口腔念珠菌感染患者口內(nèi)菌株的檢出情況和藥敏性觀(guān)察

徐 力

（遼寧省盤(pán)錦市大洼區(qū)人民醫(yī)院 口腔科，遼寧 盤(pán)錦 124200）

口腔念珠菌感染為條件致病性真菌，患者可能是伴發(fā)臨床體征的口腔念珠菌病，也可能是不伴有臨床癥狀的健康帶菌者[1]。近些年因?yàn)殚_(kāi)展了越來(lái)越多的器官移植治療，同時(shí)廣譜抗生素及其他各類(lèi)藥物應(yīng)用的不斷增加，使得臨床出現(xiàn)更多口腔念珠菌感染病例[2]。本研究具體分析口腔念珠菌感染患者口內(nèi)菌株的分布情況，同時(shí)分析其藥敏結(jié)果，以期為臨床用藥提供相應(yīng)指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：回顧性分析2017年1月至2018年1月本院口腔念珠菌感染患者70例，男21例，女49例，平均年齡19～76（59.28±5.36）歲，將這70例患者視作觀(guān)察組。另外選取50例健康者作為對(duì)照組，包括男17例，女33例，平均年齡20～76（60.07±5.53）歲。對(duì)照組患者均除外伴有口腔黏膜病、齲病、牙周病，患者均沒(méi)有抗生素、抗真菌藥物、免疫抑制劑、激素長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)使用史。兩組各項(xiàng)基本資料比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

1.2 方法：于病損位置利用無(wú)菌棉簽沾濕氯化鈉溶液后進(jìn)行標(biāo)本采集，通過(guò)顯微鏡對(duì)菌絲、孢子進(jìn)行觀(guān)察，在SDA上種好標(biāo)本，進(jìn)行持續(xù)2 d時(shí)間的培養(yǎng)。然后在念珠菌顯色培養(yǎng)基上完成菌種的轉(zhuǎn)種，持續(xù)給予2 d時(shí)間的培養(yǎng)，分析培養(yǎng)結(jié)果。將念珠菌菌種通過(guò)SDA設(shè)置37 ℃的溫度進(jìn)行持續(xù)24 h的培養(yǎng)，進(jìn)行2次活化，保證其為指數(shù)生長(zhǎng)期的后期。利用氯化鈉溶液5 mL溶合菌落（直徑超過(guò)1 mm）進(jìn)行混懸液的制作，借助血細(xì)胞計(jì)數(shù)板調(diào)節(jié)濃度為（1～5）×106CFU/mL。通過(guò)RPMI 1640 液體培養(yǎng)基完成稀釋處理（1000倍）。體外藥敏試驗(yàn)通過(guò)微量液體稀釋法進(jìn)行，通過(guò)二甲基亞砜溶液將制霉菌素、伊曲康唑、特比萘芬溶解，制為1600、1600、12800 μg/mL溶度的貯存液，通過(guò)雙蒸水將氟康唑溶解，制為貯存液（濃度1280 μg/mL），置于-20 ℃冰箱中保存等待使用。室溫環(huán)境下溶化貯存液，借助RPMI1640液體培養(yǎng)基完成稀釋。進(jìn)行藥敏試驗(yàn)時(shí)，將氟康唑、特比萘芬起始質(zhì)量濃度保持為64 μg/mL，然后完成倍比稀釋?zhuān)菇K質(zhì)量濃度保持為0.5～64 μg/mL。進(jìn)行單用藥敏試驗(yàn)時(shí)控制伊曲康唑、制霉菌素終質(zhì)量濃度為0.03～16 μg/mL，氟康唑、特比萘芬在0.5～256 μg/mL。

最后進(jìn)行藥敏反應(yīng)板的制備，并將其置入37 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中實(shí)施持續(xù)2 d時(shí)間的濕盒孵，確定ATCC 6258以及90028 標(biāo)準(zhǔn)株作為本研究的質(zhì)控菌株，進(jìn)行持續(xù)48 h的培養(yǎng)，對(duì)照陰性空白對(duì)照孔、生長(zhǎng)陽(yáng)性對(duì)照孔。

1.3 試驗(yàn)評(píng)價(jià)。①視覺(jué)判定法：念珠菌菌種判定依據(jù)菌鑒定培養(yǎng)基上菌落的顏色進(jìn)行，如果為藍(lán)灰色或者鐵藍(lán)色，則為熱帶念珠菌菌落；如果為紫色，則為光滑念珠菌菌落；白色念珠菌菌落顏色是綠色或者翠綠色；其他念珠菌菌落是白色。②最低抑菌濃度（MIC）：特比萘芬的MIC是培養(yǎng)基清亮相應(yīng)的最低藥物濃度，制霉菌素的MIC是生長(zhǎng)完全抑制相應(yīng)的最低藥物濃度；伊曲康唑、氟康唑的MIC是生長(zhǎng)抑制80%或以上（對(duì)照生長(zhǎng)對(duì)照孔）相應(yīng)的最低藥物濃度。MIC有效標(biāo)準(zhǔn)為M27-A2范圍內(nèi)。有效率計(jì)算方法是劑量依賴(lài)菌株數(shù)所占敏感菌株數(shù)的比重。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：借助SPSS16.0軟件分析研究結(jié)果，[n（%）]表示計(jì)數(shù)資料，χ2檢驗(yàn)，P＜0.05則存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 口內(nèi)菌株檢出情況：觀(guān)察組和對(duì)照組120份標(biāo)本中有70株被檢出假絲酵母菌，檢出率58.33%，觀(guān)察組70份中假絲酵母菌有52份，占74.29%，對(duì)照組檢出18份，占25.71%，檢出率差異明顯，P＜0.05。兩組詳細(xì)菌株檢出情況見(jiàn)表1，白色念珠菌的檢出率最高，P＜0.05。

表1 兩組患者口內(nèi)菌株具體類(lèi)型檢出情況比較[n（%）]

2.2 藥敏結(jié)果：制霉菌素的敏感度有效性最高，特比萘芬最低，P＜0.05，伊曲康唑、氟康唑的敏感度有效率差異不明顯，P＞0.05，見(jiàn)表2。

表2 4種藥物對(duì)口腔念珠菌的作用分析[n（%）]

2.3 藥物MIC值：經(jīng)測(cè)定，特比萘芬聯(lián)合氟康哇使用的MIC值在0.125～8.000，氟康哇聯(lián)合特比萘芬在0.125～16.000，特比萘芬單用在1～128，氟康哇單用在0.15～64.00。

3 討 論

白色念珠菌是出現(xiàn)率最高的一類(lèi)真菌感染致病菌，本研究觀(guān)察組白色念珠菌占比61.54%，與結(jié)論相符。但是近些年隨著研究不斷深入，逐步發(fā)現(xiàn)了非白色念珠菌在治療口腔念珠菌病中的良好效果。念珠菌屬于機(jī)體共生菌的一種，為正常菌群，多出現(xiàn)在胃腸道以及口腔，如果機(jī)體菌群出現(xiàn)失調(diào)表現(xiàn)，免疫功能降低會(huì)進(jìn)展為條件致病菌，形成念珠菌病，甚至可能加重原發(fā)疾病，導(dǎo)致死亡[3]。

制霉菌素是廣泛應(yīng)用的一類(lèi)抗真菌藥，能夠部分結(jié)合菌膜上的固醇，將其通透性改變，對(duì)菌體起到破壞作用，從而實(shí)現(xiàn)有效治療[4]。本研究藥敏結(jié)果也顯示制霉菌素的敏感度有效性為100%，和結(jié)論具有一致性。特比奈芬為丙胺類(lèi)中的一種抗真菌藥物，研究顯示淺部白色念珠菌感染經(jīng)特比奈芬治療的有效率僅為56%～70%，本研究藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性為57.14%，與結(jié)論一致。研究發(fā)現(xiàn)氟康唑與伊曲康唑間有交叉不敏感，或者存在耐藥情況，主要是由于均為三唑類(lèi)藥物，在作用機(jī)制上存在交叉耐藥表現(xiàn)[5]。同時(shí)氟康唑、特比萘芬聯(lián)合應(yīng)用后MIC值均明顯低于單用結(jié)果，單獨(dú)應(yīng)用時(shí)菌株從不敏感轉(zhuǎn)變成敏感，表明特比萘芬、氟康唑聯(lián)合應(yīng)用能夠使白色念珠菌不敏感性菌株的生成得到延緩，使治療獲得更佳的效果[6]。

綜上所述，白色念珠菌是主要口腔念珠菌種，針對(duì)耐藥菌株的治療，可以選擇特比萘芬、氟康唑聯(lián)合應(yīng)用，能夠獲得更高的療效。