新生兒同步行聽(tīng)力和耳聾基因篩查的意義

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(河北省兒童醫(yī)院，河北 石家莊 050031)

先天性聽(tīng)力損失的病因既包括遺傳因素，亦包括環(huán)境因素，其中新生兒耳聾病因中，因遺傳因素引起的患兒約為66%，而<4歲的患兒中遺傳因素則約為72%[1-2]。遺傳性耳聾既包括先天性聽(tīng)力損失，亦包括遲發(fā)性聽(tīng)力損失。多項(xiàng)新生兒聽(tīng)力篩查研究發(fā)現(xiàn)，部分患兒出生時(shí)既被確診為聽(tīng)力損失，而部分患兒會(huì)攜帶引起遲發(fā)性聽(tīng)力損失的基因突變，包括SLC26A4、GJB3、GJB2、12SrRNA等基因突變[3-5]。該類患兒在出生時(shí)能夠通過(guò)聽(tīng)力篩查，但伴隨著年齡的不斷增長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致遲發(fā)性聽(tīng)力損失的發(fā)生。當(dāng)前，常規(guī)的聽(tīng)力篩查方法容易出現(xiàn)遲發(fā)性聽(tīng)力損失患兒遺漏的情況，而同步行聽(tīng)力和耳聾基因聯(lián)合篩查，一方面能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)出生時(shí)就確診為聽(tīng)力損失的患兒，另一方面亦能夠預(yù)測(cè)遲發(fā)性聽(tīng)力損失患兒，進(jìn)而能夠延遲或防止聽(tīng)力損失的情況出現(xiàn)[6-7]。本研究對(duì)2 856例新生兒進(jìn)行同步聽(tīng)力和耳聾基因聯(lián)合篩查，現(xiàn)對(duì)結(jié)果分析如下。

1資料與方法

1.1一般資料

利用隨機(jī)數(shù)字表法，隨機(jī)選取2016年6月至2017年3月疑聽(tīng)力損失在河北省兒童醫(yī)院就診的2 856例新生兒，進(jìn)行同步聽(tīng)力和耳聾基因聯(lián)合篩查。其中出生后進(jìn)入新生兒重癥監(jiān)護(hù)室(neonatal intensive care unit，NICU)者共224例。本研究?jī)?nèi)容已獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)，且所有新生兒的監(jiān)護(hù)人均自愿參與本研究并簽署知情通知書(shū)。

1.2篩查方法

1.2.1聽(tīng)力篩查

初篩時(shí)，針對(duì)母嬰同室的新生兒，采取瞬態(tài)誘發(fā)耳聲發(fā)射(transitory evoked otoacoustic emission，TEOAE)篩查方法，儀器為篩查型耳聲發(fā)射儀(產(chǎn)自美國(guó)VIASYS NEUROCARE公司，型號(hào)為GSI70)；對(duì)在NICU者進(jìn)行TEOAE法聯(lián)合自動(dòng)聽(tīng)性腦干反應(yīng)(auto-auditory brainstem response，AABR)篩查方法，設(shè)備為客觀聽(tīng)覺(jué)測(cè)試平臺(tái)(產(chǎn)自丹麥國(guó)際聽(tīng)力設(shè)備公司，型號(hào)為Eclipse)。兩種方法均在<40dB(A)噪聲的環(huán)境下進(jìn)行篩查。同時(shí)，針對(duì)未通過(guò)初篩的新生兒，于6周后進(jìn)行第二次篩查操作，而復(fù)篩仍未通過(guò)的新生兒，則在3個(gè)月后進(jìn)行聽(tīng)力學(xué)診斷操作。

1.2.2基因篩查

采集新生兒出生第三天時(shí)的足跟血3滴，血斑直徑為6mm，并在室溫下進(jìn)行放置，且經(jīng)過(guò)干燥后，通過(guò)基因芯片技術(shù)檢測(cè)新生兒4個(gè)常見(jiàn)耳聾基因。針對(duì)篩查后出現(xiàn)單雜合攜帶的新生兒，抽取其3mL靜脈血，并通過(guò)Sanger法進(jìn)行SLC26A4、GJB3、GJB2及線粒體12SrRNA的全序列測(cè)序操作。

1.3聽(tīng)力診斷與評(píng)估

針對(duì)聽(tīng)力初篩、復(fù)篩未通過(guò)及攜帶耳聾基因的新生兒均進(jìn)行聽(tīng)力診斷處理。①基本情況：了解患兒母孕期疾病史、耳毒性藥物用藥史及耳聾家族遺傳史等情況。②聲導(dǎo)抗測(cè)試操作：儀器為美國(guó)診斷型聲阻抗分析儀(中耳分析儀)(產(chǎn)自美國(guó)VIASYS NEUROCARE公司，型號(hào)為GSI-TympStarⅡ)，針對(duì)年齡低于6個(gè)月的新生兒選擇1kHz進(jìn)行探測(cè)音處理。③電生理檢查操作：檢查儀器為聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)電位儀(產(chǎn)自美國(guó)VIASYS NEUROCARE公司，型號(hào)為GSI Audera)，測(cè)試參數(shù)有短純音ABR、短聲ABR及多頻穩(wěn)態(tài)誘發(fā)電位等，均在<17dB(A)噪聲的環(huán)境下隔聲屏蔽室進(jìn)行檢測(cè)，且于檢查前行皮膚脫脂處理，極間阻抗在5k及以下，參考電極則放于雙耳乳突后，而記錄電極處于前額正中處，地級(jí)則處于鼻根處。④影像學(xué)操作：針對(duì)診斷為感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失的新生兒，進(jìn)行傳統(tǒng)顳骨CT檢查，并根據(jù)患兒情況必要時(shí)采取磁共振成像檢查。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將全組新生兒的臨床相關(guān)數(shù)據(jù)錄入SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理分析，計(jì)數(shù)資料用百分率(%)表示并采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1全組新生兒聽(tīng)力和耳聾基因篩查情況

全組中未通過(guò)聽(tīng)力初篩者共315例(11.03%)，其中有31例(9.84%)新生兒攜帶耳聾基因突變，在2 541例通過(guò)聽(tīng)力初篩的新生兒中，共有101例(3.97%)攜帶耳聾基因突變，未通過(guò)聽(tīng)力初篩的新生兒耳聾基因突變攜帶率明顯高于通過(guò)初篩者(χ2=5.46，P=0.01)；全組總體耳聾基因攜帶率為4.62%(132/2 856)；母嬰同室新生兒與在NICU新生兒的耳聾基因突變攜帶率比較無(wú)顯著性差異(χ2=0.97，P=0.21)，見(jiàn)表1。

表1 全組新生兒聽(tīng)力與耳聾基因篩查結(jié)果[n(%)]

2.2 132例耳聾基因攜帶者的基因分布情況

在132例耳聾基因攜帶者中，SLC26A4雜合突變34例，攜帶率為1.19%(34/2 856)；GJB2共85例，其中純合突變1例，復(fù)合雜合突變1例，雜合83例，攜帶率為2.98%(85/2 856)；線粒體12SrRNA突變5例，其中均質(zhì)突變4例，異質(zhì)性突變1例，攜帶率為0.18%(5/2 856)；GJB3雜合突變4例，攜帶率為0.14%(4/2 856)；GJB2合并SLC26A4突變4例，攜帶率為0.14%(4/2 856)，見(jiàn)表2。

表2 132例耳聾基因攜帶者聽(tīng)力篩查情況(n)

注：攜帶率指的是新生兒耳聾攜帶者在全部2 856例新生兒中的比例。

2.3全組耳聾基因測(cè)序情況

在123例耳聾基因初篩雜合攜帶的新生兒中(34例SLC26A4，83例GJB2，4例GJB3，2例GJB2合并SLC26A4)，共有49例患兒家屬同意進(jìn)行基因全序列測(cè)序操作，其中聽(tīng)力損失患兒3例，初篩時(shí)均為235delC攜帶者；3例聽(tīng)力損失患兒分別為1例極重度聽(tīng)力損失，對(duì)其GJB2基因進(jìn)行測(cè)序后發(fā)現(xiàn)另一致病位點(diǎn)131A>G，2例輕度聽(tīng)力損失患兒測(cè)序時(shí)發(fā)現(xiàn)109G>A突變位點(diǎn)；其他46例新生兒聽(tīng)力正常，均未發(fā)現(xiàn)致病突變。

2.4聽(tīng)力學(xué)診斷情況

全組中共對(duì)185例新生兒進(jìn)行聽(tīng)力學(xué)診斷，其中27例聲導(dǎo)抗單耳或雙耳鼓室圖顯示B型曲線，聽(tīng)力異常表現(xiàn)在輕度傳導(dǎo)性聽(tīng)力損失，且均在9月齡時(shí)，聽(tīng)力基本恢復(fù)正常；6例存在耳聾家族遺傳病史。最終5例患兒在3個(gè)月內(nèi)確診為感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失，且均為SLC26A4和GJB2基因突變，攜帶率為0.18%。5例感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 5例感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失患兒的檢測(cè)結(jié)果

Table 3 Screening results of 5 infants with sensorineural hearing loss

3討論

3.1新生兒耳聾基因的攜帶狀況

本研究發(fā)現(xiàn)，全組2 856例新生兒中有132例攜帶耳聾基因突變，攜帶率為4.62%。5例患兒在3個(gè)月內(nèi)確診為感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失，且均為SLC26A4和GJB2基因突變，攜帶率為0.18%。有研究報(bào)道指出，新生兒耳聾基因突變攜帶率為5.50%～6.83%，其中因SLC26A4與GJB2基因?qū)е碌穆?tīng)力損失攜帶率為0.60%～0.95%[8-9]?？梢?jiàn)，耳聾基因突變的攜帶率明顯較新生兒聽(tīng)力損失發(fā)生率高，并且，SLC26A4與GJB2兩組基因突變是導(dǎo)致新生兒聽(tīng)力損失的重要病因。本研究發(fā)現(xiàn)，在123例耳聾基因初篩雜合攜帶的新生兒中，聽(tīng)力損失患兒3例，初篩時(shí)均為235delC攜帶者，結(jié)果提示235delC突變是耳聾基因較為常見(jiàn)的突變位點(diǎn)。本研究還發(fā)現(xiàn)，全組中未通過(guò)聽(tīng)力初篩者共315例(11.03%)，其中有31例(9.84%)新生兒攜帶耳聾基因突變；而在2 541例通過(guò)聽(tīng)力初篩的新生兒中，共有101例(3.97%)攜帶耳聾基因突變；未通過(guò)聽(tīng)力初篩的新生兒耳聾基因突變攜帶率高于通過(guò)初篩者，結(jié)果提示可將聽(tīng)力篩查未通過(guò)的人群視為耳聾基因篩查的重點(diǎn)研究對(duì)象，此類人群參與耳聾基因篩查顯得尤為必要。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，耳聾基因突變攜帶率在NICU新生兒與母嬰同室新生兒中并無(wú)明顯差異，結(jié)果表明遺傳因素對(duì)母嬰同室新生兒與NICU新生兒聽(tīng)力的影響較為接近。

3.2新生兒耳聾基因的測(cè)序情況

本研究發(fā)現(xiàn)，在132例耳聾基因攜帶者中SLC26A4雜合突變34例，攜帶率為1.19%；GJB2共85例，攜帶率為2.98%；線粒體12SrRNA突變5例，攜帶率為0.18%；GJB3雜合突變4例，攜帶率為0.14%；GJB2合并SLC26A4突變4例，攜帶率為0.14%。其中，GJB2基因突變的表現(xiàn)包括非綜合征性隱性遺傳性聾，亦包括非綜合征性顯性遺傳性聾[10]。通常情況下，常染色體顯性遺傳性耳聾往往表現(xiàn)在遲發(fā)性聽(tīng)力損失，其聽(tīng)力損失程度較輕，而常染色體隱性遺傳性耳聾的發(fā)病時(shí)間較早，且癥狀較為嚴(yán)重[11-12]。本研究中5例聽(tīng)力損失患兒，由于其攜帶多種基因位點(diǎn)，具有不同聽(tīng)力學(xué)表型；其中1例患兒測(cè)序后結(jié)果為235delC/109G>A復(fù)合雜合突變。由于109G>A純合突變會(huì)導(dǎo)致離子通道功能出現(xiàn)異常，進(jìn)而導(dǎo)致遺傳性耳聾。同時(shí)，109G>A突變攜帶率相對(duì)較高，而其臨床表型較輕。本研究5例感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失中，輕度聽(tīng)力損失患兒2例，測(cè)序時(shí)發(fā)現(xiàn)109G>A突變位點(diǎn)。GJB2引起的聽(tīng)力損失通常是非進(jìn)行性的，而109G>A所引起的聽(tīng)力損失會(huì)導(dǎo)致患者發(fā)生漸進(jìn)性聽(tīng)力下降[13]。GJB2純合突變與復(fù)合突變發(fā)病時(shí)間均較早，且聽(tīng)力損失較為嚴(yán)重，甚至為極重度者。這可能與其攜帶的熱點(diǎn)突變位點(diǎn)密切相關(guān)，其中235delC是最為常見(jiàn)的突變位點(diǎn)，由于其是截?cái)嗤蛔冎?，?duì)聽(tīng)力損失的影響較大，癥狀較重。本研究中無(wú)論是235delC純合突變患兒，亦或是235delC復(fù)合突變患兒，其聽(tīng)力損失均較為嚴(yán)重。因GJB2基因突變所引起的病變以耳蝸為主，患者能夠保留較多的螺旋神經(jīng)纖維，且能夠維持聽(tīng)覺(jué)通路的完整性[14]。

3.3同步行聽(tīng)力和耳聾基因聯(lián)合篩查的必要性及意義

耳聾基因篩查能夠及時(shí)篩查出致病的突變基因，可以有效延遲或避免遲發(fā)性聽(tīng)力損失的出現(xiàn)，并且能夠發(fā)現(xiàn)聽(tīng)力正常而攜帶耳聾基因的新生兒。有研究指出，攜帶耳聾基因的新生兒中約有82%能夠通過(guò)聽(tīng)力篩查[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，在2 541例通過(guò)聽(tīng)力初篩的新生兒中，有101例攜帶耳聾基因突變，攜帶率為3.97%?？梢?jiàn)，若單一進(jìn)行聽(tīng)力篩查，容易遺漏攜帶耳聾基因突變的患兒。對(duì)此類高危人群進(jìn)行聽(tīng)力學(xué)診斷顯得尤為重要。本研究共有49例患兒家屬同意進(jìn)行基因全序列測(cè)序操作，診斷為聽(tīng)力損失的新生兒3例，且初篩時(shí)均為235delC攜帶者。3例聽(tīng)力損失患兒分別為1例極重度聽(tīng)力損失，對(duì)其GJB2基因進(jìn)行測(cè)序后發(fā)現(xiàn)另一致病位點(diǎn)131A>G；對(duì)2例輕度聽(tīng)力損失患兒測(cè)序時(shí)發(fā)現(xiàn)109G>A突變位點(diǎn)，結(jié)果提示有必要對(duì)235delC攜帶者進(jìn)行基因測(cè)序，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)其他致病突變。

本研究發(fā)現(xiàn)，全組中對(duì)185例新生兒進(jìn)行了聽(tīng)力學(xué)診斷，其中27例聲導(dǎo)抗單耳或雙耳鼓室圖顯示B型曲線，聽(tīng)力異常表現(xiàn)在輕度傳導(dǎo)性聽(tīng)力損失，且均在9月齡時(shí)，聽(tīng)力基本恢復(fù)正常；6例存在耳聾家族遺傳病史。新生兒同步行聽(tīng)力和耳聾基因聯(lián)合篩查是及時(shí)發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性高危聽(tīng)障患兒的重要方法。以往單一的聽(tīng)力篩查方法僅對(duì)聽(tīng)力篩查未通過(guò)的新生兒進(jìn)行常規(guī)聽(tīng)力檢測(cè)，而未對(duì)耳聾基因攜帶者做進(jìn)一步評(píng)估。同步行聽(tīng)力和耳聾基因聯(lián)合篩查既能夠及時(shí)發(fā)現(xiàn)聽(tīng)力篩查未通過(guò)的新生兒，亦能夠?qū)νㄟ^(guò)聽(tīng)力篩查而攜帶耳聾基因突變的患兒做進(jìn)一步聽(tīng)力學(xué)診斷，最終提高診斷的準(zhǔn)確性。

綜上所述，新生兒同步行聽(tīng)力和耳聾基因聯(lián)合篩查可利用二者綜合篩查的作用，利于盡早發(fā)現(xiàn)聽(tīng)力損失新生兒，特別是遲發(fā)性聽(tīng)力損失者，具有顯著的臨床意義。