高效液相色譜法測定復(fù)方銀翹氨敏膠囊中馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度

吳曉燕，唐 琨，尚春燕

（1.四川省樂山市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，四川 樂山 614000； 2.樂山職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川 樂山 614000）

復(fù)方銀翹氨敏膠囊（曾用名：雙撲維C銀翹膠囊、維C銀翹膠囊）為常見抗感冒藥，是由對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏、維生素C及銀翹浸膏等組方的中西藥復(fù)方制劑，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)（第四冊）》［1］，但僅對維生素C和對乙酰氨基酚的含量進(jìn)行了測定，對處方中具有較強(qiáng)抗組胺作用的馬來酸氯苯那敏并未規(guī)定明確的測定方法。本研究中采用高效液相色譜法對該品種中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度［2-7］進(jìn)行了測定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，Agilent OpenLAB色譜工作站，二極管陣列檢測器（美國安捷倫科技有限公司）；XS205 DualRange型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

馬來酸氯苯那敏對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為 100047-2015-07，按 C16H19ClN2·C4H4O4計(jì)，含量為99.7%）；復(fù)方銀翹氨敏膠囊（委托企業(yè)，四川彩虹制藥有限公司，受托企業(yè)，四川恩威制藥有限公司，批號為 170311，170501，170314）；甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀、三乙胺為分析純，試驗(yàn)用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜條件：Waters XTerra RP18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：A 相為甲醇，B 相為 0.02 mol／L 磷酸二氫鉀溶液-三乙胺（100∶0.1），梯度洗脫（0～5min，A 相15%→15%；5～15 min，A 相 15%→75%；15～25 min，A 相 75→15% ）；檢測波長：262 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

對照品溶液：取馬來酸氯苯那敏對照品11.82 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加30%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取復(fù)方銀翹氨敏膠囊20粒，計(jì)算平均裝量，取適量（約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏1.13 mg），精密稱定，置50 mL容量瓶中，加30%甲醇溶液20 mL，超聲處理10 min，加30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液（供含量測定用）。另取本品1粒，置50mL容量瓶中，加30%甲醇溶液20mL，超聲處理10 min，加30%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液（供含量均勻度檢查用）。

陰性對照品溶液：按處方配制不含馬來酸氯苯那敏的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制，即得。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取馬來酸氯苯那敏對照品溶液、供試品溶液（含量測定用）和陰性對照品溶液各10 μL，照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。詳見圖1。

線性關(guān)系考察：取馬來酸氯苯那敏對照品11.44 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加30%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為 456.23 μg／mL 的對照品貯備液。精密量取上述對照品貯備液適量，以30%甲醇溶液為溶劑，分別制成質(zhì)量濃度為4.56，18.25，45.62，68.43，91.24，114.06 μg ／mL 的溶液，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以對照品溶液質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（以氯苯那敏計(jì)，下同，Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y ＝13.933 X-0.506 2，r＝0.999 9（n＝6）。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在4.56～114.06 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn)：取批號為170311的復(fù)方銀翹氨敏膠囊，照2.2項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，分別精密量取各溶液10 μL，每份進(jìn)樣2次，記錄色譜圖。結(jié)果馬來酸氯苯那敏平均含量為標(biāo)示量的102.34%，RSD為1.30%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取前述質(zhì)量濃度為45.62μg／mL的對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果的 RSD為0.18%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取批號為170311的樣品，依法制備供試品溶液，室溫放置，分別于 0，2，4，6，8，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣，測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.20% （n＝7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取批號為170311且已知含量的樣品適量（約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏0.6 mg），精密稱定，分別置6個(gè)50 mL容量瓶中，分別精密加入線性關(guān)系考察項(xiàng)下對照品貯備液1 mL，依法制備供試品溶液，精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

2.4 樣品測定

含量測定：取3種批號的復(fù)方銀翹氨敏膠囊各3 份，依法制備供試品溶液，精密量取 10 μL，照 2.1 項(xiàng)下色譜條件測定，記錄峰面積，計(jì)算標(biāo)示含量。結(jié)果3批樣品中馬來酸氯苯那敏的平均標(biāo)示含量分別為102.61%，104.20%，103.84%（n ＝3）。

表1 馬來酸氯苯那敏加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

含量均勻度測定：取3種批號的樣品各10粒，依法制備供試品溶液，精密量取各10 μL，照2.1項(xiàng)下色譜條件測定，記錄色譜峰峰面積（以氯苯那敏計(jì)），按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表2，符合2015年版《中國藥典（二部）》通則0941含量均勻度項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定（A+2.2 S≤L，L ＝ 15.0）。

表2 樣品含量均勻度測定結(jié)果（n＝3）

3 討論

3.1 檢測波長及流動相選擇

根據(jù)對照品溶液紫外光譜圖分析，馬來酸氯苯那敏在215 nm和262 nm波長處有最大吸收，同時(shí)參考2015年版《中國藥典（二部）》馬來酸氯苯那敏含量測定項(xiàng)下的色譜條件［8］，最終選擇262 nm為檢測波長。比較流動相 B分別為 0.02 mol／L磷酸二氫鉀溶液或0.02 mol／L 磷酸二氫鉀溶液 -三乙胺（100 ∶0.1）對色譜峰的影響。結(jié)果當(dāng)流動相B為后者時(shí)，氯苯那敏峰形有明顯提高，且基線平穩(wěn)。

3.2 洗脫方式選擇

比較了等度洗脫和梯度洗脫的分離效能。當(dāng)采用流動相A-流動相B（30∶70）等度洗脫時(shí)，氯苯那敏峰與其他相鄰成分峰不能達(dá)到有效分離，而在梯度洗脫程序下，氯苯那敏峰分離度好，且保留時(shí)間在20 min內(nèi)，故采用梯度洗脫方法更適宜。

3.3 定量峰選擇

在研究中的色譜條件下，馬來酸氯苯那敏出現(xiàn)馬來酸與氯苯那敏2個(gè)峰［9-12］，但馬來酸出峰時(shí)間早，易與溶劑峰和維生素C色譜峰重疊，且氯苯那敏為有效成分，故選擇氯苯那敏峰進(jìn)行定量。