肝細(xì)胞癌中磷脂酶CE1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)

于 敏 林哲洙 張 紅 (錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院普外三科，遼寧 錦州 121001)

肝細(xì)胞癌是起源于肝細(xì)胞的惡性上皮性腫瘤，病變形成過程中細(xì)胞可發(fā)生一系列異型增生的特征〔1〕。磷脂酶Cε(PLCE)1是PLC基因編碼的蛋白，也是磷脂酰肌醇信號(hào)通路中有明顯作用的關(guān)鍵酶〔2〕。近年研究顯示PLCE1能被各種G蛋白水解，使細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存的鈣離子釋放，并對(duì)一些基因的表達(dá)有一定影響，并協(xié)同調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移的進(jìn)程〔3〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在腫瘤中表達(dá)升高，其具有癌基因的作用，同時(shí)對(duì)腫瘤間質(zhì)的血管生成有一定的促進(jìn)作用〔4〕。本文關(guān)注肝細(xì)胞癌中PLCE1和VEGF表達(dá)，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2015年1月至2016年12月錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院確診并行手術(shù)治療的肝細(xì)胞癌患者59例為觀察組，均經(jīng)病理學(xué)確診，并符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)及分型。其中男31例，女28例，年齡46～79歲，平均(61.9±9.9)歲?；颊咝g(shù)前均未行放、化療。選取距腫瘤邊緣＞3 cm的正常肝組織27例為對(duì)照組，其中男14例，女13例，年齡47～76歲，平均(60.4±8.6)歲。兩組在性別、年齡等常規(guī)因素的比較中無明顯差異，具有可比性。

1.2 免疫組化檢測(cè)PLCE1和VEGF的表達(dá) 兩組術(shù)后標(biāo)本均應(yīng)用中性甲醛溶液固定、脫水、石蠟包埋。PLCE1和VEGF兩種試劑均為濃縮液，按不同配比濃度進(jìn)行稀釋，選擇最理想的濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。切取4 μm切片后應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)PLCE1和VEGF的表達(dá)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，按實(shí)驗(yàn)說明書進(jìn)行操作，做好質(zhì)控工作。

1.3 PLCE1和VEGF判讀 PLCE1和VEGF均定位于細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞質(zhì)中有不同程度的棕黃和棕褐色為陽性表達(dá)。結(jié)果以陽性著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比評(píng)分之和來評(píng)定。著色強(qiáng)度評(píng)分:無著色為0分;弱著色為1分，中等程度著色為2分，強(qiáng)著色為3分。選擇5個(gè)高倍視野進(jìn)行陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)，取其平均值;陽性細(xì)胞百分比，以＜5%為0分，以5%～10%為1分，以11%～25%為2分，以26%～50%為3分，以＞50%為4分。兩項(xiàng)之和為最終評(píng)定結(jié)果。取兩項(xiàng)評(píng)分之和的值作為最終評(píng)分結(jié)果?！?分為陰性，以＞3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中PLCE1和VEGF蛋白的表達(dá) 兩組中PLCE1和VEGF表達(dá)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

2.2 PLCE1和VEGF在觀察組不同臨床特征中表達(dá)陽性率的比較 觀察組中PLCE1和VEGF的表達(dá)與腫瘤最大徑、增殖指數(shù)密切相關(guān)，PLCE1的表達(dá)與腫瘤的分化程度相關(guān)。二者均與神經(jīng)侵犯無明顯相關(guān)性。見表2。

2.3 觀察組中PLCE1和VEGF表達(dá)的相關(guān)性PLCE1和VEGF的表達(dá)無明顯相關(guān)性(P=0.143 2)。

表1 兩組PLCE1和VEGF蛋白的陽性表達(dá)〔n(%)〕

表2 PLCE1和VEGF在觀察組不同臨床特征中表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

3 討論

肝細(xì)胞癌最常見的病因包括病毒因素、飲食因素及酗酒等。乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的慢性感染是病變的最主要的病因。在上述因素的持續(xù)作用下，肝細(xì)胞發(fā)生異型增生，癌變，進(jìn)而形成肝細(xì)胞癌。病變可以形成大小不等的結(jié)節(jié)，內(nèi)有匯管區(qū)和輸出靜脈，結(jié)節(jié)被寬而不規(guī)則的結(jié)締組織和瘢痕所分隔〔5〕。這些結(jié)節(jié)均由類似肝細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞組成，間質(zhì)由襯覆單層內(nèi)皮細(xì)胞的血竇樣腔隙所組成，形成“毛細(xì)血管化”的特征。因此間質(zhì)的血管內(nèi)皮生成對(duì)腫瘤的形成和進(jìn)展有明顯的促進(jìn)作用〔6〕。PLCE1能通過催化多磷酸肌醇如磷脂酰肌醇4，5-二磷酸鹽水解，產(chǎn)生第二信使三磷酰肌醇和二酯酰甘油，促進(jìn)鈣離子的釋放，引發(fā)蛋白激酶(PK)C過表達(dá)，并結(jié)合更多的PKC同工酶的目標(biāo)蛋白〔7，8〕，參與細(xì)胞信號(hào)的傳導(dǎo)，調(diào)控基因表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、細(xì)胞凋亡及血管新生〔9，10〕。VEGF是血管生成的促進(jìn)因子，可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的繁殖和生長(zhǎng)，同時(shí)對(duì)枝芽狀血管管腔形成有一定的促進(jìn)作用〔11，12〕。VEGF是癌基因的一種，腫瘤細(xì)胞可以高度分泌，其表達(dá)上調(diào)后引發(fā)腫瘤間質(zhì)的血管生成，在作用過程中通過其受體VEGF受體2發(fā)揮作用，并能有效促進(jìn)CD31、CD34等陽性血管內(nèi)皮生成〔13，14〕。

本研究結(jié)果提示PLCE1和VEGF二者高表達(dá)對(duì)肝細(xì)胞癌的發(fā)生有重要作用，PLCE1和VEGF在病變過程中可能具有促進(jìn)上皮細(xì)胞異型增生和惡性轉(zhuǎn)化的作用。PLCE1和VEGF二者高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)及Ki67陽性的細(xì)胞增生，使細(xì)胞數(shù)量明顯增加，失控性增生明顯，細(xì)胞體積增大，腫瘤的侵襲能力升高，惡性潛能增加。Cheng等〔15〕在膀胱腫瘤中發(fā)現(xiàn)敲除細(xì)胞的PLCE1基因可以抑制腫瘤的增殖能力，降低增殖細(xì)胞核心抗原的表達(dá)水平和CylclinD1表達(dá)，并通過抑制PLCE/PKC通路來減少癌基因C-jun的表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞的增生和繁殖。本文結(jié)果提示PLCE1升高時(shí)可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化進(jìn)程。分化是細(xì)胞在發(fā)育過程中的一系列表現(xiàn)，也是細(xì)胞生長(zhǎng)過程中不同時(shí)期細(xì)胞形態(tài)的反映，PLCE1表達(dá)升高可以使細(xì)胞停滯于幼稚階段，腫瘤細(xì)胞趨于原始，腫瘤細(xì)胞異型性明顯，核的染色深。本文結(jié)果提示PLCE1和VEGF不是促進(jìn)腫瘤嗜神經(jīng)生長(zhǎng)的因子。PLCE1和VEGF均有促進(jìn)血管生成的作用，但是二者調(diào)節(jié)血管生成的機(jī)制可能完全不同，也不在同一通路上。PLCE1對(duì)血管的調(diào)控可能是間接的，與機(jī)體中其他蛋白協(xié)同作用后，進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖。而VEGF對(duì)腫瘤血管生成的調(diào)節(jié)是直接的，通過分泌作用，直接促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)〔16，17〕。