強于對鋅的依賴，而磷與鋅共同作用的效果顯著。

從圖2可以看出，在無機磷K2HPO4為磷源條件下，不同含量的鋅對葉綠素a的影響并不顯著；而在有機磷條件下，不同含量的鋅對葉綠素a產(chǎn)生了影響，其中以小分子有機磷NaGly為磷源時效果更顯著；研究發(fā)現(xiàn)小分子有機磷NaGly對藻細胞的光合作用和呼吸作用影響較大，其中甘油三磷酸是光合作用中碳循環(huán)的底物，可以促進光合作用，而鋅是光合作用過程中許多酶的輔助因子，因此NaGly與微量元素鋅共同促進藻類葉綠素a產(chǎn)生的效果更顯著[27]。對藻密度與葉綠素a做相關(guān)性分析(表1)發(fā)現(xiàn)，高濃度鋅(CZn2+為50 μg·L-1)時，磷源越難被利用，藻密度與葉綠素a的相關(guān)性越弱；而低濃度鋅時，藻密度與葉綠素a的相關(guān)性和磷源被利用的難易程度之間無明顯規(guī)律。

圖1 銅綠微囊藻細胞數(shù)量變化Fig. 1 Cell density of M. aeruginosaNote: K2HPO4 is inorganic phosphorus; NaGly stands for small molecule organic phosphorus glycerin sodium phosphate; LEC stands for macromolecular organic phosphorus lecithin.

圖2 銅綠微囊藻葉綠素a濃度變化Fig. 2 Chlorophyll a concentration of M. aeruginosa

磷源Phosphorus source鋅濃度Zn concentration線性方程Linear relationshipR2P磷酸氫二鉀K2HPO4Zn2+=50 μg·L-1y =0.028x-0.0420.999P<0.01Zn2+=5 μg·L-1y =0.003x+0.0640.924P<0.01Zn2+=0.5 μg·L-1y =0.040x-0.1050.977P<0.01甘油磷酸鈉NaGlyZn2+=50 μg·L-1y =0.030x+0.0110.974P<0.01Zn2+=5 μg·L-1y =0.028x+0.0010.788P<0.05Zn2+=0.5 μg·L-1y =0.028x-0.0200.982P<0.01卵磷脂LECZn2+=50 μg·L-1y =0.041x-0.0270.683P<0.05Zn2+=5 μg·L-1y =0.036x+0.0030.844P<0.05Zn2+=0.5 μg·L-1y =0.059x-0.1730.897P<0.01

對藻細胞的生長規(guī)律作進一步研究(圖3)發(fā)現(xiàn)，以無機磷K2HPO4為磷源時藻細胞的比增長速率最大，其次是小分子有機磷NaGly，以大分子有機磷LEC為磷源時的比增長速率最小，這與Shi等[28]的研究結(jié)果一致，無機磷條件下藻細胞的比增長速率高于有機磷條件下的比增長速率。以小分子有機磷NaGly為磷源，在CZn2+為50 μg·L-1和CZn2+為0.5 μg·L-1時，藻細胞的比增長速率與無機磷條件下藻細胞的比增長速率差異不大。在同一磷源條件下，不同含量的鋅對藻細胞比增長速率的影響不同。以K2HPO4為磷源時，CZn2+為5 μg·L-1時比增長速率最大，CZn2+為0.5 μg·L-1時比增長速率最小，即適量的鋅可以激發(fā)藻細胞的活性，而鋅含量過高則會抑制藻細胞的活性，鋅含量過低不利于藻細胞活性的激發(fā)。以NaGly為磷源時，CZn2+為5 μg·L-1時比增長速率最小，而CZn2+為50 μg·L-1與CZn2+為0.5 μg·L-1時藻細胞的比增長速率都較大且二者差異性不大，即鋅含量過高或過低都有利于提升藻細胞的活性。以LEC為磷源時，隨著鋅含量的降低藻細胞的比增長率在逐漸增加，即鋅含量越低藻細胞的活性越強。陳仕光等[29]研究發(fā)現(xiàn)，藻細胞對微量元素鋅的需求量少但敏感度高，但本次研究發(fā)現(xiàn)，不同磷源條件下不同含量鋅對藻細胞的作用特性不同，即磷與鋅共同影響著藻細胞的生長狀況。

2.2 APA的變化

堿性磷酸酶屬于誘導酶，只有在磷限制時才會被誘導激活[30-31]，其主要作用是為藻細胞提供可直接利用的磷，單細胞APA是評價堿性磷酸酶對有機磷水解效率的有效指標。從圖4可以看出，不同磷源條件下，在培養(yǎng)周期內(nèi)，單個藻細胞的APA隨時間的增加在不斷降低，而起始階段單細胞APA降低較快，其原因可能是由于經(jīng)過饑餓處理的藻細胞對磷的需求較大，起始階段藻細胞處于快速增長時期需要大量的磷來合成新的細胞物質(zhì)。同一磷源條件下不同含量的鋅對單細胞APA變化的影響并無顯著性差異。

不同磷源條件下培養(yǎng)初期APA有所差異，大分子有機磷LEC條件下的APA量最大，是無機磷K2HPO4與小分子有機磷NaGly條件下APA的2倍左右，即以大分子有機磷為磷源時堿性磷酸酶的活性會迅速提高[32]。Martin等[33]和Diaz等[34]研究發(fā)現(xiàn)，藻細胞攝磷和生長是2個不同的過程，當外源可利用磷含量較高時，藻細胞吸收的磷以聚磷的形式儲存在體內(nèi)；當外源可利用磷含量不足時，藻細胞調(diào)節(jié)體內(nèi)響應(yīng)產(chǎn)生水解酶，部分水解酶在細胞外分解可利用的磷源，部分將體內(nèi)儲存的聚磷水解以供藻細胞的生長需要。由于以大分子有機磷LEC為磷源時，藻細胞經(jīng)過饑餓處理，可直接利用的磷源幾乎沒有，并且大分子有機磷LEC較難被水解，因此APA較高。小分子有機磷NaGly較易被水解，低活性的APA即可滿足磷源的供應(yīng)，無機磷條件下經(jīng)過饑餓處理的藻細胞，在培養(yǎng)初期2～3 h內(nèi)會大量吸磷，一直達到自身質(zhì)量的2%，以聚磷的形式儲存于體內(nèi)[35]，由于外源無機磷的含量較少，藻細胞在生長過程中可直接利用的磷含量有限，不能滿足藻細胞生長對磷的需求，因此其APA較高。

圖3 微囊藻的生長率(μ)Fig. 3 Growth rate (μ) of M. aeruginosa

圖4 3種磷源下單細胞堿性磷酸酶活性(APA)變化Fig. 4 Changes of single cell alkaline phosphatase activity (APA) in three phosphorus sources

圖5 單細胞平均APA變化Fig. 5 Cellular average APA changes

從圖5可以看出，大分子有機磷LEC條件下單細胞平均APA是無機磷K2HPO4與小分子有機磷NaGly條件下的2倍左右。同一磷源條件下不同含量的鋅對單細胞平均APA的影響不同，無機磷K2HPO4條件下，隨著鋅含量的降低單細胞平均APA在逐漸升高。大分子有機磷LEC條件下，隨著鋅含量的降低單細胞平均APA在逐漸降低且差異性較大，這與Shi等[36]研究結(jié)果一致，在一定濃度范圍內(nèi)鋅含量的增加會促進APA的增加。在小分子有機磷NaGly條件下鋅含量的改變并未對單細胞平均APA產(chǎn)生顯著影響。鋅是堿性磷酸酶的組成成分之一[14]，在細胞內(nèi)易與聚磷結(jié)合[37]，藻細胞內(nèi)的聚磷與細胞外可直接利用的磷含量有關(guān)，有機磷的水解與APA有關(guān)。K2HPO4可以被藻細胞直接吸收利用，高含量的鋅對藻細胞的生長產(chǎn)生限制作用，因此單細胞平均APA也受到限制；有機磷條件下，鋅會促進堿性磷酸酶的產(chǎn)生，NaGly易被水解因此對單細胞平均APA的影響不顯著，LEC為大分子有機磷較難被水解，鋅含量越高對單細胞平均APA的促進作用越顯著。不同磷源下鋅含量的變化對APA的影響并不相同，即微量元素鋅與磷的共同作用影響APA的產(chǎn)生。

2.3 藻細胞產(chǎn)毒狀況

2.3.1 不同磷源條件下的單個藻細胞胞內(nèi)產(chǎn)毒量

本次主要研究藻毒素MC-LR在銅綠微囊藻細胞生長過程中的變化。單個藻細胞的胞內(nèi)產(chǎn)毒量是評價藻細胞在生長過程中生成藻毒素的一個重要指標，它能更直觀地反映出環(huán)境因素對于藻細胞產(chǎn)毒的影響。從圖6可以看出，不同磷源條件下單個藻細胞的產(chǎn)毒量差異性較大，無機磷K2HPO4與小分子有機磷NaGly有利于藻毒素的產(chǎn)生，而大分子有機磷LEC條件下單個藻細胞的產(chǎn)毒量較低。

同一磷源條件下不同含量的鋅對單個藻細胞產(chǎn)毒量的影響不同，以無機磷K2HPO4為磷源時，CZn2+為5 μg·L-1時藻細胞的產(chǎn)毒量最大，CZn2+為50 μg·L-1時藻細胞的產(chǎn)毒量最少，即鋅含量過高對藻細胞產(chǎn)毒的抑制作用較強，鋅屬于過渡型金屬，主要通過藻細胞表面的金屬結(jié)合位點進入藻細胞體內(nèi)參與細胞的新陳代謝[13]。關(guān)于重金屬對藻類的致毒機理發(fā)現(xiàn)，藻細胞壁帶有負電荷并且含有一些含硫、氮和氧的官能團，重金屬易與細胞壁產(chǎn)生電荷吸引而且可與細胞壁上的官能團發(fā)生螯合作用，使重金屬沉積在藻細胞表面并通過細胞的生理過程將重金屬吸收，從而對藻細胞的生長代謝以及酶的活性產(chǎn)生影響[38]，并且過高的鋅含量會使細胞膜改性[39]，引起藻細胞滲透性的增加使電解質(zhì)漏失[19]，而鋅含量不足時對藻細胞產(chǎn)毒的影響較弱。

以小分子有機磷NaGly為磷源時，CZn2+為50 μg·L-1和CZn2+為0.5 μg·L-1時有利于藻毒素的產(chǎn)生，二者之間的差異性不大，CZn2+為5 μg·L-1時藻細胞的產(chǎn)毒量最少。由于藻毒素的產(chǎn)生與藻細胞的生長密切相關(guān)，藻細胞經(jīng)過饑餓處理，起始階段可直接利用的磷幾乎沒有。CZn2+為0.5 μg·L-1時，鋅含量較少主要用于合成堿性磷酸酶，促進有機磷的水解，有利于藻細胞的生長產(chǎn)毒也較多；CZn2+為50 μg·L-1時，鋅含量較多不僅堿性磷酸酶產(chǎn)量增加并且大量的鋅進入藻細胞體內(nèi)，使藻細胞體內(nèi)的鋅含量超過閾值，藻細胞啟動調(diào)節(jié)機制，使體內(nèi)的聚磷與鋅結(jié)合并排出體外，藻細胞處于磷限制狀態(tài)，因此限制了藻細胞的生長，產(chǎn)毒也減少；CZn2+為5 μg·L-1時，鋅促進了堿性磷酸酶的產(chǎn)生并且進入到藻細胞體內(nèi)，但由于NaGly較易被水解吸收，鋅含量的增加可能并未超過藻細胞體內(nèi)的閾值，因此并未啟動響應(yīng)機制，但鋅的累積對藻細胞的生長產(chǎn)生了抑制作用，產(chǎn)毒也較少。以大分子有機磷LEC為磷源時，隨著鋅含量的減少藻細胞的產(chǎn)毒量逐漸增加，即低含量的鋅更有利于藻毒素的產(chǎn)生。大分子有機磷較難被水解，較低含量的鋅有可能會對藻細胞產(chǎn)生毒性，因此鋅含量越低越有利于藻細胞的生長，藻細胞產(chǎn)毒也就逐漸增加。

綜上所述，藻毒素的產(chǎn)生不僅與磷有關(guān)而且與鋅的含量有關(guān)，磷源與微量元素鋅共同影響著藻細胞的產(chǎn)毒，關(guān)于有機磷與鋅的共同作用對藻細胞產(chǎn)毒的作用機理還需做進一步研究。

2.3.2 不同磷源條件下葉綠素a與藻毒素的相關(guān)性分析

如表2所示，對數(shù)增長期(藻細胞比增長率大于5%的階段)的葉綠素a含量與胞內(nèi)藻毒素含量做相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，不同磷源與不同鋅濃度條件下，藻細胞在對數(shù)增長期時葉綠素a含量與藻毒素(MC-LR)相關(guān)性不同。無機磷條件下葉綠素a與藻毒素呈現(xiàn)正相關(guān)性且相關(guān)系數(shù)較高，這與段靜波等[40]研究結(jié)果一致，而有機磷條件下葉綠素a與藻毒素之間相關(guān)性較弱。對在達到最大藻毒素含量之前的胞內(nèi)藻毒素含量與葉綠素a進行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，無機磷與有機磷條件下葉綠素a與胞內(nèi)藻毒素的相關(guān)性較強，即藻細胞生長初期，藻毒素與葉綠素a同步增加，隨著藻細胞的生長，胞內(nèi)藻毒素先于葉綠素a衰減。因此，在無機磷為磷源的條件下可以通過葉綠素a的含量對藻毒素含量進行預(yù)測，但有機磷源條件下，二者相關(guān)性較弱。

微量元素鋅與營養(yǎng)元素磷普遍共存于城市水體中，本研究發(fā)現(xiàn)，磷源是影響藻細胞生長的關(guān)鍵因素，鋅含量也會對藻細胞的生長產(chǎn)生影響但作用相對較弱，而小分子有機磷NaGly與鋅的共同作用對藻細胞生長的促進作用顯著。磷源與鋅的共同作用對藻細胞產(chǎn)毒也會產(chǎn)生顯著影響，適量的鋅在小分子有機磷NaGly為磷源時有利于藻細胞的產(chǎn)毒，而以大分子有機磷LEC為磷源時，鋅含量越低越有利于藻細胞的產(chǎn)毒。

小分子有機磷與鋅的共同作用對藻細胞生長與產(chǎn)毒的影響比較顯著，在一定條件下比無機磷和鋅共同作用對藻細胞生長與產(chǎn)毒的影響效果更顯著。因此，對以小分子有機磷為主要磷源水體的富營養(yǎng)化應(yīng)更多關(guān)注其與微量元素鋅共同作用的影響。

圖6 單細胞的產(chǎn)毒量Fig. 6 Cellular microcystin yield

磷源Phosphorus source鋅濃度Zn concentration線性方程Linear relationshipR2P磷酸氫二鉀K2HPO4Zn2+=50 μg·L-1y =16.2x-1.540.874P<0.01Zn2+=5 μg·L-1y =30.3x-1.780.823P<0.05Zn2+=0.5 μg·L-1y =11.8x+1.470.728P<0.01甘油磷酸鈉NaGlyZn2+=50 μg·L-1無相關(guān)性(No correlation)-P>0.05Zn2+=5 μg·L-1無相關(guān)性(No correlation)-P>0.05Zn2+=0.5 μg·L-1y =32.5x-2.890.897P<0.01卵磷脂LECZn2+=50 μg·L-1y =13.6x-2.020.700P<0.05Zn2+=5 μg·L-1無相關(guān)性(No correlation)-P>0.05Zn2+=0.5 μg·L-1無相關(guān)性(No correlation)-P>0.05