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(浙江省縉云縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,浙江 縉云 321400)
近年來,我國各地對(duì)豬瘟和豬藍(lán)耳病的預(yù)防和撲滅做了大量工作,曾經(jīng)的“高熱發(fā)紅急性致死”的“高熱病”已不復(fù)存在,但以免疫抑制為主要危害的PRRSV隱性持續(xù)性感染卻依然嚴(yán)重。表面“平靜”的臨床現(xiàn)象,往往容易混淆人們的視線,從而忽視了豬藍(lán)耳免疫的重要性。豬瘟是國家強(qiáng)制免疫的傳染病,眾所周知,豬瘟的免疫效果與PRRSV的自然感染及它的免疫效果密切相關(guān)。為能比較深入地揭示PRRSV對(duì)豬瘟免疫抑制危害的嚴(yán)重性及藍(lán)耳防疫的重要性,故特做本試驗(yàn)。
1.1材料
1.1.1免疫疫苗 豬藍(lán)耳疫苗:杭州佑本批號(hào):20170605;豬瘟疫苗:杭州佑本批號(hào):20170527。
1.1.2實(shí)驗(yàn)用豬 隨機(jī)選取縉云某豬場30日齡仔豬40頭(體態(tài)正常,無可見臨床癥狀)。
1.1.3豬瘟診斷試劑 豬瘟間接血凝抗體檢測試劑盒,中國農(nóng)業(yè)科學(xué)蘭州獸醫(yī)研究所批號(hào):20180615202。
1.1.4抗PRRSV-IG和瓊擴(kuò)抗原的制備 用豬藍(lán)耳弱毒活疫苗(NVDC-JXA1株)首免100日齡育成豬,肌注2頭份。免后2周再以豬藍(lán)耳滅活疫苗(NVDC-JXA1株)加強(qiáng)免疫2次,間隔21 d,第1次劑量2 mL/頭,第2次劑量4 mL/頭,末次免疫后21 d ,經(jīng)采血分離血清-鹽析沉淀-脫鹽濃縮而成。將提取的蛋白溶液稀釋后用UV-170紫外分光光度計(jì)測定,記錄λ=280 nm和λ=260 nm的光密度,按Lowry-Kalokar公式計(jì)算蛋白濃度,蛋白濃度(mg/mL)=1.45×1.116-0.74×1.041得0.84786乘以稀釋倍數(shù)134為113.6 mg/mL。
1.1.5山羊免疫球蛋白的制備 以豬抗PRRSV-IG免疫健山羊,采血分離血清-鹽析沉淀-脫鹽濃縮而成。用瓊擴(kuò)法檢驗(yàn):中間孔為豬抗PRRSV-IG抗原,周邊孔為倍比稀釋的山羊免疫球蛋白,結(jié)果見圖1所示。
圖1 山羊抗豬PRRSV球蛋白瓊擴(kuò)圖
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì) 分A、B、C、D 4個(gè)試驗(yàn)組,每組10頭,A組為藍(lán)耳疫苗+山羊免疫球蛋白1次,B組為組為藍(lán)耳疫苗+山羊免疫球蛋白2次,C組僅免豬瘟疫苗,D組為只用藍(lán)耳苗。
1.2.2免疫方法 A、B兩組30日齡首免藍(lán)耳和山羊免疫球蛋白,D組只免藍(lán)耳疫苗,劑量為2 mL/頭。首免后2 d,四組各免疫豬瘟苗2 mL/頭。首免后21 d,B組和D組與首次相同劑量加強(qiáng)免疫1次。二次免疫3周后,經(jīng)腔靜脈采血分離血清,用正向間接血凝法檢測豬瘟免疫抗體。
2.1山羊免疫球蛋白對(duì)藍(lán)耳疫苗免疫抑制影響
試驗(yàn)A組使用一次免疫抑制劑后,豬瘟免疫效價(jià)下降為3,B組使用免疫抑制劑二次后即可下降至2以下(見表1)。
表1 山羊免疫球蛋白對(duì)藍(lán)耳疫苗免疫抑制的豬瘟抗體效價(jià)
2.2免疫藍(lán)耳疫苗對(duì)豬瘟抗體效價(jià)的影響
未經(jīng)藍(lán)耳免疫的C組,因受PRRSV的免疫抑制作用其平均豬瘟效價(jià)為1.8,經(jīng)藍(lán)耳疫苗免疫的D組因PRRSV受到了控制,其平均豬瘟效價(jià)達(dá)到8(見表2)。
表2 藍(lán)耳免疫對(duì)豬瘟抗體效價(jià)的影響
以PRRSV自然感染豬的豬瘟免疫抗體水平為參照,以山羊免疫球蛋白為豬藍(lán)耳疫苗的免疫抑制劑,能有效地阻斷豬藍(lán)耳疫苗的防疫作用,從而明晰出PRRSV對(duì)豬瘟疫苗的免疫抑制作用,進(jìn)一步揭示了豬PRRSV對(duì)豬瘟免疫抑制危害的嚴(yán)重性(圖2)。
圖2 各處理組別豬瘟抗體效價(jià)
3.1山羊球蛋白為免疫抑制劑能有效地阻斷豬藍(lán)耳疫苗的防疫作用,使B組的豬瘟抗體水平與C組的水平相當(dāng),從而進(jìn)一步證實(shí)PRRSV對(duì)豬瘟免疫抑制的重要作用及嚴(yán)重性。
3.2試驗(yàn)提示:PRRSV是影響豬瘟免疫的一個(gè)重要因素,豬瘟的免疫抗體水平高低與豬藍(lán)耳的防疫與否存在密切相關(guān)性,因此做好藍(lán)耳的免疫是預(yù)防豬瘟的重要手段之一。
3.3在PRRSV隱性感染被徹底清除之前,評(píng)判豬瘟免疫抗體效價(jià)一定要與藍(lán)耳病毒的感染程度結(jié)合起來,這對(duì)于指導(dǎo)豬瘟的防疫實(shí)踐十分重要。