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    3種治療小瓜蟲病藥物對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性研究

    2018-10-30 10:53:44張世勇王明華邊文冀鐘立強陳校輝
    上海農(nóng)業(yè)學(xué)報 2018年5期
    關(guān)鍵詞:敵百蟲硫酸亞鐵硫酸銅

    張世勇,王明華,邊文冀,王 江,鐘立強,陳校輝*

    (1 江蘇省淡水水產(chǎn)研究所,南京 210017;2 江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護與利用平臺,南京 210014;3 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院,泰州 225300)

    斑點叉尾鮰(Ictalurespunctatus)亦稱美洲鯰、溝鯰,原產(chǎn)于美國,自1984年引入我國以來,已推廣到湖北、四川、重慶、江蘇、安徽等 20 多個省市,養(yǎng)殖規(guī)模和產(chǎn)量逐年增加,已成為我國重要的出口魚類[1-2]。我國斑點叉尾鮰在長期養(yǎng)殖過程中缺乏系統(tǒng)選育,再加上美國對種源出口的限制,出現(xiàn)了較為嚴(yán)重的種質(zhì)退化現(xiàn)象,最為直接的影響就是病害現(xiàn)象頻頻暴發(fā)。小瓜蟲病在我國斑點叉尾鮰苗種階段的發(fā)病率較高,是目前國內(nèi)外最為棘手的魚類疾病之一。據(jù)美國2002年水產(chǎn)統(tǒng)計數(shù)據(jù),受小瓜蟲病影響損失量在900kg以上的苗種生產(chǎn)企業(yè)占到總生產(chǎn)企業(yè)數(shù)的42%[3],至今國內(nèi)外仍沒有有效的治愈小瓜蟲病的藥物和措施。

    眾多研究人員在不斷地探索研究中發(fā)現(xiàn)相對有效的藥物主要有孔雀石綠、亞甲基藍、甲醛、辣椒素[4-5]??兹甘G、亞甲基藍等藥物具有明顯的致癌作用,已被世界眾多國家列為水產(chǎn)禁用藥。最新研究發(fā)現(xiàn),從中草藥中提取的桑黃酮(Kuwanons)[6]、直立白薇甙(Cynatratoside-C)[7]、白屈菜赤堿(Chelerythrine)和茵芋堿(Chloroxylonine)[8]等藥物具有較好地殺滅小瓜蟲掠食體的作用,但因其高昂的成本很難應(yīng)用于實際的防治過程中。因此,在養(yǎng)殖過程中用到最多且相對有效的防治藥物主要有甲醛、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑、辣椒素以及敵百蟲等。本試驗旨在探討不同劑量的甲醛、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑和敵百蟲對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性,以期為預(yù)防和治療斑點叉尾鮰小瓜蟲病以及其他水產(chǎn)疾病科學(xué)用藥提供指導(dǎo)。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物

    2016年9月,從江蘇省淡水水產(chǎn)研究所揚中基地6—7月繁育的44個斑點叉尾鮰家系中隨機挑選體重為20.0—30.0 g的健康幼魚1 000尾于室內(nèi)水槽中暫養(yǎng)一周,暫養(yǎng)期間水溫為27.0—28.0 ℃,pH 7.8—8.2,溶解氧質(zhì)量濃度>5 mgL,光照200—1 200 lx,試驗期間不進行投喂。

    1.2 藥物

    甲醛為分析純,含量37.0%—40.0%,色度≤15黑曾單位,購自上海久億化學(xué)試劑有限公司。硫酸銅與硫酸亞鐵均為分析純,使用時按 5∶2比例混合,兩種藥品均購自國藥集團股份有限公司。敵百蟲購自山西康潔藥業(yè)有限公司,有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥90%。

    1.3 方法

    試驗全程在室內(nèi)進行,使用養(yǎng)殖容量為150 L的塑料缸,試驗用水為經(jīng)曝氣處理24 h的自來水,pH在7.7—8.0,硬度為250 mgL (以CaCO3計),溶解氧質(zhì)量濃度>5.0 mgL,光照200—1 200 lx,水溫(25±1 )℃,每個塑料缸飼養(yǎng)斑點叉尾鮰幼魚30尾,各放置一個充氣頭。

    采用靜態(tài)急性毒性方法進行試驗。在正式試驗開始前進行48 h預(yù)試驗,根據(jù)常用魚病防治用量進行調(diào)整,觀察斑點叉尾鮰幼魚的活動以及存活狀況,并進行記錄,得出正式試驗藥物使用區(qū)間。每組試驗設(shè)置5個濃度組以及1個對照組,每組3個重復(fù),濃度梯度按照等對數(shù)間距設(shè)置。試驗藥品先配置母液,溶劑為純凈水。使用時根據(jù)實際用量逐步稀釋使用,每24 h更換試驗藥液一次。試驗開始后進行連續(xù)觀察,記錄24 h、48 h、96 h后斑點叉尾鮰幼魚的存活情況并及時撈出死亡個體。實驗魚死亡標(biāo)準(zhǔn)為對玻璃棒觸碰無任何反應(yīng)。

    1.4 統(tǒng)計分析

    不同時間段斑點叉尾鮰幼魚的半致死濃度(Half-lethal concentration,LC50)分別按照Karber’s法和Turubell公式計算:lgLC50=XK- a∑(Pi+Pi+1);SC=B×0.3(CB)2

    (1)

    式中:LC50是半致死質(zhì)量濃度,mgL;XK是最大劑量的對數(shù),a是相鄰劑量比值的對數(shù),Pi、Pi+1是各劑量組的死亡率(%);SC是安全質(zhì)量濃度,mgL;B是48 h的LC50,mgL;C是24 h的LC50,mgL。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 甲醛對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性研究

    甲醛急性中毒的實驗魚表現(xiàn)為亂竄、不安穩(wěn)、浮頭,后期身體側(cè)翻失去平衡,最終死亡。兩組低質(zhì)量濃度組的實驗魚活動情況與對照組相似,實驗魚大多靜伏于實驗箱底部,少數(shù)緩慢游動。甲醛為較低質(zhì)量濃度(10.0 mgL和17.8 mgL)時,歷經(jīng)96 h實驗魚的死亡率為0;中等質(zhì)量濃度(31.6 mgL)時,歷經(jīng)28 h出現(xiàn)死亡現(xiàn)象;最高質(zhì)量濃度(100.0 mgL)時,歷經(jīng)24 h的死亡率達100%。實驗魚死亡前均出現(xiàn)鰓蓋擴張,鰓絲淤血且邊緣發(fā)白,體表粘液大量分泌的現(xiàn)象。數(shù)據(jù)分析得出:甲醛對斑點叉尾鮰幼魚24 h的半致死質(zhì)量濃度為74.51 mgL,48 h的半致死質(zhì)量濃度為49.20 mgL,安全質(zhì)量濃度為6.45 mgL(表1)。

    2.2 敵百蟲對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性研究

    在試驗中觀察到實驗魚進入較高濃度組和高濃度組試驗液后,幾分鐘即處于半昏迷狀態(tài),浮于水面不動,對刺激有反應(yīng),反應(yīng)遲鈍,體色變淺,體表粘液分泌增多。斑點叉尾鮰幼魚死亡時,身體均彎曲;存活的實驗魚應(yīng)激反應(yīng)強烈。敵百蟲為最低質(zhì)量濃度(1.00 mgL)時,歷經(jīng)96 h死亡率為0;較低質(zhì)量濃度(3.16 mgL)時,歷經(jīng)10 h出現(xiàn)死亡,歷經(jīng)96 h仍保持較低的死亡率;較高質(zhì)量濃度(5.62 mgL)時,各時段死亡率均急劇上升;最高質(zhì)量濃度(10.00 mgL)時,歷經(jīng)24 h的死亡率達100%。數(shù)據(jù)分析得出:敵百蟲對斑點叉尾鮰幼魚24 h的半致死質(zhì)量濃度為5.58 mgL,48 h的半致死質(zhì)量濃度為3.84 mgL,安全質(zhì)量濃度為0.54 mgL(表2)。

    表1 甲醛對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性結(jié)果

    表2 敵百蟲對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性結(jié)果

    2.3 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性研究

    表3 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對斑點叉尾鮰幼魚的急性毒性結(jié)果

    3 討論與結(jié)論

    安全濃度為水體中含有藥物最高允許濃度,水產(chǎn)養(yǎng)殖水體藥物安全濃度問題一直受到國內(nèi)外有關(guān)部門的注意。這不僅考慮到養(yǎng)殖水體中水生動物的存活問題,而且直接或間接影響到人、畜禽等的健康。研究養(yǎng)殖水體藥物安全濃度對于指導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)安全生產(chǎn)具有重要意義。

    甲醛是原漿毒物質(zhì),能與蛋白質(zhì)結(jié)合,溶解類脂,具有強烈的殺菌作用,是強烈的殺菌劑,在安全的使用范圍內(nèi)可以很好地應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中細(xì)菌類、真菌類和寄生蟲類疾病的預(yù)防和治療。本試驗得出的安全質(zhì)量濃度為6.45 mgL,與長吻鮠(6.6 mgL)[9]以及麥周明[10]得出的斑點叉尾鮰安全濃度較為一致。在目前已見的相關(guān)報道中,甲醛是水產(chǎn)養(yǎng)殖上預(yù)防和治療寄生蟲和真菌類疾病的理想藥物,可以較為有效地預(yù)防和治療斑點叉尾鮰小瓜蟲病和水霉病。在水霉病的防治方面,目前普遍使用15—30 mgL的甲醛溶液進行全池潑灑,用藥后可基本控制病情的蔓延;嚴(yán)重時可3 d后重復(fù)潑灑,能夠達到有效的治療。治療小瓜蟲時,一般采用30 mgL的甲醛溶液進行全池潑灑,每天潑灑一次,連用5 d,可有效控制小瓜蟲病。

    敵百蟲屬于有機磷殺蟲劑,其殺蟲機理是將膽堿酯酶的活性位點磷酸化從而抑制其活性,最終使神經(jīng)機能停止以達到殺蟲的作用。本試驗得出的安全質(zhì)量濃度為0.54 mgL,低于王武等[11]和黃琪琰[12]推薦的治療吸蟲和甲殼綱寄生蟲的潑灑濃度,高于麥周明[10]與張小立等[13]推薦的安全濃度,究其原因可能是其試驗所選實驗魚規(guī)格偏小,耐受力較低。敵百蟲在弱堿性條件下,可形成殘毒性更大的敵敵畏,當(dāng)pH為8—10時,敵百蟲轉(zhuǎn)變成敵敵畏僅需0.5 h,因此使用時不僅需要控制好劑量,還需要在使用前對水體pH進行測定,以防不當(dāng)操作對養(yǎng)殖魚類和使用者造成傷害。

    硫酸銅與硫酸亞鐵合劑在殺滅體外寄生蟲時硫酸銅起主要的作用,而硫酸亞鐵主要起著輔助藥物的作用,通常用來輔助硫酸銅殺滅一些比較難以殺滅的寄生蟲[14]。本試驗得出的安全質(zhì)量濃度為0.77 mgL,較張小立等[13]得出的安全質(zhì)量濃度(0.4446 mgL)略高,究其原因可能是本試驗所選取實驗魚規(guī)格較大,耐受力較高。影響硫酸銅殺滅病原體能力的因素有很多,如水溫、硬度、pH和水體有機物含量等。pH越高、水中的有機物越多,硫酸銅的毒性就會越小,反之越大[15]。因此,在使用硫酸銅硫酸亞鐵合劑的時候一定要考慮到各個方面的因素,嚴(yán)格控制硫酸銅的含量,以控制毒性。硫酸銅在魚體內(nèi)過量積累能夠抑制抗氧化酶活性,從而引起魚類腎組織壞死、破壞造血組織等[16]。除此之外,銅離子還能夠殘留于鰓、肌肉等組織內(nèi),影響魚正常的攝食和生長,所以切勿過于頻繁使用硫酸銅。

    本試驗表明,甲醛、敵百蟲、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)對斑點叉尾鮰幼魚24 h的半致死質(zhì)量濃度為74.51 mgL、5.58 mgL、6.97 mgL,48 h的半致死質(zhì)量濃度為49.20 mgL、3.84 mgL、4.99 mgL,安全質(zhì)量濃度為6.45 mgL、0.54 mgL、0.77 mgL。三種藥物毒性大小依次為敵百蟲、硫酸銅與硫酸亞鐵合劑(5∶2)、甲醛。本研究結(jié)果可為預(yù)防和治療斑點叉尾鮰小瓜蟲病及其他疾病提供指導(dǎo)。

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