β1-腎上腺素受體自身抗體通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡*

侯曉鴻， 寧 娜， 李 楊， 何金玲， 燕 子， 原 媛， 王 麗△, 王曉暉△

(山西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 1病理教研室， 2生理學(xué)系， 3形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)室， 山西 太原 030001)

心功能不全是各種病因所致心血管疾病的終末階段，其病因復(fù)雜，死亡率高，已成為發(fā)達(dá)國家和發(fā)展中國家的重大公共衛(wèi)生問題[1]，但發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。大量研究表明，心功能不全的發(fā)生發(fā)展過程中存在心肌細(xì)胞凋亡[2]，并且心肌細(xì)胞凋亡對心肌結(jié)構(gòu)和功能的調(diào)節(jié)起著至關(guān)重要的作用，因此抑制心肌細(xì)胞凋亡可以有效防止和緩解心功能不全[3]。

近年來研究顯示，在40%～60%心功能不全患者血清中均可檢測到β1-腎上腺素受體自身抗體(β1-adrenoceptor autoantibody，β1-AA)[4]，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，β1-AA可以與β1-腎上腺素受體(β1-adrenoceptor，β1-AR)特異性結(jié)合，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡[5]。然而，β1-AA如何誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡目前尚不清楚。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在氧化應(yīng)激、維持鈣穩(wěn)態(tài)和觸發(fā)細(xì)胞凋亡信號等多種細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用[6]。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)因各種因素被打破，就會(huì)引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。輕度和短暫的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是細(xì)胞的一種自我保護(hù)機(jī)制，而持續(xù)嚴(yán)重的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，會(huì)誘發(fā)心肌細(xì)胞凋亡[7]。然而，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在β1-AA誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡過程中是否發(fā)揮作用目前尚不清楚。本研究將通過在體和離體實(shí)驗(yàn)，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在β1-AA誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中的作用，為闡明β1-AA誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供新的理論支持。

材 料 和 方 法

1 動(dòng)物和細(xì)胞

8周齡雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠，體重180～200 g，由山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供，合格證編號為SCXK(晉)2015-001。將大鼠置于恒定環(huán)境，室溫(22±2) ℃、濕度35%～55%，自由飲食。本研究中涉及動(dòng)物的所有程序均得到山西醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，使用過程符合國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用規(guī)定。H9c2心肌細(xì)胞系購買自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。

2 主要試劑

β1-AR細(xì)胞外第二環(huán)(the second extracellular loop of β1-AR,β1-AR-ECII)抗原肽段由吉爾生化上海有限公司合成；完全弗氏佐劑(complete Freund’s adjuvant, CFA)、不完全弗氏佐劑(incomplete Freund’s adjuvant, IFA)、2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS)和4-苯基丁酸(4-phenoxybutyric acid，4-PBA)均購自Sigma；DMEM培養(yǎng)基和BCA試劑盒購自Thermo Fisher Scientific；抗葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)和caspase-12抗體均購自Abcam；抗GAPDH抗體及 II 抗購自中杉金橋；0.45 μm PVDF膜購自Whatman；SuperECL Plus超敏發(fā)光液購自普利萊；SDS-PAGE凝膠制備試劑盒購自索萊寶；胎牛血清購自Excell；CCK-8試劑盒購置同仁化學(xué)。

3 主要方法

3.1主動(dòng)免疫大鼠 選取8周齡雄性SD大鼠，隨機(jī)分為2組：免疫(β1-AA)組和溶劑對照(vehicle)組,將β1-AR-ECII抗原肽段溶解稀釋，并和完全弗氏佐劑1 ∶1混勻后，采用多點(diǎn)背部皮下注射(0.4 μg/g)即首次免疫；以后每隔2周加強(qiáng)免疫1次，并加入不完全弗氏佐劑1 ∶1乳化抗原，共免疫8周；溶劑對照組用等量Na2CO3溶液替代抗原溶液，實(shí)驗(yàn)方案同免疫組。

3.2鏈霉親和素-酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(SA-ELISA)檢測血清中β1-AA水平 將合成的β1-AR-ECII(10 mg/L)包被空白ELISA板，4 ℃過夜；磷酸鹽緩沖液封閉ELISA 板；將陽性對照、空白對照及待測血清稀釋后加于ELISA板，加帶有生物素標(biāo)記的 II 抗及帶有辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素于ELISA板，以上各步分別在37 ℃水浴1 h；底物顯色30 min；最后測定吸光度(A)值。計(jì)算P/N判定結(jié)果，P/N=(標(biāo)本A值-空白對照A值)/(陰性對照A值-空白對照A值)，P/N≥2.1 定為抗體陽性，P/N≤1.5 為陰性。

3.3親和層析法提純?chǔ)?-AA 采用親和層析法提純主動(dòng)免疫大鼠血清中的β1-AA，應(yīng)用于離體實(shí)驗(yàn)研究。從4 ℃取出層析柱放置室溫30 min，將三蒸水注入層析柱內(nèi)部，沖去保存在柱子中的乙醇；用結(jié)合緩沖液沖洗柱子后，抽取含有β1-AA的血清濾過柱子并用洗脫緩沖液沖洗柱子，使β1-AA隨同洗脫緩沖液滴到EP管中；用BCA試劑盒進(jìn)行蛋白定量。

3.4Western blot檢測心肌組織中GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白表達(dá) 提取大鼠心肌組織蛋白，用BCA試劑盒進(jìn)行蛋白定量。上樣并進(jìn)行SDS-PAGE分離以及用PVDF膜轉(zhuǎn)膜，5%的脫脂奶粉封閉，與Ⅰ抗稀釋液進(jìn)行反應(yīng)，4 ℃過夜；次日加II抗反應(yīng)2 h；將膜置于全自動(dòng)曝光儀內(nèi)，曝光拍攝條帶，ImageJ軟件分析灰度值，將GAPDH作為內(nèi)參照，計(jì)算不同蛋白的相對表達(dá)量。

3.5TUNEL染色檢測心肌組織的凋亡水平 取大鼠心肌組織制備切片，脫蠟和水化；用蛋白酶K通透細(xì)胞；制備TUNEL反應(yīng)混合物并標(biāo)記反應(yīng)；DAB顯色；蘇木素復(fù)染，封片，顯微鏡下拍照，Image-Pro Plus 6.0 圖像分析軟件進(jìn)行凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。心肌細(xì)胞凋亡率即凋亡指數(shù)(apoptotic index,AI;%)=凋亡心肌細(xì)胞核數(shù)/心肌細(xì)胞核總數(shù)×100%。

3.6免疫組化法檢測心肌組織中GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白原位表達(dá) 選取大鼠心肌組織浸入福爾馬林固定；隨后石蠟包埋，切片，二甲苯脫蠟至水；H2O2避光處理及抗原修復(fù)；用血清室溫封閉；與Ⅰ抗稀釋液反應(yīng)，4 ℃過夜；次日加相應(yīng)II抗37 ℃孵育20 min; 顯色，復(fù)染，脫水，透明，然后封片。在顯微鏡下觀察拍照分析。

3.7細(xì)胞培養(yǎng)及處理 用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基加入1%青鏈霉素混合液用于H9c2細(xì)胞的培養(yǎng)，將培養(yǎng)瓶置于含5% CO2、37 ℃及飽和濕度的恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中，隔天傳代。根據(jù)具體情況更換新的培養(yǎng)基，加入1 μmol/L的β1-AA進(jìn)行處理，分別在12 h、24 h和36 h收集樣本。

3.9Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測心肌細(xì)胞的凋亡水平 向6孔板中加入細(xì)胞懸液(每孔1 mL)，待細(xì)胞貼壁后，實(shí)驗(yàn)組1 mmol/L 4-PBA預(yù)處理2 h，再加1 μmol/L β1-AA處理細(xì)胞6 h，收集樣本加凋亡試劑，用流式細(xì)胞術(shù)檢測并分析細(xì)胞凋亡水平。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，多組間比較采用單因素方差分析，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，其它結(jié)果組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 β1-AR-ECII主動(dòng)免疫大鼠模型的建立

SA-ELISA結(jié)果顯示，隨著主動(dòng)免疫時(shí)間的延長，對照組大鼠血清中β1-AA的水平無明顯變化，而主動(dòng)免疫2周后大鼠血清中β1-AA的水平與對照組相比顯著增加(P<0.01)，持續(xù)增加至8周(P<0.01)，提示主動(dòng)免疫大鼠模型建立成功，見圖1。

Figure 1.The A value of β1-AA increased in the serum of adult rats in the active immunization model with synthetic peptide. Mean±SEM. n=15. * P<0.05, ** P<0.01 vs vehicle group.

2 β1-AA誘導(dǎo)心肌組織凋亡水平升高

TUNEL染色后，凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)棕黃色，正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色。在本研究中，對照組心肌組織可見少量棕黃色細(xì)胞核，即存在少量凋亡細(xì)胞，而β1-AA主動(dòng)免疫2周時(shí)心肌組織中TUNEL染色陽性即棕黃色的細(xì)胞核明顯增多，一直持續(xù)至主動(dòng)免疫8周(P<0.01)，見圖2。以上結(jié)果提示β1-AA長期存在可以引起心肌細(xì)胞凋亡增加。

3 β1-AA誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其相關(guān)凋亡通路激活

Western blot結(jié)果顯示，與對照組相比，GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白表達(dá)水平在β1-AA主動(dòng)免疫4周時(shí)開始出現(xiàn)明顯增加，β1-AA主動(dòng)免疫8周時(shí)，GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白表達(dá)水平進(jìn)一步增加(P<0.01)，見圖3A。免疫組化結(jié)果顯示，與對照組相比，心肌組織GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白表達(dá)在主動(dòng)免疫4周明顯增加，持續(xù)增加至8周(P<0.05)，與Western blot結(jié)果一致，見圖3B。以上結(jié)果均提示β1-AA長期存在可以誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其相關(guān)凋亡通路激活。

4 β1-AA誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞活力降低

結(jié)果顯示，與對照組相比，β1-AA干預(yù)H9c2心肌細(xì)胞12 h細(xì)胞活力開始顯著降低，36 h達(dá)最低，β1-AA干預(yù)48 h心肌細(xì)胞活力持續(xù)降低(P<0.01)，見圖4。這提示β1-AA可以引起H9c2心肌細(xì)胞活力顯著下降。

Figure 2.The significant rise in cardiomyocyte apoptosis was induced by β1-AA. The scale bar=40 μm. Mean±SEM. n=6. ** P<0.01 vs vehicle group.

5 β1-AA誘導(dǎo)心肌細(xì)胞H9c2凋亡增加

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與對照組相比，β1-AA干預(yù)H9c2心肌細(xì)胞6 h細(xì)胞的凋亡水平明顯增加(P<0.05)，見圖5。這提示β1-AA可以引起H9c2心肌細(xì)胞凋亡水平顯著升高。

6 抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以部分逆轉(zhuǎn)β1-AA誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞活力降低和凋亡增加

4-PBA預(yù)處理心肌細(xì)胞2 h可明顯逆轉(zhuǎn)β1-AA誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞活力降低。與β1-AA單獨(dú)處理組相比，0.5 mmol/L和1 mmol/L 4-PBA處理H9c2 細(xì)胞2 h后，再給予β1-AA干預(yù)的心肌細(xì)胞可見活力明顯升高(P<0.05)，然而，當(dāng)2.5 mmol/L和5 mmol/L濃度的4-PBA預(yù)處理心肌細(xì)胞后，與β1-AA單獨(dú)處理組相比細(xì)胞活力無明顯變化，提示4-PBA在0.5 mmol/L和1 mmol/L濃度可以明顯改善H9c2細(xì)胞活力，其中1 mmol/L 4-PBA對于心肌細(xì)胞活力的改善最明顯，因此我們選擇1 mmol/L 4-PBA 用于后續(xù)研究，見圖6。Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與β1-AA單獨(dú)處理組相比，1 mmol/L 4-PBA預(yù)處理H9c2細(xì)胞2 h，再給予β1-AA干預(yù)，心肌細(xì)胞的凋亡水平部分恢復(fù)(P<0.05)，見圖5。

討 論

本研究中，我們建立β1-AA主動(dòng)免疫大鼠模型，TUNEL結(jié)果顯示，主動(dòng)免疫大鼠心肌組織的凋亡率增加；利用Western blot和免疫組化方法發(fā)現(xiàn)β1-AA可以誘導(dǎo)心肌組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激明顯增強(qiáng)；同時(shí)采用親和層析法提純主動(dòng)免疫大鼠血清中的β1-AA作用于H9c2細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)β1-AA可以顯著降低心肌細(xì)胞活力，同時(shí)凋亡水平明顯升高。為進(jìn)一步探討β1-AA誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與凋亡之間的關(guān)系，本研究采用4-PBA抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以有效降低心肌細(xì)胞的凋亡，恢復(fù)細(xì)胞存活率，提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了β1-AA誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。

近年來，我國居民心血管疾病的患病率逐漸增加，心功能不全作為心血管疾病的終末階段，已經(jīng)成為心血管疾病的主要死亡原因。研究表明，在40%～60%心功能不全患者血清中均可檢測到高滴度的β1-AA[4]；β1-AA是針對β1-AR-ECII的自身抗體，人鼠同源性高達(dá)100%[8]。β1-AA可以與β1-AR結(jié)合發(fā)揮類激動(dòng)劑樣的作用，引起細(xì)胞內(nèi)cAMP含量積累，進(jìn)而影響細(xì)胞內(nèi)Ca2+的穩(wěn)態(tài)，引起心肌細(xì)胞死亡，最終導(dǎo)致心功能不全[9]。我們課題組前期研究也發(fā)現(xiàn)β1-AA長期存在可以導(dǎo)致大鼠心肌重構(gòu)和心臟功能受損[10]；而采用免疫吸附法去除心功能不全患者血清中的β1-AA可以大大改善心功能不全[11]。由此可見，β1-AA可以造成明顯的心肌損傷，進(jìn)而引起心功能不全，然而機(jī)制不清。

心肌細(xì)胞死亡在心功能不全的發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。研究報(bào)道，心肌細(xì)胞持續(xù)丟失可引起心功能不全，抑制心肌細(xì)胞死亡可有效改善心功能[12]。在本實(shí)驗(yàn)中，為了觀察β1-AA對H9c2心肌細(xì)胞死亡的影響，我們首先建立β1-AR-ECII主動(dòng)免疫大鼠模型，腹主動(dòng)脈采血后，采用親和層析法提純大鼠血清中的β1-AA，用于后續(xù)離體實(shí)驗(yàn)研究。本研究發(fā)現(xiàn)，1 μmol/L β1-AA作用于H9c2心肌細(xì)胞12 h時(shí)可以引起細(xì)胞活力明顯降低，36 h細(xì)胞活力降至最低，48 h細(xì)胞活力持續(xù)降低，提示β1-AA可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞死亡。細(xì)胞凋亡作為細(xì)胞程序性死亡的方式之一，可以維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)，然而，心肌細(xì)胞凋亡的持續(xù)存在可以增加心肌細(xì)胞死亡，導(dǎo)致心功能不全，采用caspase抑制劑Z-VAD-FMK可以有效抑制心肌細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而改善心肌的收縮和舒張功能，提示心肌細(xì)胞凋亡在心功能不全中發(fā)揮重要作用[13]。β1-AA

Figure 4.The reduced viability of H9c2 myocardial cells induced by β1-AA. Mean±SEM. n=6. * P<0.05, ** P<0.01 vs vehicle group.

可以激活心肌細(xì)胞cAMP依賴的蛋白激酶信號通路，引起caspase-3活化，導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，β1-AA主動(dòng)免疫2周時(shí)心肌組織中TUNEL染色陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，提示心肌組織凋亡明顯增加，同時(shí)，β1-AA直接作用于H9c2心肌細(xì)胞12 h后凋亡水平顯著增加。但是β1-AA如何誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡目前尚不十分清楚。

目前認(rèn)為有3條通路誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生：線粒體通路、死亡受體通路和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路[15-17]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路是新近發(fā)現(xiàn)的途徑，持續(xù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-凋亡途徑，引起細(xì)胞凋亡[18]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對刺激極為敏感，當(dāng)各種應(yīng)激誘導(dǎo)其功能紊亂時(shí)，誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激增強(qiáng)。GRP78是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激特異標(biāo)志分子[19]，CHOP，caspase-12已被證明介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-凋亡相關(guān)通路的關(guān)鍵分子[20]。因此，本研究選擇GRP78、CHOP和caspase-12來反映內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其相關(guān)凋亡通路的變化情況。有研究表明，β1-AR激活可以誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激增加，引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)志蛋白GRP78表達(dá)增加，同時(shí)發(fā)現(xiàn)CHOP和caspase-12蛋白表達(dá)也增加[21]。而使用β-AR拮抗劑美托洛爾可以有效抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[22]。那么，β1-AA同樣作為β1-AR的激動(dòng)劑，是否也會(huì)引起心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激激活呢？在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)，β1-AA主動(dòng)免疫大鼠2周時(shí)心肌組織GRP78、CHOP和caspase-12的蛋白表達(dá)與對照組相比無明顯變化，而β1-AA主動(dòng)免疫大鼠4周和8周時(shí)GRP78、CHOP和caspase- 12的蛋白表達(dá)水平明顯升高，提示β1-AA可以誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其相關(guān)凋亡通路的激活。

Figure 6.Decreased cell viability induced by β1-AA was partially recovered by endoplasmic reticulum stress inhibitor 4-PBA. The H9c2 myocardial cells was pretreated with 4-PBA (0 mmol/L, 0.5 mmol/L, 1 mmol/L, 2.5 mmol/L and 5 mmol/L) for 2 h before adding β1-AA (1 μmol/L), and CCK-8 assay was performed to measured the cell viability. Mean±SEM. n=9. * P<0.05 vs vehicle group; # P<0.05, ## P<0.01 vs β1-AA group.

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激作為細(xì)胞凋亡的主要通路之一，其功能的抑制對細(xì)胞凋亡具有改善作用。4-PBA是一種化學(xué)分子伴侶，穩(wěn)定蛋白質(zhì)構(gòu)象，改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)折疊和轉(zhuǎn)運(yùn)，緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的特異性抑制劑。有研究表明，4-PBA可以抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激改善心肌細(xì)胞的凋亡水平[23]。為了進(jìn)一步驗(yàn)證內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在β1-AA誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中發(fā)揮何種作用，本研究采用1 mmol/L 4-PBA預(yù)處理H9c2心肌細(xì)胞后，再加β1-AA干預(yù)，通過Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4-PBA預(yù)處理H9c2心肌細(xì)胞后可降低β1-AA誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡水平，同時(shí)，通過CCK-8法檢測細(xì)胞的存活率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)4-PBA的預(yù)處理可以有效提高β1-AA誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞的活力。這些結(jié)果提示抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以有效逆轉(zhuǎn)β1-AA誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。

綜上所述，本研究證實(shí)β1-AA的長期持續(xù)存在可以引起心肌細(xì)胞活力降低，心肌細(xì)胞凋亡水平增加，同時(shí)發(fā)現(xiàn)β1-AA誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其相關(guān)凋亡途徑激活，采用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-PBA可以有效改善β1-AA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡水平增加和活力下降，提示β1-AA可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡。因此，早期合理調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，進(jìn)而調(diào)控心肌細(xì)胞凋亡，可能有效減少心肌細(xì)胞丟失，改善心功能。這為治療β1-AA陽性患者的心功能不全提供新的理論依據(jù)。