先天性耳聾患兒76例耳聾基因突變篩查結(jié)果研究

易天華 賀建橋

doi：10.3 969/j .issn.1007-614x.2018.5.71

摘要 目的：分析先天性耳聾患兒76例耳聾基因攜帶情況。方法：收治先天性耳聾患兒76例，對(duì)其采用基質(zhì)輔助激光解吸/離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)SLC26A4、GJB2、GJB3、線粒體12SrRNA 4個(gè)常見遺傳性耳聾基因（共20個(gè)位點(diǎn)）的突變情況。結(jié)果：經(jīng)飛行質(zhì)譜檢測(cè)，耳聾相關(guān)基因突變18例，檢出率23.68%。其中GJB2基因突變9例（11 84%），SLC26A4基因突變6例（7 89%），SLC26A4、GJB2、GJB3復(fù)合突變3例（3.94%）。結(jié)論：先天性耳聾基因突變檢出率較高，GJB2基因純合率最高，SLC26A4基因突變次之。先天性耳聾基因的突變檢測(cè)為減少出生缺陷患兒提供了依據(jù)，應(yīng)重視先天性耳聾基因的基因?qū)W檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 先天性耳聾；基因突變；SLC26A4；GJB2

作為最常見出生缺陷之一的先天性耳聾，是一種非綜合性耳聾，特征是以聽力喪失為唯一癥狀，60%與遺傳因素有關(guān)，占遺傳性耳聾的70%，其他綜合性耳聾30%[1]。至今已克隆和鑒定出常染色體隱性遺傳耳聾基因40個(gè)，常染色體顯性遺傳耳聾基因27個(gè)，線粒體耳聾基因7個(gè)和X連鎖耳聾基因3個(gè)[2]。目前報(bào)道的耳聾相關(guān)突變基因有SLC26A4、GJB2、GJB3、線粒體12SrRNA，并且已作為臨床耳聾基因的常規(guī)檢查。不同的基因在不同的民族和地區(qū)有不同的突變率和發(fā)病率[3]。本研究對(duì)本市先天性耳聾患兒76例進(jìn)行4個(gè)基因20個(gè)突變位點(diǎn)的耳聾基因普遍篩查，這4個(gè)基因分別是（GJB2/GJB3/SLC26A4/線粒體12SrRNA），從而進(jìn)一步對(duì)我市聽力障礙兒童耳聾基因攜帶情況進(jìn)行分析和了解，明晰當(dāng)?shù)叵忍煨远@基因的流行病學(xué)情況。

資料與方法

2013年9月-2014年9月收治已行人工耳蝸植入進(jìn)行術(shù)后康復(fù)的先天性耳聾患兒76例，男41例，女35例，平均年齡5 .12歲；患兒攜帶耳聾突變基因18例。

聽力診斷與評(píng)估：有關(guān)聽力學(xué)的診斷和隨訪的臨床資料，包括患兒一般信息、耳毒性藥物使用史、母親孕期疾病史、新生兒出生后病史、耳聾家族遺傳史、體格檢查、出生時(shí)的聽力篩查及隨訪資料等。采用耳聲發(fā)射和電生理檢查對(duì)聽力學(xué)進(jìn)行檢查測(cè)驗(yàn)，具體如下：①采用美國(guó)GSI-33型中耳分析儀進(jìn)行聲導(dǎo)抗測(cè)試，對(duì)耳聲發(fā)射進(jìn)行檢測(cè)。②利用美國(guó)GSI Audera聽覺腦干誘發(fā)電位測(cè)試儀進(jìn)行電生理檢查測(cè)試。

基因檢測(cè)方法：所有患兒均對(duì)足跟血進(jìn)行采集，使用濾紙采集卡，待卡自然晾干后將其裝回密封袋中，等待送檢。對(duì)耳聾基因利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)4個(gè)常見耳聾基因GJB2、SLC26A4、MT-RNR1和GJB3進(jìn)行20個(gè)突變位點(diǎn)的檢測(cè)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：建立Excel數(shù)據(jù)庫(kù)，采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)耳聾基因檢出率進(jìn)行描述性分析。

結(jié)果

基因檢測(cè)結(jié)果，見表1。

聽力篩查及隨訪情況：雙側(cè)耳聾組18例中患兒出生時(shí)聽力通過2例，其余的經(jīng)檢測(cè)均沒有通過。通過的這2例基因檢測(cè)，結(jié)果是SLC26A4基因復(fù)合雜合突變者，患兒1歲左右時(shí)對(duì)聲音的反應(yīng)差。對(duì)患兒進(jìn)行ABR檢測(cè)，結(jié)果表明2例均是雙耳重度聾，隨后對(duì)其進(jìn)行顳骨CT檢查，結(jié)果顯示2例均提示大前庭導(dǎo)水管擴(kuò)張。左側(cè)耳聾患兒1例，表現(xiàn)為左側(cè)耳廓畸形、耳道閉鎖，聽力學(xué)在6個(gè)月時(shí)的診斷是左耳重度耳聾，MRI檢查結(jié)果表明右耳未見明顯異常，1歲時(shí)外傷后出現(xiàn)極度下降的右耳聽力，ABR再次檢測(cè)結(jié)果提示重度耳聾，雙耳，而顳骨CT檢查結(jié)果表明大前庭導(dǎo)水管擴(kuò)張出現(xiàn)于左耳，而基因檢測(cè)表示未見陽性突變。

討論

最先被克隆定位的遺傳性耳聾基因是GJB2，其對(duì)縫隙連接蛋白Cx26進(jìn)行編碼。在人類耳蝸毛細(xì)胞中Cx26表達(dá)較高，該基因的突變與耳聾發(fā)生相關(guān)性較大，是突變率最高的耳聾基因[4]。本研究中GJB2突變9例（11.84%），其中235del C純合突變率最高，其次為35del G和235del C雜合突變，進(jìn)一步證明了突變高頻率耳聾基因是GJB2[5]。GJB2突變一般會(huì)引起常染色體隱性遺傳，對(duì)GJB2基因突變攜帶者的婚育方面，本研究結(jié)果可起到一定的指導(dǎo)作用。

編碼縫隙連接蛋白的另一個(gè)基因則是GJB3，其可引起常染色體顯性或隱性遺傳性耳聾[6]。在本研究中GJB3混合突變3例（3.94%），均通過聽力篩查且隨訪無異常。但有報(bào)道提示，該基因雜合突變多表現(xiàn)為遲發(fā)型高頻聽力下降[7]。臨床上應(yīng)提醒基因突變攜帶者進(jìn)行定期的聽力測(cè)試，當(dāng)出現(xiàn)聽力下降時(shí)應(yīng)及時(shí)就醫(yī)。

SLC26A4屬于離子轉(zhuǎn)運(yùn)體家族，其突變導(dǎo)致常染色體隱性遺傳[8]，在本研究中，SLC26A4突變率僅次于GJB2（7.89%，且突變類型有雜合突變和純合突變，因此進(jìn)行SLC26A4基因突變篩查，早期檢測(cè)篩查并進(jìn)行有效的預(yù)防，可使患者的聽力下降得到阻止或延緩。另外，本研究中對(duì)線粒體DNA12SrRNA基因致聾突變沒能檢出，這主要和本研究例數(shù)少有一定的關(guān)系。

本研究通過對(duì)本市先天性耳聾患兒76例行常規(guī)耳聾基因檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)GJB2和SLC26A4是當(dāng)?shù)剡z傳性耳聾的主要致病基因。其中235delC純合突變是GJB2基因檢出頻率最高的突變位點(diǎn)。SLC26A4基因檢出頻率最高的突變位點(diǎn)為IVS7-2A>G雜合突變。遺傳因素在先天性耳聾患兒中占較高比例，對(duì)于患兒及突變基因攜帶者的聽力隨訪意義重大，尤其是遲發(fā)性耳聾發(fā)生。耳聾基因的較早檢出，對(duì)做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早干預(yù)、早預(yù)防并減少耳聾患者的出現(xiàn)，有針對(duì)性地對(duì)耳聾基因攜帶者進(jìn)行婚前、孕前及產(chǎn)前的遺傳咨詢指導(dǎo)，避免耳聾患兒出生有積極意義。

參考文獻(xiàn)

[1]黃選兆，汪吉寶，孔維佳.實(shí)用耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：121.

[2]

Pandya A.Genetic hearing loss：the journeyof discovery to destination-how close are weto therapy？[J].Molecular Cenetics& Genom-ic Medicine，2016，4（6）：583.

[3]

Bayazit YA，Yilmaz M.An overview ofheredi-tary hearing loss[J].Otorhinolaryngology，2006，68（2）：57-63.

[4]

GandI aM，Castillo FJD， Gamdo Get al_Correction：A Novel Splice-Site Mutation inthe GJB2 Gene Causing Mild PostlingualHearing Impairment[J].Plos One，2013，8（9）：e73566.

[5] Barashkov NA，Pshennikova VG，Posukh OL，et al.Spectrum and Frequency of the CJB2Cene Pathogenic Variants in a Large Cohortof Patients with Hearing Impairment Livingin a Subarctic Region of Russia（the SakhaRepublic）[J].Plos One，2016，11（5）：e0156300.

[6]孟培，郝冬梅，張金艷，等.正常人群中遺傳性耳聾基因攜帶者篩查及結(jié)果分析[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2013，（7）：7.

[7] Xia JH，Liu CY，Tang BS.Mutations in thegene encoding gap junction protein heta-3associated with autosomal dominant hearingimpairment[J]. Nature Cenetics， 1998，20（4）：370.

[8]戴樸，韓東一，馮勃，等.大前庭水管綜合征的基因診斷和SLC26A4基因突變分析[J].中國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科，2006713（5）：303-307.