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    紫胡蘿卜花青素微膠囊工藝優(yōu)化

    2018-11-15 04:54:52劉戰(zhàn)霞程衛(wèi)東王斌劉玥彤李夢杰
    中國調(diào)味品 2018年11期
    關(guān)鍵詞:等高線圖壁材芯材

    劉戰(zhàn)霞,程衛(wèi)東,王斌,劉玥彤,李夢杰

    (石河子大學(xué) 食品學(xué)院,新疆 石河子 832000)

    紫胡蘿卜是胡蘿卜的一個(gè)品種,其顏色呈現(xiàn)紫黑色,花青素屬于多酚類物質(zhì)且是紫胡蘿卜重要的生物活性物質(zhì),不僅有較強(qiáng)的抗氧化能力,是一種天然、高效的抗氧化劑,還有預(yù)防高血壓、抗菌、抗炎、抗癌等作用,此外還有改善視力和眼部疲勞的功效[1-3]。花青素是一種水溶性色素,是植物的二級代謝產(chǎn)物,具有重要的生理作用,屬類黃酮化合物,是羥基的供體,能夠與蛋白質(zhì)結(jié)合防止過氧化,也可清除自由基及鰲合金屬離子[4-6]。微膠囊技術(shù)是當(dāng)今一種在食品工業(yè)領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛且發(fā)展迅速的新技術(shù)[7-9]。如今人們對綠色、健康的生活水平的不斷追求,功能保健產(chǎn)品也受到了廣大消費(fèi)者的關(guān)注,因此,會(huì)有廣闊的市場前景。作為功能保健品,其生理活性物質(zhì)是必不可少的,紫胡蘿卜花青素具有增強(qiáng)機(jī)體免疫、抗衰老、抗癌等活性[10]。

    紫胡蘿卜花青素對光、熱等十分敏感,這極大地限制了它的使用價(jià)值。因此我們將紫胡蘿卜花青素制成微膠囊[11],包埋、封存在一種具有聚合物的壁殼內(nèi),使其性能和生物活性不被暴露出來,提高它在功能性產(chǎn)品中的可用性,且促進(jìn)其生理功能的發(fā)揮[12]。目前國內(nèi)外對紫胡蘿卜微膠囊的研究還處于初步階段,因此,此研究為后續(xù)研究奠定了重要基礎(chǔ)[13]。

    1 材料與方法

    1.1 原料與試劑

    紫胡蘿卜:自有紫胡蘿卜種植基地提供。

    纖維素酶、果膠酶、麥芽糊精、大豆分離蛋白:均購自北京索萊寶科技有限公司;單甘脂:成都市科龍化工試劑廠;乙醇:分析純,北京化工。

    1.2 儀器與設(shè)備

    電子分析天平 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 南通經(jīng)典包裝有限公司;磁力攪拌器;標(biāo)準(zhǔn)型pH計(jì)、紫外分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司;恒溫水浴鍋 金壇市醫(yī)療儀器廠;噴霧干燥機(jī) 重慶干燥設(shè)備有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 原料預(yù)處理

    將新鮮的紫胡蘿卜洗干凈,切成小塊狀再干燥處理,用攪拌機(jī)打碎,放冰箱內(nèi)保存好。

    1.3.2 花青素的提取工藝

    取一定量打碎的紫胡蘿卜粉→加入雙酶(纖維素酶、果膠酶)→加入乙醇浸泡→抽濾→蒸去乙醇、水溶→測吸光值[14]。

    1.3.3 紫胡蘿卜花青素提取工藝優(yōu)化

    單因素影響試驗(yàn)主要考察復(fù)合酶比例(果膠酶∶纖維素酶)、加酶量、提取時(shí)間、提取溫度等因素對原花青素提取率的影響,試驗(yàn)重復(fù)3次。在前期單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)曲面法試驗(yàn)設(shè)計(jì)采用Box-Behnken模型,以復(fù)合酶比例(果膠酶∶纖維素酶)、加酶量、提取時(shí)間、提取溫度為主要考察因素(自變量)[15],Box-Behnken試驗(yàn)因素與水平見表1。

    表1 Box-Behnken試驗(yàn)因素與水平

    1.3.4 花青素提取率[16]

    花青素含量(mg/g)=A×Mw×DF×100/(ε×1)。

    式中:A為(OD533 nm,pH 2.0-OD700 nm,pH 2.0)-(OD533 nm,pH 4.5-OD700 nm,pH 4.5);Mw為矢車菊素葡萄糖苷的摩爾質(zhì)量,449.2 g/mol;DF為溶液的稀釋倍數(shù);ε為矢車菊素葡萄糖苷的摩爾消光系數(shù),26900 L/mol·cm。

    1.3.5 花青素微膠囊的制備工藝[17]

    壁材、水合乳化劑、芯材→均質(zhì)乳化→乳化噴霧干燥→微膠囊產(chǎn)品。

    避光,將花青素溶于乙醇中,加入一定量的乳化劑(單甘脂)制成芯材溶液,加入溶解好的壁材溶液,磁力攪拌均勻,得到的混合液經(jīng)膠體磨均質(zhì)乳化,在一定條件下進(jìn)行噴霧干燥,制成花青素微膠囊。

    1.3.6 微膠囊化工藝優(yōu)化

    1.3.6.1 單因素(以包埋率為指標(biāo))

    分別以不同的芯材壁材比例(1∶5,2∶5,3∶5,4∶5)、壁材比例(1∶5,2∶5,3∶5,4∶5)、固形物含量(15%,20%,25%,30%)、單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)(1.5%,2%,2.5%,3.0%)為影響因素,考察其對提取工藝的影響。

    1.3.6.2 正交試驗(yàn)

    根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,選取微膠囊化芯材壁材質(zhì)量比、壁材質(zhì)量比、固形物含量、 單甘酯添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)4個(gè)因素,每個(gè)因素確定4水平,按表2中L9(34)正交試驗(yàn),以微膠囊化效率為評價(jià)指標(biāo),確定最佳微膠囊化工藝。

    表2 正交試驗(yàn)方案

    1.3.7 微膠囊化的效果評定[18]

    微膠囊化效率和微膠囊化產(chǎn)率是評價(jià)微膠囊化效果的主要指標(biāo)。微膠囊化效率被定義為芯材原花青素實(shí)際被包埋量與理論被包埋量的比值,是衡量原花青素被包埋的程度;微膠囊化產(chǎn)率被定義為微膠囊產(chǎn)品中所含芯材原花青素與理論總原花青素含量之比[19]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 紫胡蘿卜中花青素提取的單因素試驗(yàn)

    2.1.1 復(fù)合酶比例(果膠酶∶纖維素酶)

    取色素溶液50 mL,加酶量2.0%,酶解溫度60 ℃, 酶解時(shí)間60 min,分別在復(fù)合酶比例為1∶1,1.5∶1,2∶1,2.5∶1 (g/g)進(jìn)行提取,提取結(jié)果見圖1。

    圖1 復(fù)合酶比例對花青素提取率的影響

    由圖1 可知,隨著復(fù)合酶比例的增大,花青素提取率的值先增大后減少。當(dāng)復(fù)合酶比例為1.5∶1 時(shí),花青素的提取率最大,這是由于當(dāng)復(fù)合酶比例低于1.5∶1時(shí),浸提不充分,不利于紫胡蘿卜中花青素的溶出。當(dāng)復(fù)合酶比例為1.5∶1 時(shí),紫胡蘿卜中花青素已基本溶解完全。因此,確定最佳的復(fù)合酶比例為1.5∶1。

    2.1.2 加酶量

    取色素溶液50 mL,復(fù)合酶比例1.5∶1, 酶解溫度60 ℃, 酶解時(shí)間60 min,加酶量分別在為1%,1.5%,2%,2.5%進(jìn)行提取,提取結(jié)果見圖2。

    圖2 加酶量比例對花青素提取率的影響

    由圖2 可知,隨著加酶量的增大,花青素提取率的值先增大后減少。當(dāng)加酶量為2.0% 時(shí),花青素的提取率最大,這是由于當(dāng)加酶量低于2.0% 時(shí),浸提不充分,不利于紫胡蘿卜中花青素的溶出。當(dāng)加酶量為2.0% 時(shí),紫胡蘿卜中花青素已基本溶解完全。因此,確定最佳的加酶量為2.0%。

    2.1.3 酶解時(shí)間

    取色素溶液50 mL,復(fù)合酶比例1.5∶1,加酶量2.0%, 酶解溫度60 ℃ ,酶解時(shí)間分別在為30,60,90,120 min進(jìn)行提取,提取結(jié)果見圖3。

    圖3 酶解時(shí)間對花青素提取率的影響

    由圖3可知,當(dāng)酶解時(shí)間為60 min 時(shí),紫胡蘿卜中花青素的提取率最高。酶解時(shí)間過短,花青素溶出不充分;酶解時(shí)間過長,可能會(huì)造成溶解的雜質(zhì)成分過多。因此,確定最佳酶解時(shí)間為60 min。

    2.1.4 酶解溫度

    取色素溶液50 mL,復(fù)合酶比例1.5∶1,加酶量2.0%, 酶解時(shí)間60 min ,酶解溫度分別在為30,60,90,120 ℃進(jìn)行提取,提取結(jié)果見圖4。

    圖4 酶解溫度對花青素提取率的影響

    由圖4 可知,酶解溫度在60 ℃時(shí),紫胡蘿卜中花青素的提取率最高。當(dāng)溫度高于60 ℃時(shí),隨溫度的變化,花青素的提取率變化較小,這說明60 ℃是紫胡蘿卜中花青素提取的最佳溫度。當(dāng)酶解溫度過高時(shí),可能是較高的溫度破壞了花青素的有效活性成分。

    2.2 紫胡蘿卜花青素提取率的響應(yīng)面試驗(yàn)

    在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,為優(yōu)化單因素試驗(yàn)得到的工藝條件,選取復(fù)合酶比例(A)、加酶量(B)、酶解時(shí)間(C)、酶解溫度(D)為4個(gè)影響因子,以紫胡蘿卜花青素得率(Y)為響應(yīng)值進(jìn)行Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì),優(yōu)化紫胡蘿卜花青素提取率。響應(yīng)面設(shè)計(jì)方案及試驗(yàn)結(jié)果見表3。

    表3 響應(yīng)面設(shè)計(jì)方案與試驗(yàn)結(jié)果

    續(xù) 表

    根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果建立得到花青素提取率Y與A,B,C,D的二次回歸實(shí)際模型方程為:

    Y=+95.56+7.500E-003A+0.50B+1.25C+0.43D-0.080AB+0.58AC-1.30AD-0.49BC+0.15BD-0.30CD-2.93A2-2.85B2-4.12C2-3.36D2。為檢驗(yàn)方程的有效性,進(jìn)一步對其進(jìn)行方差分析及模型分析,結(jié)果見表4。

    表4 模型回歸系數(shù)顯著性檢驗(yàn)及結(jié)果

    在本試驗(yàn)中,模型顯著性檢驗(yàn)、回歸方程分析顯著性檢驗(yàn)表明失擬項(xiàng)P=0.5534>0.05,失擬項(xiàng)不顯著,回歸顯著。另外,模型相關(guān)系數(shù)R2=0.9818,回歸模型P<0.0001,回歸方差是高度顯著的,說明回歸方程的擬合度較好,試驗(yàn)誤差比較小,模型調(diào)整相關(guān)系數(shù)Radj2=0.9637,說明該模型能解釋96.37%響應(yīng)值的變化?;貧w方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)結(jié)果顯示單因素中一次項(xiàng)復(fù)合酶比例、加酶量、酶解溫度和酶解時(shí)間對紫胡蘿卜花青素提取率有顯著的影響。各單因素交互作用(AB,AC,AD,BC,BD,CD)的響應(yīng)面及等高線圖見圖5~圖10。

    圖5 Y=(A,B)的響應(yīng)面圖與等高線圖

    由圖5可知,當(dāng)復(fù)合酶比例不變時(shí),提取率隨著加酶量的增加先上升后下降。當(dāng)加酶量一定時(shí),隨著復(fù)合酶比例的增大,提取率增大,達(dá)到最大值后又迅速減小。等高線圖接近圓形,說明復(fù)合酶比例和加酶量的交互作用不顯著。

    圖6 Y=(A,C)的響應(yīng)面圖與等高線圖

    由圖6可知,當(dāng)復(fù)合酶比例不變時(shí),提取率隨著提取時(shí)間的增加先上升后下降。當(dāng)提取時(shí)間一定時(shí),隨著復(fù)合酶比例的增大,提取率增大,達(dá)到最大值后又迅速減小。等高線圖接近圓形,說明復(fù)合酶比例和提取時(shí)間的交互作用不顯著。

    圖7 Y=(A,D)的響應(yīng)面圖與等高線圖

    由圖7可知,當(dāng)復(fù)合酶比例不變時(shí),提取率隨著提取溫度的增加先上升后下降。當(dāng)提取溫度一定時(shí),隨著復(fù)合酶比例的增大,提取率增大,達(dá)到最大值后又迅速減小。等高線圖接近橢圓形,說明復(fù)合酶比例和提取溫度的交互作用顯著。

    圖8 Y=(B,C)的響應(yīng)面圖與等高線圖

    由圖8可知,當(dāng)加酶量不變時(shí),提取率隨著提取時(shí)間的增加先增大后減小。當(dāng)提取時(shí)間一定時(shí),隨著加酶量的增大,提取率增大,達(dá)到最大值后又迅速減小。等高線圖接近橢圓形,說明提取時(shí)間和加酶量的交互作用顯著。

    圖9 Y=(C,D)的響應(yīng)面圖與等高線圖

    由圖9可知,當(dāng)提取時(shí)間不變時(shí),提取率隨著提取溫度的增加先上升后下降。當(dāng)提取溫度一定時(shí),隨著提取時(shí)間的增大,提取率增大,達(dá)到最大值后又迅速減小。等高線圖接近橢圓形,說明提取時(shí)間和提取溫度的交互作用顯著。

    由圖10可知,當(dāng)加酶量不變時(shí),提取率隨著提取溫度的增加先上升后下降。當(dāng)提取溫度一定時(shí),隨著加酶量的增大,提取率增大,達(dá)到最大值后又迅速減小。等高線圖接近橢圓形,說明提取溫度和加酶量的交互作用顯著。

    2.3 微膠囊工藝單因素試驗(yàn)

    分別以不同的芯材與壁材質(zhì)量比(1∶5,2∶5,3∶5,4∶5)、壁材比例(1∶5,2∶5,3∶5)、固形物含量(15%,20%,25%)、單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)(1.5%,2%,2.5%)為影響因素,考察其對提取工藝的影響。

    2.3.1 芯材壁材質(zhì)量比

    取5 mL花青素溶液,壁材比例2∶5,固形物含量20%, 單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%,芯材壁材比例分別為1∶5,2∶5,3∶5,4∶5,以花青素包埋率為指標(biāo),結(jié)果見圖11。

    噴霧干燥法制備的微膠囊中,芯材有效載量可達(dá)到60%~70%,但一般為20%~40%。由圖11可知,隨著芯材與壁材比例的提高,花青素包埋率增加,但當(dāng)芯材與壁材的比例提高到3∶5時(shí),產(chǎn)品效率下降,這可能是因?yàn)樾静妮d量過高,囊壁強(qiáng)度減弱,產(chǎn)品不耐摩擦或擠壓,從而降低了壁材對芯材的包覆效果,導(dǎo)致產(chǎn)品的效率較低。

    2.3.2 壁材質(zhì)量比

    取5 mL花青素溶液,芯材壁材比例3∶5,固形物含量20%, 單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%,壁材質(zhì)量比分別為1∶5,2∶5,3∶5,4∶5,以花青素包埋率為指標(biāo),結(jié)果見圖12。

    圖12 壁材質(zhì)量比對花青素微膠囊包埋率的影響

    由圖12可知,隨著壁材質(zhì)量比的提高,花青素包埋率增加,但當(dāng)壁材質(zhì)量比提高到2∶5時(shí),產(chǎn)品效率下降,其原因是芯壁比增加后,芯壁混合溶液粘稠度增加,微膠囊成型效果差,導(dǎo)致花青素包埋率降低。因此,微膠囊制備的最佳壁材質(zhì)量比為2∶5。

    2.3.3 固形物含量

    取5 mL花青素溶液,芯材壁材比例3∶5,固形物含量20%, 單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%,壁材質(zhì)量比分別為1∶5,2∶5,3∶5,4∶5,以花青素包埋率為指標(biāo),結(jié)果見圖13。

    圖13 固形物含量比對花青素微膠囊包埋率的影響

    由圖13 可知,隨著固形物濃度的增加,微膠囊產(chǎn)品的效率先上升后下降。這可能是因?yàn)楣绦挝餄舛仍黾訒r(shí),體系的粘度增大,減少了芯材向壁材表面的遷移,有利于噴霧干燥過程中囊壁的形成和致密性的提高。但是當(dāng)固形物含量過高時(shí),進(jìn)料黏度的增大使料液的霧化困難,導(dǎo)致料液在干燥筒中粘壁嚴(yán)重,使噴頭發(fā)生堵塞現(xiàn)象。

    2.3.4 單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)

    取5 mL花青素溶液,芯材壁材比例3∶5,壁材質(zhì)量比2∶5,固形物含量20%,單甘酯添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.0%,1.5%,2.0%,2.5%,以花青素包埋率為指標(biāo),結(jié)果見圖14。

    圖14 單甘脂添加量對花青素微膠囊包埋率的影響

    由圖14可知,隨著單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)增大,花青素包埋率增加,但當(dāng)單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)提高到1.5%時(shí),產(chǎn)品效率下降,其原因是芯壁比增加后,芯壁混合溶液粘稠度增加,微膠囊成型效果差。導(dǎo)致花青素包埋率降低。因此,微膠囊制備的最佳單甘酯添加量為1.5%。

    2.4 微膠囊工藝正交試驗(yàn)

    表5 正交試驗(yàn)表

    表5為以效率為指標(biāo)的極差分析,比較4個(gè)因素的極差R,影響花青素包埋率的主要因素順序?yàn)楣绦挝锖?壁材中大豆分離蛋白∶麥芽糊精(質(zhì)量比)>芯材壁材比例>單甘脂含量,最佳配比是A3B3C3D1,即當(dāng)固形物含量為20%、壁材中大豆分離蛋白∶麥芽糊精(質(zhì)量比)為3∶5、芯材∶壁材(質(zhì)量比)為2∶5,微膠囊包埋效率和得率均為最高。用上述條件做驗(yàn)證試驗(yàn),得到的微膠囊效率和得率分別為98.5%和87.3%。

    3 結(jié)論

    通過單因素試驗(yàn)初步分析紫胡蘿卜花青素提取工藝的條件影響,在此基礎(chǔ)上,采用Box-Benhnken試驗(yàn),以花青素提取率為響應(yīng)值,以復(fù)合酶比例(纖維素酶、果膠酶)、加酶量、酶解溫度和酶解時(shí)間4個(gè)因素為響應(yīng)因子建立二次回實(shí)際方程模型。經(jīng)檢驗(yàn),該方程擬合較好,可真實(shí)地反映花青素提取率變化的動(dòng)態(tài)過程,同時(shí)可以預(yù)測其理論值。依據(jù)二次回歸方程,確定了花青素提取率的最佳工藝條件:復(fù)合酶比例1.5∶1,加酶量2.0%,酶解溫度60 ℃,酶解時(shí)間60 min。

    以大豆分離蛋白、麥芽糊精為壁材,采用噴霧干燥法制備花青素微膠囊,以花青素微膠囊包埋率為指標(biāo),通過單因素和正交試驗(yàn)對花青素微膠囊的配方和工藝進(jìn)行了研究,獲得了制備花青素微膠囊的最佳工藝條件:芯材壁材比例為2∶5,壁材質(zhì)量比(大豆蛋白、麥芽糊精)為3∶5,固形物含量為20%,單甘脂添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5%,按此最佳工藝條件制備的花青素微膠囊包埋率達(dá)95.31%。

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