復(fù)方扶正養(yǎng)肝顆粒定性鑒別研究

陳凌云 陳坤 王華寧

摘要：目的 建立復(fù)方扶正養(yǎng)肝顆粒的定性鑒別方法。方法 采用薄層色譜法對處方茵陳、白芍、郁金、甘草進行定性鑒別。結(jié)果 薄層鑒別色譜斑點清晰、專屬性強，陰性對照無干擾。結(jié)論 該方法專屬性強、重現(xiàn)性好、操作簡便，可用于復(fù)方扶正養(yǎng)肝顆粒的定性鑒別。

關(guān)鍵詞：復(fù)方扶正養(yǎng)肝顆粒;薄層鑒別;茵陳;白芍;郁金;甘草

中圖分類號：R286.0 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2018）08-0075-03

扶正養(yǎng)肝湯由黃芪、白術(shù)、柴胡、白芍、土茯苓等11味藥物組成，具有扶正固本，清熱利濕、解毒化濁之功效。該方為云南省中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科用于治療病毒性肝炎的協(xié)定處方，前期臨床及實驗研究表明，扶正養(yǎng)肝方對病毒性肝炎患者肝功能具有較好改善作用，明顯降低Con A誘導(dǎo)免疫性肝損傷模型小鼠血清ALT和AST，下調(diào)細胞因子IFN-γ表達[1-2]，其作用機制可能與下調(diào)Fas mRNA基因表達，抑制肝細胞凋亡有關(guān)[3]。該方原為湯劑，為使患者服用方便，便于攜帶，本研究擬將其開發(fā)成醫(yī)療機構(gòu)制劑。為更好的對該制劑進行質(zhì)量控制，本研究采用薄層色譜法，建立了扶正養(yǎng)肝顆粒中茵陳、白芍、郁金、甘草的薄層鑒別方法，為扶正養(yǎng)肝的的質(zhì)量標準的完善、充實提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

KMDOS-SK250H超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），SartoriusBT25S電子分析天平（Xs25A瑞士普利賽斯儀器公司，d=0.00001 g）;雙槽展開缸（20cm × 10cm）;硅膠G薄層板;茵陳對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120950-201608）;白芍對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120905-201109）;郁金對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120949-201407）;甘草對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120904-201519）;院內(nèi)自制扶正養(yǎng)肝顆粒（編號：20170801、20170802、20170803）。

2 方法與結(jié)果

2.1 茵陳薄層鑒別[4-5] 取本品粉末5 g，加石油醚30 mL，超聲處理10 min，濾過，棄去石油醚，藥渣揮干，加稀鹽酸1 mL與乙酸乙酯30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加2 mL甲醇溶解，作為供試品溶液。另取茵陳對照藥材2 g及缺茵陳藥材的陰性對照樣品5 g，同法制成對照藥材溶液及陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部通則0502）試驗，吸取陰性對照溶液和供試品溶液各20 μL，對照品溶液4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）為展開劑，展開，取出，晾干，氨熏后置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點，且陰性無干擾。結(jié)果見圖1。

1.陰性對照;2.茵陳對照藥材;3.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170801;4.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170802;5.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170803;吸附劑：硅膠G;展開劑：甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）;顯色方法：氨熏;檢視條件：紫外燈下365nm

圖1 郁金TLC色譜圖

2.2 白芍薄層鑒別[6-8] 取本品粉末5 g，加乙醇25 mL，振搖5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取白芍對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取陰性樣品5 g，同法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版四部附錄0502）試驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點，且陰性無干擾。結(jié)果見圖2。

1.白芍對照藥材;2.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170801;3.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170802;4.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170803;5.陰性對照;吸附劑：硅膠G板;展開劑：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸（40：5：10：0.2）;顯色條件：5%香草醛硫酸溶液;檢視條件：日光

圖2 白芍TLC色譜圖

2.3 郁金薄層鑒別[9-10] 取本品粉末5 g，加石油醚（60-90℃）50 mL，超聲10 min，過濾，濾液揮干，殘渣加甲醇2mL使

1.郁金對照藥材;2.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170801;3.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170802;4.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170803;5.陰性對照;吸附劑：硅膠G板;展開劑：石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）;顯色條件：10%硫酸乙醇溶液;檢視條件：紫外燈下365nm

圖3 郁金TLC色譜圖

溶解，作為供試品溶液。另取郁金藥材2 g，加石油醚（60-90℃）20 mL，同法制成對照藥材溶液。再取陰性樣品5 g，同法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版四部附錄0502）試驗，吸取對照品溶液20 μL、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，點于同一硅膠G板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）為展開劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點，陰性無干擾。結(jié)果見圖3。

2.4 甘草薄層鑒別[11] 取本品粉末1 g，加乙醚40 mL，加熱回流1 h，濾過，棄去醚液，藥渣加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇5mL使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。再取陰性樣品1 g，同法制得為陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版四部附錄0502）試驗，吸取上述三種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色淸晰，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色熒光斑點，且陰性對照無干擾。

1.甘草對照藥材;2.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170801;3.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170802;4.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170803;5.陰性對照;吸附劑：硅膠G板;展開劑：乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）;顯色條件：10%硫酸乙醇溶液;檢視條件：紫外燈下365nm

圖4 甘草TLC色譜圖

3 討論

本品由黃芪、茵陳、牡丹皮、土茯苓等11味藥組成，成分較為復(fù)雜，本次質(zhì)量標準研究中對黃芪、茵陳、牡丹皮、土茯苓、垂盆草、甘草、郁金、丹參、薏苡仁、牡丹皮等10味藥的TLC鑒別方法進行了研究，其中垂盆草、丹參、牡丹皮、薏苡仁、土茯苓未能找到合適的TLC鑒別方法，而黃芪因測定了其含量，因此，選取了茵陳、白芍、郁金、甘草4味藥的進行TLC鑒別。在茵陳的薄層鑒別中，先后采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：6）、甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10：3：0.2）、石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-丙酮（6：3：0.5）為展開系統(tǒng)，但結(jié)果顯色供試品斑點不明顯且不清晰，或陰性有干擾，經(jīng)摸索，用調(diào)整后的方法結(jié)果斑點清晰、重復(fù)性好。

參考文獻：

[1]王華寧，余澤云，王宇靜，等.扶正養(yǎng)肝方治療慢性乙型肝炎60例[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2010，8（12）：236.

[2]王華寧，何小林，余澤云，等.扶正養(yǎng)肝方對免疫性肝損傷小鼠的保護作用及作用機制[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2013，21（8）：400.

[3]萬春平，祁燕，張興宗，等.扶正養(yǎng)肝方對急性免疫性肝損傷抗肝細胞凋亡及凋亡相關(guān)分子表達的研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2015，26（12）：2820-2822.

[4]付延偉，紀松崗，李明春，等.復(fù)方茵陳顆粒的質(zhì)量標準研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，2015，31（01）：53-56.

[5]沈洪寬，宋岳，劉曉鳳，等.茵陳降黃膠囊質(zhì)量標準研究[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2012，35（05）：88.

[6]祁紅，劉傳統(tǒng).百合健脾潤肺膠囊質(zhì)量標準研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2011，32（07）：68-70.

[7]刁娟娟，李小玲，李新霞.益膚丸的薄層色譜鑒別[J].中國現(xiàn)代中藥，2016，18（10）：1335-1340.

[8]程艷芹，紀松崗，馬燕，等.內(nèi)消顆粒的質(zhì)量標準研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，2016，32（01）：35-38+73.

[9]李婷，葉豆丹，鮑慧瑋，等.治郁顆粒的成型工藝及質(zhì)量控制[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，20（06）：19-22.

[10]趙穎，李文，劉永年，等.歡天安神飲的質(zhì)量標準研究[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析，2016，16（05）：633-635.

[11]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：87.

（收稿日期：2018-03-19）