高遷移率族蛋白B1在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)水平研究*

（吉林大學(xué)第一醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，吉林 長(zhǎng)春 130021）

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是常見(jiàn)的系統(tǒng)性自身免疫性疾病，以滑膜炎和血管炎為主要病理特點(diǎn)[1-2]。近年來(lái)，隨著對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的深入研究，發(fā)現(xiàn)高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein1, HMGB1）是新型的人類(lèi)慢性關(guān)節(jié)炎相關(guān)炎癥介質(zhì)[3]。HMGB1具有介導(dǎo)致死性全身炎癥反應(yīng)的“晚期”炎癥介質(zhì)作用，可表達(dá)在細(xì)胞核及釋放于血清中[4-5]。因此，認(rèn)為HMGB1在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[6]。本文研究旨在探討HMGB1在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的表達(dá)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2017年5月-2018年5月在吉林大學(xué)第一醫(yī)院行關(guān)節(jié)置換術(shù)或滑膜清理術(shù)的類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者49例作為研究組。其中，男性18例，女性31例；年齡36～72歲，平均（53.42±6.47）歲。另選取該院同期行手術(shù)治療的骨關(guān)節(jié)炎患者30例作為對(duì)照組。其中，男性11例，女性19例；年齡39～71歲，平均（54.83±7.25）歲。所有研究對(duì)象經(jīng)本院倫理委員會(huì)審核，且獲得知情同意，簽訂知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 血清標(biāo)本采集 所有研究對(duì)象入院后第3天清晨空腹采集外周靜脈血，分離血清，離心半徑15 cm，2 500 r/min離心10 min，置于-20℃待測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定HMGB1含量，嚴(yán)格按照人HMGB1試劑盒（上海晶抗生物工程有限公司）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.2 鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)（streptavidin-perosidase, SP）法 取保存的所有研究對(duì)象的病損關(guān)節(jié)滑膜組織石蠟病理切片標(biāo)本，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，DAB顯色，蘇木精復(fù)染、脫水、透明、封固。HMGB1單克隆抗體（美國(guó)RD公司），HMGB1一抗工作濃度1∶40，二抗即為免疫組織化學(xué)HistostainTM染色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。每張切片取5個(gè)400倍視野，由本院2名資深病理科醫(yī)生采用盲法評(píng)分。HMGB1表達(dá)主要在細(xì)胞核，染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：①3分，染色呈棕褐色；②2分，染色呈黃色；③1分，染色呈淡黃色；④0分，無(wú)染色。陽(yáng)性細(xì)胞率評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：①4分，陽(yáng)性細(xì)胞率＞75%；②3分，陽(yáng)性細(xì)胞率51%～75%；③2分，陽(yáng)性細(xì)胞率為26%～50%；④1分，陽(yáng)性細(xì)胞率≤25%；⑤0分，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組血清HMGB1水平比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），研究組高于對(duì)照組。兩組HMGB1陽(yáng)性表達(dá)率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），研究組高于對(duì)照組。兩組SP法染色評(píng)分比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），研究組高于對(duì)照組。見(jiàn)附表和附圖。

附表 兩組患者血清HMGB1水平、HMGB1陽(yáng)性表達(dá)率及SP法染色評(píng)分比較 （±s）

附表 兩組患者血清HMGB1水平、HMGB1陽(yáng)性表達(dá)率及SP法染色評(píng)分比較 （±s）

組別 HMGB1/（ng/ml）HMGB1陽(yáng)性表達(dá)率/% 染色評(píng)分研究組（n =49） 17.83±2.17 41（83.67） 6.73±0.91對(duì)照組（n =30） 7.27±0.93 14（46.67） 2.13±0.54 t/χ2值 25.225 12.049 25.079 P值 0.000 0.000 0.000

附圖 兩組滑膜組織HMGB1的表達(dá)

3 討論

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn)涉及關(guān)節(jié)局部和全身癥狀，而其病理改變中關(guān)節(jié)損傷最常見(jiàn)的[7]。目前，類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚，發(fā)現(xiàn)自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的免疫功能紊亂和炎癥因子在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中發(fā)揮重要作用[8-9]。

HMGB1是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新型晚期炎癥因子，廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)，并在大部分真核細(xì)胞中表達(dá)豐富[10-11]。HMGB1主要由215個(gè)氨基酸殘基組成，具有雙重職能，當(dāng)機(jī)體細(xì)胞處于穩(wěn)態(tài)時(shí)其主要存在于細(xì)胞核，其功能主要為結(jié)合DNA參與穩(wěn)定核小體，可調(diào)節(jié)DNA復(fù)制、修復(fù)、轉(zhuǎn)錄等[12]。遇到外界相應(yīng)的信號(hào)刺激時(shí)，HMGB1通過(guò)活化的免疫細(xì)胞主動(dòng)分泌到胞外，并且有受損及壞死的細(xì)胞被動(dòng)釋放到胞外而發(fā)揮生物學(xué)活性[13]。HMGB1通過(guò)與受體相互作用，包括TLR2、TLR4、RAGE及其他協(xié)同作用的炎癥介質(zhì)共同引起反應(yīng)，包括維持和啟動(dòng)下游級(jí)聯(lián)式炎癥反應(yīng)，以及激活相關(guān)信號(hào)通路等。越來(lái)越多研究表明，HMGB1以其免疫刺激性和促炎性作為發(fā)病源促進(jìn)自身免疫性疾病和慢性炎癥性疾病的發(fā)展，在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病進(jìn)程中發(fā)揮重要作用[14-15]。PALMLAD等[16]研究顯示，在CIA大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞、滑膜成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及細(xì)胞外間隙中HMGB1呈高表達(dá)。徐力等[17]研究報(bào)道，活動(dòng)期類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清HMGB1水平高于正常對(duì)照組和緩解期組，且與紅細(xì)胞沉降率、類(lèi)風(fēng)濕因子和C反應(yīng)蛋白呈正相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)研究顯示，HMGB1可對(duì)多種細(xì)胞產(chǎn)生作用，并且其破骨細(xì)胞生成過(guò)程中可有破骨細(xì)胞及其前體細(xì)胞產(chǎn)生，且作用于本身刺激破骨細(xì)胞分化成熟[18]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中，在顯微鏡下給予重組HMGB1蛋白于大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射，結(jié)果顯示可導(dǎo)致關(guān)節(jié)輕、中度滑膜，同時(shí)使用重組HMGB1boxA蛋白或HMGB1抗體干預(yù)原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型后，其滑膜炎癥有所緩解，由此可見(jiàn)，HMGB1在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病中起重要作用[19]。本研究中研究組血清HMGB1水平高于對(duì)照組，說(shuō)明類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清HMGB1水平升高；研究組HMGB1陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，說(shuō)明類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者HMGB1呈高表達(dá)。

綜上所述，HMGB1在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中高表達(dá)，其可能在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組織損傷發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，可作為類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎輔助診斷指標(biāo)之一。