乙肝病毒血清學檢驗采用化學發(fā)光法與酶聯(lián)免疫法的效果對比

林 靜 羅偉波

廣東省東莞市橋頭醫(yī)院，廣東東莞 523520

乙型病毒性肝炎由具有傳染性的乙肝病毒感染引起，患者的常見癥狀主要有惡心、食欲減退、肝大、乏力、肝功能異常等，部分患者伴有黃疸和發(fā)熱現(xiàn)象；少數(shù)乙肝病毒攜帶者無明顯癥狀；少數(shù)患者由于治療不及時，病情不斷緩慢發(fā)展，可導致患者肝硬化，甚至發(fā)展為肝臟惡性腫瘤；病情嚴重的患者可在較短的時間內(nèi)發(fā)展為重型肝炎，對患者的生命和健康造成嚴重的威脅和影響[1-2]。由于乙型肝炎病毒的傳播途徑包括母嬰傳播、輸血傳播、醫(yī)源性傳染、性傳播、密切生活接觸傳播等，為了控制病毒的傳播和擴散，降低病毒的感染率，控制患者病情的發(fā)展，應及時給予疑似乙型肝炎患者進行早期檢查和診斷[3]。對乙肝病毒的血清學檢測主要有酶聯(lián)免疫法和化學發(fā)光法，兩者均在乙型肝炎的診斷中具有積極作用，但不同的檢驗方法檢驗的效果存在一定的差異[4]。為了對比兩種檢驗方法在乙肝診斷中的價值，本研究將90例疑似乙肝患者平均分為兩組，分別采用酶聯(lián)免疫法、化學發(fā)光法進行乙肝病毒血清學檢驗，分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次的研究對象為2016年7月～2017年12月于我院接受診斷檢查的乙型肝炎疑似患者90例，根據(jù)乙肝病毒血清學檢驗方法的不同將研究對象分為實驗組和對照組，各45例。其中，實驗組男25例，女20例；年齡19～62歲，平均（35.4±3.1）歲；對照組女22例，男23例；年齡20～61歲，平均（35.2±3.3）歲。將兩組患者的一般資料運用統(tǒng)計學軟件進行對比分析，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

為保證檢驗結(jié)果的準確性，要求患者在檢驗的前一天晚上8點后禁止進食。乙肝病毒血清學檢驗當日清晨，取5mL患者的空腹靜脈血，并進行血清分離，血樣品的離心頻率為每分鐘3000轉(zhuǎn)，共離心10min。

待血清分離完畢后，給予對照組采用酶聯(lián)免疫法進行血清學檢測，方法具體如下：按照酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（上海科華生物工程股份有限公司）的詳細說明書進行仔細操作，將試劑盒置于室溫中30min，設置陽性、陰性以及空白對照孔，分別按照各試劑操作，將相應量的標準液注入陰性和陽性對照孔中，之后再按要求分別加注相應量的特異酶（其中乙肝表面抗原加樣后應先在37℃的水浴箱中孵育60 min后再加入相應量的特異酶），隨后進行混勻以及封膜操作。將樣本放置于37℃的水浴箱中孵育30 min，注意避免光照。洗板，顯色后，加入終止液。對血清中的HBsAg、HBsAb、HBeAg、抗HBeAb以及抗HBcAb 5項指標進行酶標儀比色，記錄結(jié)果。

實驗組采用化學發(fā)光法進行檢驗，方法：使用羅氏Cobas e411全自動化學發(fā)光免疫分析儀，試劑為產(chǎn)自德國羅氏診斷有限公司的配套試劑。按照操作說明放置配套的吸頭、反應杯、洗液等，檢測5項乙型肝炎指標。

1.3 觀察指標與判定標準

觀察兩組患者的乙肝病毒陽性檢出率，陽性檢出判定標準：所得測量值小于參考值，則判斷為陰性，若測量值大于參考值，則可判斷為陽性。各項檢查指標的參考值：（1）HBsAg（乙肝表面抗原），0～ 0.05IU/mL；（2）HBsAb（乙 肝 表 面 抗 體），0～10.00mIU/mL；（3）HBeAg（乙肝e抗原），S/CO：＜1；（4）HBeAb（乙肝 e抗體），S/CO：＞1；（5）HBcAb（乙肝核心抗體），S/CO：＞ 1[5]。用兩種方法對不同濃度下患者血清中的乙肝表面抗原進行測定，進而對比兩種檢測方法在乙肝表面抗原中的檢測靈敏度。對兩組結(jié)果進行分析，當HBeAg≥1.0 S/CO為陽性，HBsAg濃度＞0.05IU/mL為陽性，HBsAb濃度＞10.00mIU/mL為陽性，HBcAb＜1.0 S/CO為陽性，HBeAb＜1.0S/CO時為陽性[6]。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用統(tǒng)計學軟件SPSS20.0版對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以百分數(shù)（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者檢測靈敏度比較

在濃度為 1.5、3.0、9.0、12.0ng/mL 時，實驗組檢測血清乙肝表面抗原的靈敏度分別為22.22%、28.89%、35.56%、55.56%，而對照組分別為6.67%，11.11%、15.56%、26.67%，實驗組在不同濃度下對血清乙肝表面抗原的檢測靈敏度均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同濃度下兩組患者的檢測靈敏度比較[n（%）]

2.2 兩組患者陽性檢出率比較

實驗組的陽性檢出率為84.44%，對照組為62.22%，兩組數(shù)據(jù)相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者的陽性檢出率比較

表3 兩組患者的乙肝病毒血清定性和定量檢測結(jié)果比較[n（%）]

2.3 兩組患者乙肝病毒血清定性和定量檢測結(jié)果比較

實驗組的血清檢測數(shù)據(jù)均顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

3 討論

乙肝為傳染性疾病，可發(fā)展為肝硬化和肝癌，對患者的危害性極大，早期檢測和診斷對臨床的預防和療效具有重要意義。HBsAg（乙肝表面抗原）為乙肝病毒中不存在傳染性的外殼蛋白，但該蛋白的出現(xiàn)通常是因為乙肝病毒的出現(xiàn)，因而乙肝表面抗原成為機體已經(jīng)感染乙肝病毒的一個標志[7]。被乙肝感染的患者的血液、鼻咽分泌物、生殖器官分泌物中隨處可見HBsAg。在機體感染病毒后2～6個月，可在患者的血清中檢出陽性。大部分急性乙肝患者的HBsAg可在疾病早期由陽性轉(zhuǎn)為陰性，而慢性乙肝患者則繼續(xù)呈陽性。HBsAb（乙肝表面抗體）是一種保護性抗體，在機體感染乙肝病毒后，機體對HBsAg蛋白產(chǎn)生的一種免疫反應性抗體[8]。HBsAb通常在機體初次感染乙型肝炎病毒后的6 ～ 23周內(nèi)出現(xiàn)，并且持續(xù)出現(xiàn)的時間可長達數(shù)年，當HBsAb呈陽性時則表明機體已經(jīng)獲得免疫。

在機體感染乙型肝炎病毒后，大多數(shù)受檢者的血清中均可以檢測出HBcAb（乙肝核心抗體），因此HBcAb成為具有較高的敏感性的血清學標志。此外，HBcAb屬于急性乙肝病毒感染的早期標志，在患者的血清中可長時間存在，且部分患者的滴度相當高，在HBsAg呈陰性時，可以從受檢者的血清中檢出HBcAb，因此乙肝核心抗體滴度高也是機體感染乙肝病毒的一種標志[9]。HBeAb（乙肝e抗體）是乙肝病毒感染后機體出現(xiàn)的抗體，屬于機體感染乙肝病毒的又一種標志性物質(zhì)。HBeAb不屬于保護性抗體，HBeAb的出現(xiàn)通常意味著機體中的乙肝病毒的復制數(shù)量已經(jīng)明顯減少或者趨于停止。在HBeAb呈陽性的患者中，若HBV-DNA的檢測結(jié)果呈陰性，則表明機體內(nèi)的乙肝病毒復制正在減少，傳染性較弱；但若HBV-DNA的檢驗結(jié)果顯示是陽性，則表明患者體中的病毒正在大量復制，這些不斷復制的病毒可能由病毒變異所致，因此需要接受抗病毒治療[10]。當前對乙肝標志物進行檢測的主要方法有酶聯(lián)免疫法和化學發(fā)光法。但酶聯(lián)免疫法因操作簡單且價格相對低廉，常被用于大批量標本的檢測中，但其容易受到各種因素的影響從而導致操作時發(fā)生污染，檢測的準確率和靈敏度較低[11-12]。在乙肝病毒的化學發(fā)光法檢驗中，全自動儀器和配套試劑的使用使得檢測更加自動化和標準化。該檢驗方法的靈敏度明顯較高，可減少操作和檢測誤差，分析較準確，降低假陰性的可能性，從而提高檢測的準確性[13]。此外，該檢驗方法還具有消耗量少、穩(wěn)定性大的優(yōu)點，因而成為當前臨床上較為先進的血清學檢測系統(tǒng)[14]。本次研究分別給予實驗組和對照組采用化學發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法進行乙肝病毒檢驗，經(jīng)研究，發(fā)現(xiàn)在采用化學發(fā)光法檢測的實驗組中陽性乙肝患者的檢出例數(shù)為38例，陽性檢出率為84.44%（38/45），明顯高于采用酶聯(lián)免疫法檢測對照組的陽性檢出率62.22%（28/45），兩組對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），由此可見化學發(fā)光法對乙肝病毒的陽性檢出率較高。不同濃度條件下實驗組血清乙肝表面抗原的靈敏度（分別為 22.22%、28.89%、35.56%、55.56%）均顯著高于對照組的靈敏度（分別為6.67%、11.11%、15.56%、26.67%），此外，和對照組相比，實驗組的血清檢測結(jié)果數(shù)據(jù)均較高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。本次研究與李蘭英[15]的研究結(jié)果具有相似之處，可見酶聯(lián)免疫法的陽性檢測率和血清乙肝表面抗原的靈敏度均明顯低于化學發(fā)光法。

綜上所述，在乙肝病毒血清學檢驗中化學發(fā)光法的優(yōu)越性更高，檢測血清乙肝表面抗原的靈敏度以及乙肝病毒的陽性檢出率均較高，檢測較為精確，可提高診斷的準確性，為臨床控制乙肝病毒的傳播提供有利的參考價值。