1-磷酸鞘氨醇對2型糖尿病小鼠胰島β細(xì)胞損傷的保護(hù)作用

隋 婧，和一之，鄧 梅，趙心蕊，施秉銀

(1. 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科涉外病房，陜西西安 710061；2. 西安市第三醫(yī)院內(nèi)分泌科，陜西西安 710018；3. 山東省單縣中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，山東單縣 274300；4. 西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，陜西西安 710004；5. 西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，陜西西安 710061)

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)是一種多病因的內(nèi)分泌代謝性疾病，表現(xiàn)為慢性高血糖，伴隨因胰島素分泌或(和)作用缺陷引起的葡萄糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝紊亂。近年來，隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，人們的生活方式逐漸改變，人口老齡化日益嚴(yán)重，T2DM的發(fā)病率迅速增加，發(fā)病年齡更趨年輕化，嚴(yán)重危害公共健康。中國最新糖尿病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，在年齡≥20歲的中國人群中，糖尿病和糖尿病前期患病率分別高達(dá)10.9%和35.7%[1]。T2DM是一種緩慢進(jìn)展性疾病，其發(fā)病的中心環(huán)節(jié)是胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞分泌功能缺陷。胰島素抵抗發(fā)生在T2DM前期，于糖耐量減低或糖尿病發(fā)生時達(dá)高峰并貫穿在T2DM的全過程，而β細(xì)胞分泌功能缺陷導(dǎo)致對胰島素抵抗的失代償則是T2DM發(fā)病的必要條件。因此，深入探討改善T2DMβ細(xì)胞功能的機(jī)制，探討更有效的治療措施已成為當(dāng)今內(nèi)分泌學(xué)界十分重要的研究課題。

1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1 phosphate, S1P)是細(xì)胞膜鞘磷脂的代謝產(chǎn)物之一，近年的研究發(fā)現(xiàn)，S1P在心血管疾病、腫瘤、T2DM胰島β細(xì)胞的存活和功能調(diào)節(jié)方面發(fā)揮著重要作用[2-3]。S1P既可以作為細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的第二信使直接發(fā)揮促存活作用，還可與不同的S1P受體(S1PR)結(jié)合并通過與G蛋白偶聯(lián)而發(fā)揮作用，介導(dǎo)細(xì)胞遷移、增殖和存活[4-5]。S1PR是內(nèi)皮分化基因家族(EDG家族)中的成員之一，均為G蛋白偶聯(lián)受體[6]。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了5種S1PR受體亞型，包括S1PR1(EDG1)、S1PR2(EDG5)、S1PR3(EDG3)、S1PR4(EDG6)和S1PR5(EDG8)[7]。S1PR1-3廣泛表達(dá)于各種組織和細(xì)胞[8-10]，相比而言，S1PR4和S1PR5表達(dá)較局限，S1PR4僅表達(dá)于淋巴組織和肺，S1PR5僅表達(dá)于神經(jīng)組織[10-11]。目前，S1P及S1PR在體外動物模型中調(diào)控胰島β細(xì)胞功能的作用機(jī)制仍不清楚，也尚無相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道S1PR在小鼠胰腺及胰島組織中表達(dá)及定位情況。因此，本研究觀察S1P對高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的T2DM小鼠胰島β細(xì)胞的增殖及凋亡情況和對血糖及胰島素分泌的影響，并通過對胰腺組織進(jìn)行S1PR1-3蛋白的免疫組化染色，觀察其在T2DM小鼠胰腺中的表達(dá)定位情況及與正常小鼠的表達(dá)差異，進(jìn)一步研究S1P對糖尿病胰島β細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1材料SPF級4周齡雄性C57BL/6J小鼠40只，體質(zhì)量16～20 g，購自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物中心，許可證號：SCXK(陜)2012-003。STZ、S1P(美國Sigma公司，S0130)，小鼠抗Ki67單克隆抗體(美國BD Biosciences公司，BD550609)，兔抗Insulin多克隆抗體、兔抗S1P3多克隆抗體、(美國Santa Cruz公司，sc-9168、sc-30024)，兔抗S1P1多克隆抗體(美國Abcam公司，ab11424)，兔抗S1P2多克隆抗體(美國Bio World公司，BS2594)，SP免疫組化試劑盒、濃縮型DAB試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，SP-9000、ZLI-9017)，TUNEL試劑盒(羅氏公司，11684817910)，碘[125I]胰島素放射免疫分析藥盒(北京北方生物技術(shù)研究所)，血糖儀及配套試紙(羅氏公司，Accu-Chek Performa)。

1.2T2DM小鼠模型的建立SPF級雄性C57BL/6J小鼠(n=30)先喂食高脂飼料(上海普路騰生物科技有限公司，配方：繁殖鼠料54.6%，豬油16.9%，蔗糖14%，酪蛋白10.2%，預(yù)混料2.1%，麥芽糊精2.2%)，于第4周末，禁食(不禁水)14 h，取STZ溶于0.1 mol/L的pH 4.2～4.5的檸檬酸緩沖液中，按照120 mg/kg劑量行腹腔注射。STZ配制的全部操作過程需在冰浴上進(jìn)行，30 min內(nèi)完成整個STZ注射過程。同時設(shè)空白對照組(普通飼料喂養(yǎng))，注射同體積的檸檬酸緩沖液。注射后造模組和對照組分別繼續(xù)喂食相應(yīng)飼料3周。在第7周末時，小鼠禁食(不禁水)14 h后，用滅菌的小剪刀剪尾取血，使用血糖儀測定血糖，血糖≥11.1 mmol/L被認(rèn)為T2DM模型復(fù)制成功。飼養(yǎng)過程中保證充足的水和食物，并每天更換鼠籠和墊料1次。

1.3分組及S1P藥物干預(yù)方案T2DM造模組(n=26，1.2中造模時30只小鼠中2只死亡，2只未成模)按血糖高低隨機(jī)分為3組：S1P高劑量組(S1PH組，n=9)；S1P低劑量組(S1PL組，n=9)；糖尿病模型對照組(DC組，n=8)。另外，正常對照組小鼠(NC組，見1.2中處理，n=10)。將S1P 1 mg溶于1 mL甲醇中制成S1P儲存液，分裝后―20 ℃避光保存，用PBS稀釋成工作濃度。各組每日腹腔注射進(jìn)行干預(yù)治療：S1PH組(100 μg/kg)及S1PL組(20 μg/kg)；DC組及NC組給予相應(yīng)體積的甲醇+PBS，共3周。各組小鼠均自由飲水、飲食(S1PH組、S1PL組、DC組繼續(xù)飼喂高脂飼料，NC組飼喂普通飼料)，每周監(jiān)測攝食量、飲水量、體質(zhì)量及血糖。

1.4葡萄糖耐量試驗(yàn)(IPGTT) 給藥3周后，各組小鼠禁食(不禁水)8 h后稱重，小鼠尾靜脈取血作為0 min的血糖值(BG0)，后每只小鼠給予200 g/L葡萄糖注射液按2 g/kg體質(zhì)量劑量腹腔注射，并于給予葡萄糖后30、60、120 min尾靜脈取血，用血糖儀測相應(yīng)時點(diǎn)的血糖值[30 min(BG30)、60 min(BG60)、120 min(BG120)]，并用公式計(jì)算IPGTT曲線下面積(areas under curve, AUC)：AUC=1/4(BG0)+1/2(BG30)+3/4(BG60)+1/2(BG120)。

1.5空腹血清胰島素(FINS)的測定將連續(xù)給藥3周的各組小鼠禁食(不禁水)過夜，摘眼球取血，3 000 r/min離心10 min后，分離血清保存。按照北京北方生物技術(shù)研究所的碘[125I]胰島素放射免疫分析藥盒說明書進(jìn)行操作。計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)[12]：HOMA-IR=(FBG×FINS)/22.5。

1.6HE染色和免疫組化染色處死小鼠后取胰腺，100 mL/L甲醛溶液固定24 h，常規(guī)制作5 μm厚石蠟切片，HE染色并觀察形態(tài)學(xué)改變。

免疫組化染色采用SP法，分別用胰島素抗體(1∶1 400)、Ki67抗體(1∶200)、S1PR1抗體(1∶400)、S1PR2抗體(1∶150)、S1PR3抗體(1∶40)進(jìn)行免疫組化染色。操作按試劑盒說明書進(jìn)行。胰島素、S1PR1、S1PR2、S1PR3免疫組化結(jié)果以Image pro Plus 6.0圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析，計(jì)算機(jī)自動測定并計(jì)算每個胰島內(nèi)陽性染色累積吸光度(IA)值和相應(yīng)胰島的面積(area)，蛋白相對量以平均吸光度(IA/area)表示。Ki67染色后，增殖細(xì)胞核染為深棕色，每個胰島中的細(xì)胞增殖率(%)=細(xì)胞增殖數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。每張切片應(yīng)計(jì)數(shù)3～5個胰島，取平均值。

1.7TUNEL染色胰腺組織細(xì)胞凋亡染色用羅氏公司的TUNEL試劑盒進(jìn)行操作，染色后，凋亡的細(xì)胞核染為深棕色。每個胰島中的細(xì)胞凋亡率(%)=細(xì)胞凋亡數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。每張切片應(yīng)計(jì)數(shù)3～5個胰島，取平均值。

2 結(jié) 果

2.1S1P對小鼠空腹血糖的影響分別在造模成功后(0周)及S1P給藥1周、2周、3周檢測小鼠的空腹血糖。模型組小鼠的空腹血糖明顯高于正常對照組(P<0.01)；給藥3周后，S1P給藥兩組血糖值均較模型對照組下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

表1各組小鼠空腹血糖的變化

Tab.1 Changes of fasting blood glucose in mice in each group

mmol/L)

與NC組比較，**P<0.01。

2.2S1P對小鼠IPGTT的影響在給藥3周后，IPGTT實(shí)驗(yàn)觀察S1P對T2DM小鼠糖代謝及胰島β細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的影響，結(jié)果顯示，正常對照組在腹腔注射葡萄糖溶液120 min后體內(nèi)血糖基本恢復(fù)到了注射葡萄糖前的正常水平；模型對照組在腹腔注射葡萄糖后60 min內(nèi)血糖水平持續(xù)上升，此后小鼠血糖一直處于較高水平；S1P給藥的兩組小鼠在腹腔注射葡萄糖60 min血糖值達(dá)到最高，此后血糖值較模型對照組有下降趨勢，但是下降不顯著(P>0.05，圖1)。各組小鼠AUC結(jié)果顯示，DC組AUC較NC組AUC明顯增高(P<0.01)，S1P給藥兩組AUC較模型對照組稍有下降，但是下降不顯著(P>0.05，表2)。

圖1S1P對小鼠IPGTT的影響

Fig.1 Effect of S1P on IPGTT in mice

2.3S1P對小鼠空腹血清胰島素(FINS)及HOMA-IR的影響各組之間FINS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>

0.05)，符合T2DM小鼠與同齡正常小鼠相比胰島素水平不降低的特點(diǎn)。與空白對照組相比，T2DM模型各組小鼠的HOMA-IR指數(shù)水平均增高(P<0.01)，說明小鼠出現(xiàn)胰島素抵抗。其中S1P給藥兩組的HOMA-IR指數(shù)較模型對照組稍有下降，但是下降不顯著(P>0.05，表2)。

表2各組小鼠的FINS、AUC及HOMA-IR比較

Tab.2 Comparision of FINS, AUC and HOMA-IR in each group

組別nFINS (mIU/L)HOMA-IRAUCNC組107.51±2.602.68±0.9823.25±1.68DC組88.37±2.316.56±2.80??53.56±5.76??S1PL組98.39±1.935.82±1.44??51.70±6.45??S1PH組97.53±2.495.14±1.71??50.82±6.99??

與NC組比較，**P<0.01。

2.4胰島組織形態(tài)學(xué)觀察及胰島素免疫組化正常對照組小鼠胰島呈圓形或橢圓形細(xì)胞團(tuán)，胰島細(xì)胞大小均一，排列整齊，細(xì)胞界限清楚，胞核居中清晰可見。模型對照組小鼠胰島細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，大小不一，體積增大，排列松散，細(xì)胞核呈偏心分布。胰島素陽性染色細(xì)胞數(shù)量減少，且染色比正常對照組淺，提示造模后，胰島β細(xì)胞出現(xiàn)明顯的損傷。與模型對照組相比，S1P給藥兩組的胰島病變減輕，胰島結(jié)構(gòu)較清晰，形態(tài)較規(guī)整，排列較整齊。胰島素陽性染色顆粒增加，棕黃色染色較深(圖2)。

圖2胰島HE染色及胰島素免疫組化染色

Fig.2 HE staining of islet and immunohistochemical staining of insulin in mouse islets

A、C、E、G：HE染色(×400)；B、D、F、H：胰島素免疫組化染色(×400)；A、B：NC組；C、D：DC組；E、F：S1PL組；G、H：S1PH組。標(biāo)尺：100 μm。

2.5小鼠胰島β細(xì)胞增殖活性測定Ki67免疫組化陽性信號表現(xiàn)為細(xì)胞核呈棕黃色，細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)不著色。各組小鼠胰島中Ki67的表達(dá)率均較低，相比較而言，正常對照組胰島內(nèi)Ki67染色陽性細(xì)胞稍多，而模型對照組幾乎無陽性細(xì)胞，S1P給藥兩組小鼠胰島中可見少量Ki67染色陽性細(xì)胞，較模型對照組顯著升高(P<0.05，圖3、表3)，提示S1P有促進(jìn)胰島β細(xì)胞增殖的作用。

圖3各組小鼠胰島Ki67免疫組化染色

Fig.3 Immunohistochemical staining of Ki67 in mouse islet cells in each group (×400)

A：NC組；B：DC組；C：S1PL組；D：S1PH組。箭頭：陽性染色。標(biāo)尺：100 μm。

2.6小鼠胰島β細(xì)胞凋亡情況TUNEL檢測可見發(fā)生凋亡的胰島細(xì)胞核呈棕黃色，未發(fā)生凋亡的胰島細(xì)胞核呈藍(lán)色。模型對照組小鼠胰島中可見大量棕色TUNEL染色陽性的凋亡細(xì)胞，與正常對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。S1P給藥兩組小鼠胰島中凋亡細(xì)胞較模型對照組減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示S1P具有抑制胰島β細(xì)胞凋亡的作用(圖4、表3)。

2.7S1PR1、S1PR2、S1PR3蛋白在T2DM小鼠胰腺中的表達(dá)情況S1PR1、S1PR2、S1PR3蛋白陽性信號均位于胰島細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜，與連續(xù)切片的胰島素染色陽性細(xì)胞定位一致，說明S1PR1、S1PR2、S1PR3蛋白表達(dá)于胰島β細(xì)胞，在胰腺外分泌部幾乎不表達(dá)。其中S1PR1及S1PR2蛋白在T2DM小鼠的胰島中的表達(dá)較正常對照組明顯升高(P<0.01及P<0.05)，S1PR3蛋白在糖尿病小鼠及正常對照組小鼠中表達(dá)無差異(P>0.05，圖5～圖7)。

表3各組小鼠胰島細(xì)胞增殖率及凋亡率變化

Tab.3 Proliferation rate and apoptosis rate of islet cells in all groups

(%)

與NC組相比，**P<0.01；與DC組相比，#P<0.05。

圖4各組小鼠胰島TUNEL染色

Fig.4 TUNEL assay of apoptotic cells in the mouse islets in all groups (×400)

A：NC組；B：DC組；C：S1PL組；D：S1PH組。箭頭：陽性染色。標(biāo)尺：100 μm。

圖5各組小鼠胰腺中S1PR1免疫組化染色情況

Fig.5 Immunohistochemical staining of S1P receptor S1PR1 (×400)

A：NC組；B：DC組；C：S1PL組；D：S1PH組；E：各組S1PR1平均IA比較，**P<0.01。標(biāo)尺：100 μm。

圖6 各組小鼠胰腺中S1PR2免疫組化染色情況
Fig.6 Immunohistochemical staining of S1PR2 in mouse pancreas in all groups (×400)
A:NC組;B:DC組;C:S1PL組;D:S1PH組;E:各組S1PR2平均IA的比較。?P<0.05。標(biāo)尺:100μm。

圖7 各組小鼠胰腺中S1PR3免疫組化染色情況
Fig.7 Immunohistochemical staining of S1PR3 in mice of all groups (×400)
A:NC組;B:DC組;C:S1PL組;D:S1PH組;E:各組S1PR3平均IA的比較。??P<0.01。標(biāo)尺:100μm。

3 討 論

“鞘脂變阻器”通路是近年來許多研究者重視的一條有關(guān)細(xì)胞存活、增殖和凋亡的信號途徑。神經(jīng)鞘脂類是細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)成分之一，細(xì)胞內(nèi)鞘脂代謝平衡是細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的重要方面，在調(diào)控細(xì)胞增殖、存活、遷移、凋亡及新生血管形成等方面發(fā)揮著重要的作用[3,6,13]。鞘磷脂代謝產(chǎn)物如神經(jīng)酰胺(ceramide，Cer)、鞘氨醇(sphingosine, Sph)、S1P可作為第一信使和(或)第二信使調(diào)控著多種生理性和病理性的細(xì)胞生命活動，在糖尿病、腫瘤、炎癥、動脈粥樣硬化和骨質(zhì)疏松等的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[14-15]。鞘氨醇激酶(sphingosine kinases, SphK)是調(diào)控細(xì)胞內(nèi)Cer、Sph和S1P代謝平衡的關(guān)鍵酶。研究發(fā)現(xiàn)，Cer和Sph是細(xì)胞增殖的負(fù)調(diào)控因子，能夠抑制細(xì)胞生長，終止細(xì)胞周期過程，促進(jìn)細(xì)胞凋亡；而其進(jìn)一步的代謝物S1P則刺激細(xì)胞生長、增殖和存活，抑制細(xì)胞凋亡[3,13]。Cer和Sph向著S1P的方向轉(zhuǎn)化，而S1P在一定條件下也可以向著相反方向轉(zhuǎn)換，Cer/Sph與S1P之間構(gòu)成了一個動態(tài)平衡的關(guān)系，這個動態(tài)平衡控制著神經(jīng)鞘脂類的代謝通路，決定著細(xì)胞的生死存亡，這種反向調(diào)節(jié)作用被形象地稱作“鞘脂變阻器”[3]。

“鞘脂變阻器”在胰島β細(xì)胞的存活和功能調(diào)節(jié)方面均發(fā)揮重要的作用。研究表明，SphK和S1P表達(dá)于INS-1胰島素瘤細(xì)胞系和大鼠的胰島組織，在分離的大鼠胰島內(nèi)，SphK催化S1P生成，促進(jìn)細(xì)胞存活，抑制細(xì)胞凋亡[6,16]。此外，在經(jīng)過S1PR激動劑FTY720治療的db/db小鼠胰腺中的胰島面積大于對照組的2倍，提示FTY720能防止胰島損傷和通過抑制胰島β細(xì)胞凋亡和促進(jìn)β細(xì)胞存活而保護(hù)β細(xì)胞[17]。既往研究顯示，S1P在β細(xì)胞中調(diào)節(jié)葡萄糖刺激的胰島素分泌，在克隆的倉鼠β細(xì)胞系HIT-T15及離體小鼠胰島中，S1P通過激活磷脂酶C(PLC)能明顯的刺激β細(xì)胞呈葡萄糖依賴的胰島素分泌[18]。本研究首次在T2DM小鼠模型中探索外源性S1P對胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用，結(jié)果顯示，在高脂飲食聯(lián)合小劑量STZ誘導(dǎo)的T2DM小鼠模型上腹腔注射S1P溶液后能抑制胰島β細(xì)胞凋亡，促進(jìn)增殖，與既往研究結(jié)果一致。經(jīng)過S1P治療后的小鼠與模型對照組相比，HE染色及胰島素免疫組化染色顯示胰島病變較輕，胰島數(shù)量增多，體積增大，結(jié)構(gòu)較清晰，胰島內(nèi)細(xì)胞數(shù)目增多，排列較整齊，形態(tài)較規(guī)整，提示S1P可以改善T2DM小鼠胰島β細(xì)胞形態(tài)。給小鼠腹腔注射S1P后，空腹血糖、葡萄糖耐量、HOMA-IR均較模型對照組改善，提示S1P對胰島β細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，S1P信號通路可能是未來治療糖尿病的潛在靶點(diǎn)。

雖然本研究及既往研究均表明，S1P可能促進(jìn)胰島β細(xì)胞增殖，抑制凋亡，但是目前S1P的作用機(jī)制以及受體類型仍不清楚[14,19]，仍需進(jìn)一步研究S1P和它的受體亞型在胰島β細(xì)胞中的作用以明確S1P調(diào)節(jié)β細(xì)胞功能的機(jī)制。因此，本研究首先探討S1PR在胰島組織的表達(dá)情況及糖尿病時S1PR的表達(dá)變化，從而初步篩選出可能與糖尿病關(guān)系密切的受體亞型。結(jié)果顯示，大鼠胰島細(xì)胞表達(dá)S1P1、S1P2、S1P3、S1P4的mRNA，但不表達(dá)S1P5，胰島細(xì)胞瘤INS-1細(xì)胞系只表達(dá)S1P1、S1P2、S1P3的mRNA[20-21]。而S1PR在小鼠胰島組織的表達(dá)仍未知。本實(shí)驗(yàn)對高脂飲食加STZ誘導(dǎo)的T2DM小鼠胰腺組織進(jìn)行S1PR1、S1PR2、S1PR3蛋白的免疫組化染色，結(jié)果顯示，S1PR1、S1PR2、S1PR3蛋白均表達(dá)于小鼠胰腺中，且僅僅表達(dá)于胰島細(xì)胞，并與連續(xù)切片的胰島素染色陽性細(xì)胞定位一致，說明表達(dá)于胰島β細(xì)胞，而在胰腺組織外分泌部不表達(dá)。其中S1PR1及S1PR2蛋白在T2DM小鼠的胰島中的表達(dá)較正常對照組表達(dá)明顯升高，而S1P給藥兩組及模型對照組之間表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；S1PR3蛋白在糖尿病小鼠及正常對照組小鼠中表達(dá)無差異。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，S1P的受體亞型S1PR1及S1PR2可能在T2DM的發(fā)病機(jī)制及病理生理改變中發(fā)揮著一定的作用。推測S1P可能是通過與S1PR1及S1PR2受體結(jié)合，介導(dǎo)S1P通路激活，進(jìn)而抑制β細(xì)胞凋亡、促進(jìn)增殖，促進(jìn)胰島素分泌，發(fā)揮對糖尿病胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用，其作用方式及相關(guān)信號通路有待進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)。但S1P腹腔注射并未有使胰島中S1PR量改變的作用。

本研究首次從形態(tài)學(xué)方面觀察了S1PR1、S1PR2、S1PR3蛋白在正常C57BL/6J小鼠胰腺及高脂飲食聯(lián)合小劑量STZ誘導(dǎo)的T2DM小鼠胰腺中的表達(dá)，并定位了這3個蛋白在胰島中的表達(dá)，推測S1P可能是通過與S1PR1受體及S1PR2受體結(jié)合，介導(dǎo)S1P通路激活，進(jìn)而抑制β細(xì)胞凋亡、促進(jìn)增殖，促進(jìn)胰島素分泌，發(fā)揮對糖尿病胰島β細(xì)胞損傷的保護(hù)作用?？傊?，本研究結(jié)果進(jìn)一步肯定了S1P信號通路參與T2DM的發(fā)生發(fā)展過程，也為深入研究糖尿病的發(fā)病機(jī)制和可能的藥物靶點(diǎn)提供了依據(jù)，為糖尿病的防治提供新思路。