東莞地區(qū)340例β地中海貧血的基因診斷回顧分析

華仙麗 ，李敬河 ，梁愛芬 ，雷亞麗 ，隋洪

(1、東莞康華醫(yī)院，廣東 東莞 523080；2、東莞市石碣醫(yī)院，廣東 東莞 523290)

地中海貧血是一組嚴(yán)重威脅人類健康的常染色體隱性遺傳病，它是由珠蛋白基因突變導(dǎo)致珠蛋白合成數(shù)量不足或缺失引起的溶血性貧血[1]。我國(guó)長(zhǎng)江以南地區(qū)是此病的高發(fā)區(qū)，尤以廣東、廣西、海南為甚。東莞市地處珠三角，人口結(jié)構(gòu)復(fù)雜，聚居了南方各省務(wù)工人員，人口流動(dòng)性大，不同人群之間通婚導(dǎo)致該地區(qū)地貧基因缺陷類型逐漸多元化，已成為當(dāng)前影響出生人口素質(zhì)的因素之一。因此，調(diào)查本地區(qū)地貧基因攜帶以及基因突變類型分布情況具有重要意義。當(dāng)夫婦雙方均為同型地貧攜帶者時(shí)，同型攜帶者婚配的下一代有1/4的機(jī)會(huì)患重癥地中海貧血，出現(xiàn)嚴(yán)重貧血癥狀。因此，開展地貧篩查，必要時(shí)進(jìn)行產(chǎn)前診斷，是防止重型地貧患兒出生，達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的重要措施。本文對(duì)東莞地區(qū)2016年1月-2017年10月期間β地貧基因攜帶者的基因頻率和血常規(guī)結(jié)果及血紅蛋白電泳結(jié)果進(jìn)行了分析，以期明確本地區(qū)β地貧患者的基因分布，及其血常規(guī)參數(shù)及血紅蛋白電泳的變化情況。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 東莞地區(qū)2016年1月-2017年10月期間，經(jīng)基因診斷確診β-地中海貧血攜帶的門診及住院患者共340例，其中男110例，女230例。年齡7個(gè)月～71歲，平均年齡27.5歲。

1.2 方法

1.2.1 血常規(guī)檢測(cè) EDTA-K2抗凝血 2ml，邁瑞CD6800血細(xì)胞全自動(dòng)計(jì)數(shù)儀檢測(cè)。

1.2.2 血紅蛋白電泳EDTA-K2抗凝血2ml，用SEBIA全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀定量檢測(cè)各血紅蛋白成份的比例，分析異常血紅蛋白區(qū)帶。

1.2.3 β地貧初篩 同時(shí)進(jìn)行血常規(guī)MCV/MCH和HbA2電泳分析的篩查，若 MCV＜82fl或（和）MCH＜27pg或（和）HbA2水平升高（＞3.5），則 β 地貧篩查陽性，即進(jìn)行β地貧基因檢測(cè)。

1.2.4 基因診斷EDTA-K2抗凝血2ml，用深圳益生堂地貧基因檢測(cè)試劑，采用反向斑點(diǎn)雜交法檢測(cè)β-基因的基因型別。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 經(jīng)基因診斷為β地貧的患者，統(tǒng)計(jì)分析其血常規(guī)及血紅蛋白電泳結(jié)果。數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）形式表示。

2 結(jié)果

2.1 β-地中海貧血各基因突變類型及比例 340例患者中共檢出11種β-地貧基因突變類型，其中CD41-42M/N最為常見，占36.76%，其次是IVS-2-654M/N，占26.47%，CD17M/N與-28M/N分別占13.82%，東莞地區(qū)的地貧基因突變類型以CD41-42M/N，654M/，N，17M/N，-28M/N 4 種突變?yōu)橹鳎鸡峦蛔兊?0.85%。見表1。

2.2 α-復(fù)合 β-地中海貧血檢測(cè)結(jié)果 見表2。

表1 β-地中海貧血各基因突變類型及比例(n，%)

2.3 β-地貧各基因型的血常規(guī)參數(shù)結(jié)果 -28/N的HGBMCVMCH與其他型別比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外，其余各組未見明顯差異。見表3。

2.4 MCV、MCH、Hb電泳單項(xiàng)檢測(cè)篩查地中海貧血的結(jié)果 在分子生物學(xué)技術(shù)確診的基礎(chǔ)上，評(píng)價(jià)MCV、MCH、Hb電泳對(duì)于β地貧篩查的靈敏度為99.02%、99.02%、99.35%。 見表 4。

3 討論

β-地中海貧血是為常染色體單基因遺傳血液病，是由于基因組中β珠蛋白基因突變導(dǎo)致β珠蛋白肽鏈缺如(β0)或合成不足(β+)所致，β-地貧單一雜合子可無臨床癥狀或僅有輕度貧血；雙重雜合子或純合子患者臨床表現(xiàn)為中度或重度貧血[2，3]。重度貧血的患兒，需定期或不定期輸血，不接受治療的患兒常常因發(fā)育遲緩而呈典型的 “地貧面容”，常在5歲以前因嚴(yán)重貧血或繼發(fā)感染在兒童期死亡[2]。重型β地貧的患兒除非找到合適的供體進(jìn)行造血干細(xì)胞移植才有治愈的希望。因此，了解本地區(qū)β-地貧發(fā)生率及突變類型，加強(qiáng)地貧的宣傳教育，加強(qiáng)β-地貧產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前基因診斷，仍是目前β-地貧防治最有效的措施。

表2 αβ復(fù)合型地中海貧血檢測(cè)結(jié)果

表3 β-地貧各基因型的血常規(guī)參數(shù)及血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果（±s）

表3 β-地貧各基因型的血常規(guī)參數(shù)及血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果（±s）

CD41-42M/N IVS-2-654M/N CD17M/N-28M/N n 125 90 47 47 HGB(g/L) MCV（fL） MCH(pg) HBA（%） HBF（%） HBA2（%）106.62±18.03 110.60±20.22 102.22±17.57 117.88±24.50 64.83±5.64 65.63±7.12 63.71±4.89 73.39±5.29 20.35±2.36 21.02±2.49 20.11±1.44 23.40±2.11 93.39±1.41 93.35±1.55 92.96±1.60 92.67±2.08 1.47±1.37 1.93±1.44 1.83±1.69 2.35±2.34 5.36±0.51 5.13±0.36 5.43±0.88 5.53±0.47

表4 MCV、MCH、Hb電泳單項(xiàng)檢測(cè)篩查地中海貧血的結(jié)果

不同地區(qū)、不同種族的人群有自已的常見基因突變類型。國(guó)內(nèi)報(bào)道中國(guó)人最主要6種β地貧突變基因[4]分別為：CD41-42(-TCTT)、IVS-2-654(C＞T)、-28(A＞G)、CDl7(A＞T)、CD71-72(+A)、CD26(G＞A)。 在國(guó)內(nèi)β地貧高發(fā)區(qū)CD41-42(-TCTT)基因突變?cè)趶V東、廣西、臺(tái)灣、四川、海南四省占首位。IVS-2-654(C＞T)基因突變?cè)谙愀壅际孜唬趶V東、臺(tái)灣、四川、海南等位居CD41-42突變之后。CDl7(A＞T)基因突變?cè)趶V西排第二位，僅次于CD41-42(-TCTT)突變[5]。而地理位置靠近廣西地區(qū)的中山小欖CDl7(A＞T)基因突變也排在第二位[6]。各研究[7-11]顯示廣東不同地區(qū)人口-28(A＞G)與CDl7(A＞T)突變?nèi)巳罕壤盼宦杂胁煌?。本?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，東莞地區(qū)排在前四位的是：CD41-42(-TCTT)占 36.76%占首位，IVS-2-654(C＞T)占 26.47%居第二位，-28(A＞G)和 CDl7(A＞T)各占13.82%（并列第三位），這四種突變類型約占全部突變類型的90.85%。本次統(tǒng)計(jì)東莞地區(qū)人口未區(qū)分戶籍，東莞地區(qū)匯集廣東各地及廣西、海南等地的務(wù)工人員，-28(A＞G)和 CDl7(A＞T)突變的人群比例相近。

在β地貧基因型分組血常規(guī)參數(shù)比較中可以發(fā)現(xiàn)，-28M/N組的MCV、MCH、HGB最高，其原因是發(fā)生在轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子附近的突變-28M/N可影響到肽鏈合成的速率，而發(fā)生在編碼區(qū)的突變41-42M/N和17M/N則影響到了肽鏈的穩(wěn)定性及其產(chǎn)量。故-28M/N的貧血情況較其余三組輕。其余三組結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

血紅蛋白電泳對(duì)地貧的篩查起到了非常重要的作用，能夠定量檢測(cè)HbA、HbF、HbA2含量，將地中海貧血進(jìn)行初步分為a地貧和β地貧，同時(shí)還可篩查出各種異常血紅蛋白，如HbH、HbE、HbG等。有研究顯示[12]，血紅蛋白電泳可以篩查出95%以上的β-地貧或α-復(fù)合β-地貧，有助于臨床β地貧確診。當(dāng)HbA2水平升高（＞3.5）時(shí)，產(chǎn)前診斷中若僅進(jìn)行β-地貧基因診斷，忽視α-地貧基因診斷，會(huì)導(dǎo)致重癥α地貧患兒的出生[13]。因此，在HbA2升高的可疑地貧人群中，有必要α和β基因一起檢測(cè)，以免漏檢α和β地貧基因攜帶情況。

迄今為止，中國(guó)人群已發(fā)現(xiàn)30余種β珠蛋白基因的點(diǎn)突變，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的17種基因型覆蓋了我國(guó)β突變類型的95%以上[14]，本實(shí)驗(yàn)所用方法（PCR-RDB）不檢測(cè)缺失型β-地中海貧血和罕見的β突變類型。因此，在對(duì)于地貧初篩陽性、HbA2升高提示存在β地貧，而常規(guī)PCR-RDB方法未檢測(cè)到突變者要進(jìn)行測(cè)序分析，避免罕見突變?chǔ)碌刎毣颊叩穆┰\，從而避免罕見突變引起重型β地貧患兒的出生[15]。

本研究在分子生物學(xué)技術(shù)確診為β-地貧的基礎(chǔ)上，評(píng)價(jià)MCV、MCH、Hb電泳對(duì)于β地貧篩查的敏感性為99.02%、99.02%、99.35%。三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)β地貧篩查而言，敏感性高，本研究未發(fā)現(xiàn)有漏檢情況。說明這3個(gè)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于β地貧是非常好的一個(gè)篩查策略。