程 曦, 楊海燕
(1. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830052;2. 新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所,新疆烏魯木齊 830004)
羊肚菌別稱美味羊肚菌、羊肚子、陽(yáng)雀菌、蜂窩蘑、羊肚菜,系子囊菌門(Ascomycota)、盤菌綱(Pezizomycetes)、 盤菌目 (Pezizales)、 羊肚菌科(Morchellaceae)、羊肚菌屬(Morchella) 真菌的總稱[1]。羊肚菌含有多種化學(xué)成分,如酶、多糖、氨基酸、甾醇、有機(jī)酸等,還具有多方面的藥理活性,如免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗疲勞、抗衰老、保護(hù)心血管、保護(hù)胃黏膜、保護(hù)腎臟、保護(hù)肝臟等[2]。脂肪酸對(duì)人體健康有重要意義,參考相關(guān)文獻(xiàn)[3-6],利用氣相色譜法,測(cè)定羊肚菌(干品)中的脂肪酸,為羊肚菌(干品)的品質(zhì)評(píng)價(jià)及營(yíng)養(yǎng)成分分析提供一定的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
4種羊肚菌(干品) 分別編號(hào)為1,2,3,4號(hào),1號(hào)為云南野生、2號(hào)為云南人工種植、3號(hào)為四川野生、4號(hào)為四川人工種植;樣品粉碎,過(guò)50目篩,混勻備用;石油醚、正己烷、甲醇、氫氧化鉀均為分析純;37種脂肪酸甲酯對(duì)照品,NU-CHEKPREP公司提供,批號(hào):JY3-Y。
GC-2010 Plus型氣相色譜儀,日本島津公司產(chǎn)品;氫離子火焰檢測(cè)器,色譜柱(DB-23,60 m×0.15 mm×0.25 μm),美國(guó)安捷倫公司產(chǎn)品。
1.3.1 樣品前處理方法
分別精密稱取4種羊肚菌(干品) 粉末各10 g,加100 mL石油醚(30~60 ℃),索氏提取6 h,旋轉(zhuǎn)蒸干,加4 mL正己烷,0.1 mL氫氧化鉀-甲醇溶液,渦旋1 min,以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min,取上清液,即得樣品溶液。
1.3.2 氣相色譜條件
進(jìn)樣口溫度270 ℃,檢測(cè)器溫度280 ℃,分流比100∶1,流速1.10 mL/min,程序升溫為柱溫100 ℃保持13 min, 以10 ℃/min升至180 ℃保持6 min,以1 ℃/min升至200 ℃保持20 min, 再以4 ℃/min升至230 ℃,保持10.5 min,進(jìn)樣量1 μL。
按照“1.3.2”進(jìn)樣1 μL,采用面積歸一化法進(jìn)行定量分析。
脂肪酸組成相對(duì)含量見表1。
表1 脂肪酸組成相對(duì)含量
從表1可以看出,羊肚菌(干品) 的脂肪酸組成非常豐富,樣品1中含有20種脂肪酸,樣品2中含有12種脂肪酸,樣品3中含有14種脂肪酸,樣品4中含有12種脂肪酸。樣品1中γ-亞麻酸含量達(dá)到16.421%,而其他3個(gè)樣品未檢出;樣品2,3,4中α-亞麻酸含量分別達(dá)到20.987%,23.201%,19.468%,含量較高,而樣品1中α-亞麻酸的含量?jī)H有0.602%;花生一烯酸的含量在4個(gè)樣品中含量均較高,分別為61.443%,61.010%,61.974%,66.264%。
其他含量較高的脂肪酸為十七碳一烯酸,含量在4個(gè)樣品中分別達(dá)到11.792%,10.571%,10.187%,9.951%。
從表1可以看出,飽和脂肪酸(SFA) 在4個(gè)樣品中含量均較低,分別為1.86%,1.745%,0.619%,0.625%,單不飽和脂肪酸(MUFA) 在4個(gè)樣品中含量均較高,為羊肚菌(干品) 主要脂肪酸,4個(gè)樣品中MUFA含量分別為76.834%,71.851%,72.527%,76.802%。多不飽和脂肪酸(PUFA) 含量也較高,4個(gè)樣品中PUFA含量分別為22.528%,24.946%,26.87%,22.423%。
脂肪酸(Fatty acid),是一類含有長(zhǎng)鏈烴的脂肪族羧酸化合物,通常以酯的形式存在中性脂肪、磷脂和糖脂等各種脂質(zhì)組分中,以游離形式存在的比較罕見,是機(jī)體主要能量來(lái)源之一[6]。不飽和脂肪酸可以降低血液中膽固醇和甘油三酯,調(diào)節(jié)心臟功能,降低血液黏稠度,增加記憶力和思維能力[7]。食品中脂肪酸的檢測(cè),目前已經(jīng)有很多檢測(cè)技術(shù),除氣相色譜(GC) 外,常見的還有高效液相色譜法(HPLC)、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)、紅外光譜法、核磁共振法等。但因?yàn)殪`敏度高、分離性好、檢出限低,氣相色譜法仍然是當(dāng)下應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)方法。由于脂肪酸在食品中大多以甘油酯的形式存在,一般都涉及水解提取、衍生等前處理方法。脂肪提取、甲酯化處理、FID 氫火焰離子化檢測(cè)器的氣相色譜法是最普及的,現(xiàn)如今不斷有研究者將該方法應(yīng)用于植物油、動(dòng)物油、嬰幼兒食品和乳品等各類食品的檢測(cè)中[6]。氣相色譜檢測(cè)條件的優(yōu)化有脂肪提取的優(yōu)化、甲酯化的優(yōu)化、色譜條件的優(yōu)化等。研究采用索氏提取法提取羊肚菌(干品)中的脂肪酸,試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、試驗(yàn)條件要求較低,但其具有耗時(shí)長(zhǎng)、溶劑消耗大的缺點(diǎn),故與其他提取方法的比較還有待進(jìn)一步研究。甲酯化的優(yōu)化,旨在對(duì)甲酯化過(guò)程各因素的摸索中尋找最優(yōu)的反應(yīng)條件,以獲得更高的甲酯化效率,同時(shí)提高試驗(yàn)過(guò)程的操作性和安全性。試驗(yàn)考查了多種色譜柱,最終發(fā)現(xiàn)安捷倫DB-23型,60 m×0.15 mm×0.25 μm色譜柱分離度高、分離時(shí)間短,在56 min內(nèi)能實(shí)現(xiàn)基本分離。
羊肚菌(干品)含有多種具有生理和藥理活性的化學(xué)成分,如多糖類、酶、有機(jī)酸、甾醇、皂苷等,因而其具有多樣的藥理作用,如抗腫瘤、保肝、護(hù)腎、調(diào)節(jié)免疫功能、抗疲勞等。試驗(yàn)考查了脂肪酸提取和甲酯化條件,優(yōu)化了色譜分離條件,最終建立了氣相色譜法測(cè)定羊肚菌(干品)中脂肪酸含量的方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)飽和脂肪酸(SFA) 在4批次樣品中含量均較低,分別為1.86%,1.745%,0.619%,0.625%;單不飽和脂肪酸(MUFA) 在4批次樣品中含量均較高,分別為76.834%,71.851%,72.527%,76.802%;多不飽和脂肪酸(PUFA) 含量也較高,含量分別為22.528%,24.946%,26.87%,22.423%。不飽和脂肪酸的含量均≥95%,進(jìn)一步說(shuō)明了羊肚菌(干品) 的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。