細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞治療對肺癌患者IL—2、IL—6、IL—8、IL—10、TNF—α的影響及研究

師鵬輝

摘要 目的：探討肺癌CIK治療后，血漿IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α水平變化及對Thl/Th2比值的影響。方法：患者CIK治療前及治療后1～2 d分別抽取外周血分離出血清，檢測IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α.結(jié)果：CIK治療后IL-2、TNF-α數(shù)值下降，IL-8升高，Thl/Th2比值失衡糾正，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：化療期間合理應(yīng)用CIK治療有利于改善預(yù)后。

關(guān)鍵詞 肺癌；Thl/Th2；IL-2；IL-6；11-8；IL-10；TNF-α；CIK

肺癌是世界上公認(rèn)的癌癥相關(guān)性死亡的首要原因[1]，晚期肺癌患者失去手術(shù)機(jī)會(huì)，化療是治療晚期肺癌的重要手段?，F(xiàn)階段化療后腫瘤復(fù)發(fā)率較高。研究表明，肺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與機(jī)體的Thl/Th2比值失衡密切相關(guān)。本研究探討肺癌CIK治療后免疫功能的變化，為臨床制定個(gè)體化治療方案提供參考。

資料與方法

2015年6月-2016年5月收治CIK肺癌患者16例，男8例，女8例；年齡45～ 75歲，平均60歲，所發(fā)病例均病理證實(shí)為肺癌。其中肺鱗癌8例，腺癌8例。符合同際肺癌研究協(xié)會(huì)（IASLC）2009年第7版分期標(biāo)準(zhǔn)Ⅲ～Ⅳ期。治療組給予CIK治療1個(gè)療程，細(xì)胞總數(shù)1.6×l09/L，對照組化療后給予觀察。

實(shí)驗(yàn)試劑：IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α試劑是購白易科拜得公司產(chǎn)品，用酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）。

實(shí)驗(yàn)過程：患者CIK治療前及治療后分別抽取外周血分離出血清，標(biāo)準(zhǔn)品按照說明書稀釋5個(gè)梯度，各個(gè)梯度每孔加樣量50μL；分別設(shè)空白孔及待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔可先加樣品稀釋40μL，然后再將樣品10μL加于酶標(biāo)版孔底部，盡量不觸及孔壁，可輕輕晃動(dòng)混勻；用封板膜封板后置37℃溫育30 min；將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍（48T的20倍）稀釋后備用；然后小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，之后靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；每孔加入酶標(biāo)試劑50μL，再加入顯色劑B 50 μL，之后輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 min；每孔加終止液50μL，以終止反應(yīng)；以空白孔調(diào)零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值），測定應(yīng)在加終止液后15min內(nèi)進(jìn)行；以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的多項(xiàng)式二次回歸方程，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

監(jiān)測項(xiàng)目：患者CIK治療前及治療后1—2d分別抽血檢測IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-dα，觀察其變化。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有統(tǒng)計(jì)分析將采用sPSS 19.O統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行計(jì)算。所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

結(jié)果

CIK治療后IL-2、IL-6、IL-8、1L-10、TNF-α的變化：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）方法測定各項(xiàng)細(xì)胞因子，CIK治療后1～2 dIL-2、TN F-α數(shù)值下降，IL-8數(shù)值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Thl/Th2比值失衡得到糾正，見表1。

討論

肺癌患者免疫功能低下，術(shù)后、放化療后其免疫功能進(jìn)一步破壞，免疫功能抑制是影響臨床療效及生活質(zhì)量的重要因素之一，因此提高患者機(jī)體免疫力是臨床治療中亟待解決的問題。機(jī)體抗腫瘤免疫機(jī)制分為細(xì)胞免疫和體液免疫兩方面。根據(jù)分泌細(xì)胞因子的不同，T輔助細(xì)胞分為Thl和Th2兩個(gè)不同功能的亞群，兩類細(xì)胞在發(fā)揮功能過程中，分泌不同細(xì)胞因子，發(fā)揮著協(xié)調(diào)作用[2]。其中Thl細(xì)胞分泌IL-2、TNF-α等細(xì)胞因子，Th2細(xì)胞分泌IL-6、IL-8、IL-10等細(xì)胞因子。Thl細(xì)胞主要介導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)，Th2細(xì)胞主要介導(dǎo)體液免疫反應(yīng)。

本研究顯示，經(jīng)CIK治療后1～2dIL-2、TNF-α濃度較前降低，IL-8、IL-10水平在CIK治療后較前升高。從而使CIK治療后患者外周血Thl/Th2細(xì)胞因子平衡紊亂明顯改善。對照組Thl/Th2細(xì)胞因子平衡紊亂糾正不明顯。

本研究結(jié)果與其他CIK治療研究不同。葉聯(lián)華等研究顯示[3]，經(jīng)CIK治療后2周，外周血IL-2明顯升高，IL-10于CIK治療后2周下降。試驗(yàn)結(jié)果不同可能與CIK治療后采血時(shí)間有關(guān)，本試驗(yàn)是CIK治療后1～2d采血，與葉聯(lián)華等實(shí)驗(yàn)ClK治療后2周、4周、8周時(shí)間點(diǎn)采血不同。至于CIK治療后1～2d，與治療后2周細(xì)胞因子變化如此明顯，其中原因還不是很清楚，需要進(jìn)一步研究。

總之，晚期肺癌患者存在Thl/Th2細(xì)胞因子失衡，相對于單純化療患者，加用CIK治療后可早期改善Thl/Th2平衡紊亂。化療期間合理應(yīng)用CIK治療對改善預(yù)后會(huì)有一定幫助。

參考文獻(xiàn)

[1]Waiker S.Updaies in non-small cell lungcancer[J]. Clinj Oncol Nurs， 2008， 12（4）：587-596.

[2] Hsieh CH，Wang CH，Kuo HP.Astham controlin asthmaLic patients treated for lung cancer[J].Chang Cung Med J，2011，34（1）：35-43.

[3]葉聯(lián)華，黃云超，趙光強(qiáng)，等.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞免疫治療對非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后免疫功能的影響[J].中國胸心血管外科雜志，2008，15（2）：96-99.