金針菇液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)初步研究

丁霄霄,李鳳偉,商曰玲,徐漢億,王 杰,卜雯麗,余曉紅*

(1.鹽城工學(xué)院 海洋與生物工程學(xué)院,江蘇 鹽城 224051;2.江蘇大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院,江蘇 鎮(zhèn)江 212013;3.鹽城市雨露農(nóng)業(yè)科技有限公司,江蘇 鹽城 224000)

金針菇(Flammulinavelutipes)又名冬菇、樸菇、構(gòu)菌、青杠菌、毛柄金錢(qián)菌,隸屬于擔(dān)子菌亞門(mén),層菌綱,傘菌目,口蘑科,金錢(qián)菌屬[1]。金針菇形美、味鮮,營(yíng)養(yǎng)豐富,具有較高的觀賞價(jià)值及食用和藥用價(jià)值,是世界上著名的食藥兩用菌和觀賞菌[2]。金針菇富含蛋白質(zhì)、維生素B1、維生素B2、維生素C、核苷類(lèi)、纖維素及多種微量元素等營(yíng)養(yǎng)成分[3],并且金針菇脂肪含量低,是一種高鉀低鈉的食品;另有研究發(fā)現(xiàn),金針菇中含有18種氨基酸,每100 g干菇中含氨基酸總量20.98 g,其中人體所必需的8種氨基酸占總量的44.5%,特別是賴(lài)氨酸和精氨酸的含量非常高,這些指標(biāo)都高于其他食用菇類(lèi),故對(duì)兒童的智力發(fā)育和健康成長(zhǎng)有益,因而有“益智菇”之稱(chēng)[4-6]。金針菇纖維素具有降低膽固醇的作用,同時(shí)還能預(yù)防和治療肝臟系統(tǒng)及腸胃道潰瘍[7];金針菇多糖則是一種良好的免疫增強(qiáng)劑,能增強(qiáng)T細(xì)胞功能,激活淋巴細(xì)胞及吞噬細(xì)胞,促進(jìn)抗體產(chǎn)生,誘導(dǎo)干擾素的形成,通過(guò)恢復(fù)和提高機(jī)體的免疫功能來(lái)抑制腫瘤的生長(zhǎng)[8-12]。

液態(tài)發(fā)酵有培養(yǎng)周期短、菌齡整齊、發(fā)酵快、成本低等優(yōu)點(diǎn),具有很大的發(fā)展前途[13-14]。由于金針菇的子實(shí)體生長(zhǎng)周期長(zhǎng),且乃能在比較低的溫度條件下出菇,受季節(jié)影響大,因此采用液體發(fā)酵技術(shù)工廠化生產(chǎn)金針菇菌絲體,以替代子實(shí)體在食品、醫(yī)藥方面的應(yīng)用就成為一個(gè)比較新的研究方向。

本研究對(duì)金針菇液體種子發(fā)酵培養(yǎng)基的組分進(jìn)行了篩選及優(yōu)化,通過(guò)測(cè)量pH值、還原糖、氨基酸態(tài)氮、蛋白酶活力、纖維素酶活力、淀粉酶活力、菌絲球個(gè)數(shù)和菌絲干質(zhì)量這些指標(biāo),來(lái)評(píng)價(jià)菌種對(duì)各種營(yíng)養(yǎng)素的吸收情況和生長(zhǎng)情況,進(jìn)而評(píng)價(jià)培養(yǎng)基對(duì)金針菇液體菌種生物量的影響,確定最適培養(yǎng)基配方,為高質(zhì)量的工業(yè)化大生產(chǎn)提供一定的試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

金針菇(Flammulina velutipes)菌種:鹽城市雨露農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。

葡萄糖、可溶性淀粉:上海中試化工總公司;蔗糖、氯化鉀:天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;黃豆粉、硫酸銨:天津市福晨化學(xué)試劑廠;蛋白胨、磷酸二氫鉀:上海化學(xué)試劑有限公司;磷酸氫二鉀:廣東汕頭市西隴化工廠;維生素B1、維生素B2、維生素B6:上海士峰生物科技有限公司;瓊脂粉、3,5-二硝基水楊酸:國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。所有化學(xué)試劑均為分析純或生化試劑。

1.2 儀器與設(shè)備

BS-2F振蕩培養(yǎng)箱:金壇市杰瑞爾電器有限公司;FA1104電子天平:上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;SW-CJ-1D無(wú)菌操作臺(tái):江蘇通澤器械有限公司;立式壓力蒸汽滅菌器(BXM-30R):上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;DNP電熱恒溫培養(yǎng)箱:上海金宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;UV752N紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):上海佑科儀器儀表有限公司。

1.3 方法

1.3.1 培養(yǎng)方法

將馬鈴薯葡萄糖瓊脂[14](potato dextrose agar,PDA)斜面培養(yǎng)基放入28℃恒溫培養(yǎng)箱觀察2 d,沒(méi)有雜菌則可以進(jìn)行接種;將金針菇菌種接種到接入馬鈴薯葡萄糖液態(tài)種子培養(yǎng)基中,在28℃、120r/min條件下?lián)u床培養(yǎng)5d進(jìn)行活化培養(yǎng)。

通過(guò)無(wú)菌操作技術(shù),取1 mL金針菇的液體菌種接入裝有液體發(fā)酵培養(yǎng)基(可溶性淀粉2%,黃豆粉3%,KH2PO40.1%,VB20.01%,蒸餾水800 mL,pH自然)的錐形瓶中,每種同樣條件下做3個(gè)平行試驗(yàn),置于28℃、150 r/min條件下?lián)u床振蕩培養(yǎng)箱中搖床培養(yǎng)8 d。

1.3.2 指標(biāo)測(cè)定方法

參考ZENGX L等[15]的方法并加以改進(jìn),測(cè)定金針菇的菌絲體生物量;參考趙斌等[16]方法對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)液中的菌絲球計(jì)數(shù);用pH計(jì)測(cè)定發(fā)酵液pH值[17];3,5-二硝基水楊酸(dinitrosalicylic acid,DNS)法測(cè)定培養(yǎng)液還原糖含量;參考焦巧芳[18]的方法測(cè)定淀粉酶活力和纖維素酶活力;紫外分光光度法測(cè)定蛋白酶活力[19];甲醛滴定法測(cè)定氨基酸含量[20];革蘭氏染色法制進(jìn)行鏡檢,檢查培養(yǎng)液是否污染,確保試驗(yàn)的正常進(jìn)行。

1.3.3 最佳發(fā)酵培養(yǎng)基組分篩選試驗(yàn)

搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源分別設(shè)置為葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉,氮源分別設(shè)置為黃豆粉、蛋白胨、硫酸銨,無(wú)機(jī)鹽分別設(shè)置為KCl、KH2PO4、K2HPO4,維生素分別設(shè)置為VB1、VB2、VB6。每種碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽和維生素3次重復(fù),在250 mL三角瓶中裝入100 mL培養(yǎng)基。

1.3.4 發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化正交試驗(yàn)

通過(guò)碳、氮源、無(wú)機(jī)鹽和維生素篩選試驗(yàn),選取4個(gè)最佳因素,并同時(shí)進(jìn)行各因素添加量?jī)?yōu)化試驗(yàn),選出最佳添加量,各取其附近的3個(gè)添加水平進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn),確定碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及維生素的最適配比。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平見(jiàn)表1。

表1 發(fā)酵培養(yǎng)基配方優(yōu)化正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平Table1 Factors and levels of orthogonal experiments for fermentation medium formula optimization

2 結(jié)果與分析

2.1 發(fā)酵培養(yǎng)基配方優(yōu)化試驗(yàn)

2.1.1 碳源種類(lèi)優(yōu)化結(jié)果

碳源是微生物生長(zhǎng)代謝的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),其主要為細(xì)胞提供碳架,提供細(xì)胞生命活動(dòng)所需的能量[21]。保持發(fā)酵培養(yǎng)基的其他組成不變(黃豆粉3%,KH2PO40.1%,VB20.01%),分別加入3種不同碳源:葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉,添加量均為2%,每種碳源做3個(gè)平行,各組結(jié)果取平均值,試驗(yàn)結(jié)果如表2所不。

表2 不同碳源對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響Table2 Effect of different carbon source on growth and enzyme activity of mycelium of Flammulina velutipes

由表2可知,這3種碳源對(duì)金針菇菌絲體生長(zhǎng)及酶活的影響由大到小的順序是可溶性淀粉＞葡萄糖＞蔗糖。因?yàn)榻疳樄骄N在發(fā)酵過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一些酶類(lèi)能更加有效分解營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),其中淀粉酶和纖維素酶可以水解碳源生成還原糖,故發(fā)酵液中還原糖含量與這2種酶活力的高低可間接反映菌種對(duì)碳源的利用率;但在培養(yǎng)后期部分菌絲體蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生氨基酸態(tài)氮類(lèi)物質(zhì)及菌絲球老化自溶釋放出氨基酸態(tài)氮物質(zhì),其氨基酸態(tài)氮含量逐漸增加,蛋白酶活力在一定程度上反映了菌種的穩(wěn)定性;又因氨基酸態(tài)氮是堿性物質(zhì),故發(fā)酵液的pH隨之變化。試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯不以可溶性淀粉為碳源的培養(yǎng)基的發(fā)酵液中還原糖含量最高,達(dá)到1.82 g/100 mL,其淀粉酶活力和纖維素酶活力同時(shí)也較另2種碳源高;測(cè)得的氨基酸態(tài)氮含量最低,僅為9.81g/100mL,pH最低,說(shuō)明菌種在該培養(yǎng)基中較為穩(wěn)定生長(zhǎng);而最直觀的數(shù)據(jù)則是該培養(yǎng)基的菌絲干質(zhì)量是其他兩種碳源培養(yǎng)基的1.5倍左右,而菌絲球數(shù)甚至高達(dá)其他碳源培養(yǎng)基的1.8倍和2.8倍;同時(shí)可溶性淀粉又具有價(jià)格相對(duì)低廉的優(yōu)勢(shì)[22],因而綜和選擇可溶性淀粉為金針菇發(fā)酵培養(yǎng)的最適碳源。

2.1.2 碳源添加量的優(yōu)化結(jié)果

在確定培養(yǎng)基中最適碳源種類(lèi)是可溶性淀粉的基礎(chǔ)上,將添加量分別調(diào)整為1%、2%、3%、4%。分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),培養(yǎng)基的其他組成同上2.1.1,每種水平做3個(gè)平行,取平均值,根據(jù)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果確定最適碳源的水平,試驗(yàn)結(jié)果如表3所不。

表3 不同可溶性淀粉添加量對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響Table3 Effect of different soluble starch addition on growth and enzyme activity of mycelium of Flammulina velutipes

由表3可知,以可溶性淀粉為碳源,不同添加量的可溶性淀粉對(duì)菌絲生長(zhǎng)及酶活有明顯影響。可溶性淀粉添加量低于3%,菌絲體生物量隨著添加量增加而增加,當(dāng)碳源添加量為3%時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖最高,氨基酸態(tài)氮最低。此后,菌絲干質(zhì)量、酶活以及還原糖、氨基酸態(tài)氮隨碳源添加量的升高呈降低趨勢(shì)。這可能是由于碳源含量過(guò)高,引起菌體異常繁殖,對(duì)菌體的代謝、能量傳遞產(chǎn)生了影響[23]。因此確定可溶性淀粉最佳添加量為3%。

2.1.3 氮源種類(lèi)優(yōu)化結(jié)果

氮源主要是用于合成菌體細(xì)胞物質(zhì)(如核酸、蛋白質(zhì)、氨基酸)以及合成一些含氮代謝產(chǎn)物,在食用真菌液態(tài)發(fā)酵中起重要作用[24]。而有機(jī)氮源不僅富含蛋白質(zhì)、氨基酸以及一些糖類(lèi)、無(wú)機(jī)鹽等微生物生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,還能提供某些次級(jí)代謝產(chǎn)物的前體物質(zhì)[25]。保持發(fā)酵培養(yǎng)基的其他組成不變(可溶性淀粉3%,KH2PO40.1%,VB20.01%),分別加入3種不同氮源:有機(jī)氮源蛋白胨、黃豆粉和無(wú)機(jī)氮源硫酸銨,添加量為3%。每種氮源做3個(gè)平行,各結(jié)果取平均值,結(jié)果如表4所不。

表4 不同氮源對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響Table4 Effect of different nitrogen source on growth and enzyme activity of mycelium of Flammulina velutipes

由表4可知,3種氮源對(duì)參數(shù)的影響可以通過(guò)菌絲干質(zhì)量和菌絲球數(shù)直觀地發(fā)現(xiàn),菌種在無(wú)機(jī)氮源硫酸銨的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)狀況不佳,但在添加有機(jī)氮源蛋白胨、黃豆粉的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好,以黃豆粉作為氮源的培養(yǎng)基的效果最好:菌球數(shù)大約是另2種培養(yǎng)基的1.5倍,菌絲干質(zhì)量達(dá)到0.59 g/100 mL,其蛋白酶活力最高,為1.13 U/mL,氨基酸態(tài)氮量最低,故其pH偏酸性;纖維素酶活和淀粉酶活也高于其他2種氮源,原因可能是菌種對(duì)氮源利用也在一定程度上促進(jìn)了對(duì)碳源的利用[26]。因此選用黃豆粉作為最佳氮源。

2.1.4 氮源添加量的優(yōu)化結(jié)果

在確定培養(yǎng)基中最適氮源是黃豆粉的基礎(chǔ)上,將添加量分別調(diào)整為2%、3%、4%、5%。分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),培養(yǎng)基的其他組成同上2.1.3,每種水平做3個(gè)平行,取平均值,根據(jù)結(jié)果確定最適添加量,結(jié)果如表5所不。

由表5可知,黃豆粉添加量由2%增加至4%時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖逐漸增加,氨基酸態(tài)氮逐漸降低。當(dāng)添加量達(dá)到4%時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖達(dá)到最高,其中菌絲干質(zhì)量達(dá)到0.61g/100mL。而當(dāng)添加量繼續(xù)升高時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖呈降低趨勢(shì)。因此確定黃豆粉的最適添加量為4%。

表5 不同黃豆粉添加量對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響Table5 Effect of different soybean meal addition on growth and enzyme activity of mycelium of Flammulina velutipes

2.1.5 無(wú)機(jī)鹽種類(lèi)優(yōu)化結(jié)果

無(wú)機(jī)鹽是構(gòu)成菌體的成分,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓、酸堿平衡和維持細(xì)胞的形態(tài)和功能的作用[24]。保持發(fā)酵培養(yǎng)基的其他組成不變(可溶性淀粉3%,黃豆粉4%,VB20.01%),分別加入3種不同無(wú)機(jī)鹽:KCl、KH2PO4、K2HPO4,添加量為0.1%。3種無(wú)機(jī)鹽各做3個(gè)平行,取平均值,試驗(yàn)數(shù)據(jù)如表6所不。

表6 不同無(wú)機(jī)鹽對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響Table6 Effect of different inorganic salt on growth and enzyme activity of mycelium of Flammulina velutipes

由表6可知,這3種無(wú)機(jī)鹽對(duì)金針菇菌絲體生長(zhǎng)及酶活的影響順序是:KH2PO4＞K2HPO4＞KCl,但相互之間的差異并不明顯,比如以KH2PO4為無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基中菌球數(shù)僅比K2HPO4的菌球數(shù)多10個(gè)/100 mL;菌絲干質(zhì)量?jī)H僅多重0.02 g/100 mL;3種酶活力也相差不大,但其中以KH2PO4為無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基酶活最高,還原糖量最多,氨基酸態(tài)氮最低,故選擇KH2PO4為最適無(wú)機(jī)鹽。

2.1.6 無(wú)機(jī)鹽添加量的優(yōu)化結(jié)果

在確定培養(yǎng)基中最適無(wú)機(jī)鹽是KH2PO4的基礎(chǔ)上,將添加量分別調(diào)整為0.05%、0.10%、0.15%、0.20%。分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),培養(yǎng)基的其他組成同上2.1.5,每種水平做3個(gè)平行,取平均值,試驗(yàn)結(jié)果如表7所不。

表7 不同KH2PO4添加量對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響Table7 Effect of different KH 2PO4 addition on growth and enzyme activity of mycelium of Flammulina velutipes

由表7所不,KH2PO4添加量由0.05%增加至0.10%時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖逐漸增加,氨基酸態(tài)氮逐漸降低;當(dāng)添加量達(dá)到0.10%時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖達(dá)到最高,其中菌絲干質(zhì)量達(dá)到0.62 g/100 mL。而當(dāng)添加量繼續(xù)升高時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖呈降低趨勢(shì)。因此確定KH2PO4的最適添加量為0.10%。

2.1.7 維生素種類(lèi)優(yōu)化結(jié)果

保持發(fā)酵培養(yǎng)基的其他組成不變(可溶性淀粉3%,黃豆粉4%,KH2PO40.1%),分別加入3種不同維生素:VB1、VB2、VB6,添加量選為0.01%。每種各做3個(gè)平行,取平均值,結(jié)果如表8所不。

表8 不同維生素對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響Table8 Effect of different vitamins on growth and enzyme activity of mycelium of Flammulina velutipes

由表8可見(jiàn),這3種維生素對(duì)金針菇菌絲體生長(zhǎng)及酶活的影響順序是:VB2＞VB1＞VB6,以VB2為維生素的培養(yǎng)基的菌球數(shù)最高,為640個(gè)/100mL;菌絲干質(zhì)量為0.64g/100mL;且3種酶活也高于另2種維生素,還原糖量最多,氨基酸態(tài)氮最低,故VB2為最適維生素。

2.1.8 維生素添加量的優(yōu)化結(jié)果

在確定培養(yǎng)基中最適維生素是VB2的基礎(chǔ)之上,將添加量分別調(diào)整為0.005 0%、0.007 5%、0.010 0%、0.012 5%。分別進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),培養(yǎng)基的其他組成同上2.1.7,每種水平做3個(gè)平行,取平均值,試驗(yàn)結(jié)果如表9所不。

表9 不同維生素B2添加量對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響Table9 Effect of different vitamin B2 addition on growth and enzyme activity of mycelium of Flammulina velutipes

由表9所不,VB2添加量由0.005 0%增加至0.007 5%時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖逐漸增加,氨基酸態(tài)氮逐漸降低。當(dāng)添加量達(dá)到0.007 5%時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖達(dá)到最高,其中菌絲干質(zhì)量高達(dá)0.67 g/100 mL。而當(dāng)添加量繼續(xù)升高時(shí),菌絲干質(zhì)量和菌球數(shù)以及酶活力、還原糖呈降低趨勢(shì)。因此,確定VB2的最適添加量為0.007 5%。

2.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

以上述培養(yǎng)基優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ),參考郭欣欣等[27]的試驗(yàn)方法并加以改進(jìn),以可溶性淀粉(A)、黃豆粉(B)、KH2PO4(C)以及VB2(D)添加量為評(píng)價(jià)因素,以菌絲干質(zhì)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行L9(34)搖瓶發(fā)酵試驗(yàn),正交試驗(yàn)結(jié)果與分析見(jiàn)表10與表11,方差分析見(jiàn)表12。

表10 發(fā)酵培養(yǎng)基配方優(yōu)化正交試驗(yàn)結(jié)果與分析Table10 Result and analysis of orthogonal experiments for fermentation medium formula optimization

表11 以多因素為評(píng)價(jià)指標(biāo)的正交試驗(yàn)結(jié)果Table11 Results of orthogonal experiments using multi-factors as evaluation indexes

表12 以菌絲體干質(zhì)量為評(píng)價(jià)指標(biāo)的正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析Table12 Variance analysis of orthogonal experiments results based on dry mass of mycelium as evaluation index

研究改變培養(yǎng)基配方,檢測(cè)不同組合對(duì)金針菇菌種的生長(zhǎng)及發(fā)酵液中部分指標(biāo),最終目標(biāo)是為了獲得更好的金針菇菌種,故最終以菌絲干質(zhì)量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行直觀分析。由表10極差分析結(jié)果可知,培養(yǎng)基的不同組分對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)及酶活的影響由大到小順序依次為B＞A＞D＞C,即改變氮源水平對(duì)菌絲生長(zhǎng)影響最大。以K值最佳選擇最優(yōu)組合為A2B3C1D1,即黃豆粉5%、可溶性淀粉3%、KH2PO40.05%、VB20.005 0%;而由表12可知,黃豆粉對(duì)金針菇液體發(fā)酵菌絲產(chǎn)量有顯著影響(P＜0.05),而可溶性淀粉、KH2PO4和VB2對(duì)液體發(fā)酵菌絲產(chǎn)量影響并不顯著(P＞0.05)。

在最佳條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),測(cè)得各項(xiàng)指標(biāo)如下:菌球數(shù)743個(gè)/100 mL,菌絲干質(zhì)量0.71 g/100 mL;淀粉酶活、纖維素酶活以及還原糖量分別為1.84 U/mL、1.25 U/mL和2.01 g/100 mL;蛋白酶活為1.28 U/mL,氨基酸態(tài)氮量低,為10.49 g/100 mL,pH略偏酸性,為6.86。該驗(yàn)證試驗(yàn)說(shuō)明金針菇菌種在最優(yōu)組合培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。

3 結(jié)論

由金針菇液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化試驗(yàn),得出最適碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽與維生素;而深入探究培養(yǎng)基各因素對(duì)金針菇的菌絲體生物量的影響大小,發(fā)現(xiàn)氮源的影響最大,其次是碳源,氮源中黃豆粉的影響最為顯著;同時(shí)也確定了金針菇的最佳液體培養(yǎng)基配方為:黃豆粉5%、可溶性淀粉3%、KH2PO40.05%、VB20.005 0%,并進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn),結(jié)果表明,金針菇在此培養(yǎng)基配比下,菌絲體生物量達(dá)到了0.71 g/100 mL。研究結(jié)果為金針菇的液態(tài)培養(yǎng)提供了一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。