博落回提取物對商品豬場細(xì)菌抗藥性的影響

駱延波 商延 胡明 趙敏 楊勝福 李璐璐 齊靜 張印 張慶 劉玉慶

摘要：為了解博落回提取物（含血根堿1.50%，白屈菜紅堿0.75%）對仔豬細(xì)菌抗藥性的影響，本試驗通過在30日齡仔豬的飲水中分別添加博落回提取物和阿莫西林，并用96點陣二倍稀釋法測定9種常用抗生素對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度（MIC），評價其防止仔豬腹瀉、促進仔豬生長以及對細(xì)菌抗藥性的影響。結(jié)果表明，添加博落回提取物的試驗組對細(xì)菌抗藥性以及仔豬腹瀉率、成活率、出欄重等生產(chǎn)性能指標(biāo)的影響與添加阿莫西林的對照組之間差異不顯著，基于上述結(jié)果，博落回提取物可替代阿莫西林用于預(yù)防仔豬腹瀉，提高仔豬成活率和促生長。

關(guān)鍵詞：博落回提取物；阿莫西林；干預(yù)；細(xì)菌抗藥性；仔豬

中圖分類號：S853.7文獻標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2018）07-0020-07

Abstract In order to investigate the effects of extracts of Macleaya cordata （containing 1.5% sanguinarine and 0.75% chelerythrine） on bacterial resistance， the experiment was carried out by adding the extracts and amoxicillin into drinking water of 30-day-old piglets repectively. The MIC values of nine common antibiotics to Escherichia coli and Staphylococcus aureus were determined by 96 dot matrix double dilution method to evaluate their effects on the prevention of diarrhea， growth promotion and the level of resistance of bacteria. The results showed that the inhibitory effect of extracts of Macleaya cordata on the drug resistance of bacteria was very small. There was no significant difference between the experimental group and the control group in the diarrhea rate， survival rate and slaughter weight. Based on the above results， the extracts of Macleaya cordata can replace amoxicillin for the prevention of piglet diarrhea and improve the survival rate and growth of piglets.

Keywords Extract of Macleaya cordata； Amoxicillin； Intervention； Bacterial resistance； Piglet

隨著抗生素的廣泛大量使用導(dǎo)致嚴(yán)重的多重抗藥性和藥物殘留，全球范圍內(nèi)抗生素的從嚴(yán)處方化管理和抗藥性監(jiān)測漸成常規(guī)[1，2]。另一方面，由于安全有效的新抗生素研發(fā)越來越困難，抗生素成為全球共有的稀缺珍貴資源，尋找新抑菌物質(zhì)和抗生素替代品也成為抗感染的趨勢。中國有中藥資源優(yōu)勢和使用經(jīng)驗，在此方面取得了突出成就[3-5]。博落回 （Macleaya cordata）系罌粟科博落回屬大型草本植物，具有抑菌、殺蟲、抗腫瘤等多種生物活性，臨床上主要用于治療指疔、膿腫及一些惡瘡和皮膚病等[6]。博落回果實及全草中含有豐富的異喹啉類生物堿，主要有血根堿（sanguinarine）、白屈菜紅堿（chelerythrine）、原阿片堿（protopine）、別隱品堿（allocryptopine）等[7，8]。博落回全堿有局部麻醉作用，大劑量口服對心臟及神經(jīng)系統(tǒng)有毒害作用[9]，但提純的Sangrovit（博落回制劑），主要含1.50%血根堿與 0.75%白屈菜紅堿，安全性大大提高，100～600 mg/kg對豬、雞服用都是安全的，其在歐洲已經(jīng)廣泛用于替代抗生素作為藥物添加劑[10，11]。血根堿與白屈菜紅堿可以相互轉(zhuǎn)化，血根堿能抑制細(xì)菌色氨酸脫羧酶活性，阻止色氨酸脫羧產(chǎn)生吲哚及吲哚類糞臭素，促使色氨酸用于蛋白質(zhì)合成，具有抑菌、消炎、除臭、促生長的作用[10]。

阿莫西林為半合成青霉素類廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素，在酸性條件下穩(wěn)定，胃腸道吸收率達90%。阿莫西林殺菌作用強，穿透細(xì)胞膜的能力也強，是目前獸醫(yī)臨床上使用較廣的抗生素，且多使用阿莫西林可溶性粉，本試驗即以其為對照采用微量肉湯稀釋法和瓊脂平板法，參照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）藥敏標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，研究血根堿對干預(yù)后仔豬腸道菌群抗藥性的影響，以期為博落回提取物代替抗生素用作飼料添加劑的可行性提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

30日齡大長白三元雜交商品仔豬450頭。

1.2 試驗藥物與培養(yǎng)基

博落回提取物血根堿（批號20160204，含量92%），阿莫西林可溶性粉（批號20160501，規(guī)格10%）。藥物有多西環(huán)素、氟苯尼考、丁胺卡那霉素、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨芐西林、左旋氧氟沙星和環(huán)丙沙星。培養(yǎng)基有大腸桿菌顯色培養(yǎng)基、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、高鹽培養(yǎng)基。

1.3 試驗時間與地點

2016年8月1日至9月2日于山東省諸城市某家庭農(nóng)場內(nèi)進行試驗。

1.4 試驗方法

將試驗仔豬分為2組， 150頭作為試驗組，飲水中添加血根堿；300頭作為對照組，飲水中添加阿莫西林。在試驗前和試驗結(jié)束時，分別采集各組仔豬新鮮糞便，分離鑒定大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，測定9種抗生素（多環(huán)西素、氟苯尼考、丁胺卡那霉素、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨芐西林、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星）的最小抑菌濃度（MIC），對比細(xì)菌抗藥性的變化情況。

試驗過程中記錄試驗組和對照組豬死亡只數(shù)、腹瀉只數(shù)，試驗結(jié)束時分別統(tǒng)計兩組的豬死亡只數(shù)、腹瀉只數(shù)和只出欄體重（kg），計算腹瀉率（%）、成活率（%）和平均出欄重（kg）。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Microsoft Excel 2007和SPSS 18.0軟件進行數(shù)據(jù)整理分析與差異顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離鑒定細(xì)菌

試驗開始前，從試驗組分離到大腸桿菌38株，金黃色葡萄球菌12株；對照組分離到大腸桿菌40株，金黃色葡萄球菌18株。試驗結(jié)束時，從試驗組分離到大腸桿菌38株，金黃色葡萄球菌12株；對照組分離到大腸桿菌38株，金黃色葡萄球菌18株。

2.2 細(xì)菌抗藥性檢測結(jié)果

從圖1可以看出，干預(yù)前后試驗組大腸桿菌對多西環(huán)素、氟苯尼考、丁胺卡那霉素、環(huán)丙沙星抗藥性水平基本上沒有變化，而對頭孢曲松、頭孢噻肟、慶大霉素、氨芐西林、左旋氧氟沙星的抗藥性水平下降，但差異不顯著（P>0.05）。

從圖2可以看出，干預(yù)前后對照組大腸桿菌對多西環(huán)素、氟苯尼考、丁胺卡那霉素、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨芐西林、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星抗藥性水平基本上沒變化，而對慶大霉素的抗藥性水平下降，但差異不顯著（P>0.05）。

從圖3可以看出，干預(yù)前后試驗組金黃色葡萄球菌對多西環(huán)素、丁胺卡那霉素、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨芐西林、左旋氧氟沙星抗藥性水平均未有明顯變化，而對氟苯尼考、環(huán)丙沙星的抗藥性水平略有下降，但差異不顯著（P>0.05）。

從圖4可以看出，干預(yù)前后對照組金黃色葡萄球菌對多西環(huán)素、氟苯尼考、丁胺卡那霉素、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻肟、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星抗藥性水平均未有明顯變化，而對氨芐西林的抗藥性水平略有下降，但差異不顯著（P>0.05）。

2.3 生產(chǎn)性能試驗結(jié)果

從表2可以看出，試驗組各項生產(chǎn)性能指標(biāo)與對照組無顯著差別，說明博落回提取物在干預(yù)商品豬生產(chǎn)方面與阿莫西林效果相當(dāng)。

3 討論與結(jié)論

試驗期間，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均對常用的9種抗生素產(chǎn)生抗藥性。試驗組與對照組中細(xì)菌的MIC值均未發(fā)生顯著變化，與相關(guān)的研究結(jié)果一致[12，13]，這可能與干預(yù)時間較短有關(guān)。因為細(xì)菌抗藥性發(fā)生顯著變化，需要在一定的抗生素濃度作用下經(jīng)過一定的時間才能發(fā)生[14，15]。

干預(yù)試驗前，從試驗組分離到大腸桿菌38株，金黃色葡萄球菌12株；對照組分離到大腸桿菌40株，金黃色葡萄球菌18株。干預(yù)試驗后，從試驗組分離到大腸桿菌38株，金黃色葡萄球菌12株；對照組分離到大腸桿菌38株，金黃色葡萄球菌18株。試驗組與對照組在干預(yù)試驗前后細(xì)菌分離情況基本一致。

根據(jù)藥敏檢測結(jié)果，多西環(huán)素、氟苯尼考、丁胺卡那霉素、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻肟、氨芐西林、左旋氧氟沙星、環(huán)丙沙星9種常用抗生素對博落回提取物血根堿和阿莫西林2組分離到的大腸桿菌桿菌、金黃色葡萄球的MIC值未發(fā)生明顯變化。同時，博落回提取物血根堿與阿莫西林效果相當(dāng)，能夠提高仔豬的生產(chǎn)性能，有效減少仔豬腹瀉率，提高仔豬成活率，促進生長。這為博落回提取物代替抗生素用作飼料添加劑提供參考依據(jù)。

參 考 文 獻：

[1] Gustafson R H， Bowen R E. Antibiotic use in animal agriculture[J]. J. Appl. Microbiol.，1997，83（5）：531-541.

[2] Kosina P， Walterová D， Ulrichová J，et al.Sanguinarine and chelerythrine： assessment of safety on pigs in ninety days feeding experiment[J]. Food Chem. Toxicol.，2003，42（1）：85-91.

[3] Wang X J， Min C L， Ge M，et al.An endophytic sanguinarine—producing fungus from Macleaya cordata， Fusarium proliferatum BLH51[J]. Curr. Microbiol.，2014，68（3）：336-341.

[4] Yao J Y， Shen J Y， Li X L，et al.Effect of sanguinarine from the leaves of Macleaya cordata against ichthyophthirius multifiliis in grass carp（Ctenopharyngodon idella）[J]. Parasitol. Res.，2010，107（5）：1035-1042.

[5] Chan W H.Hazardous effects of sanguinarine on maturation of mouse oocytes， fertilization， and fetal development through apoptotic processes[J]. Environ. Toxicol.，2015，30（8）：946-955.

[6] Han M H， Kim G Y， Yoo Y H， et al.Sanguinarine induces apoptosis in human colorectal cancer HCT-116 cells through ROS-mediated Egr-1 activation and mitochondrial dysfunction[J]. Toxicol. Lett.， 2013，220（2）：157-166.

[7] Burgeiro A， Bento A C， Gajate C， et al.Rapid human melanoma cell death induced by sanguinarine through oxidative stress[J]. Eur. J. Pharmacol.， 2013，705（1/3）：109-118.

[8] De Stefano I， Raspaglio G， Zannoni G F， et al.Antiproliferative and antiangiogenic effects of the benzophenanthridine alkaloid sanguinarine in melanoma[J]. Biochem. Pharmacol.， 2009，78（11）：1374-1381.

[9] Erraroni M， Bazzicalupi C， Bilia A R， et al. X-ray diffraction analyses of the natural isoquinoline alkaloids berberine and sanguinarine complexed with double helix DNA d（CGTACG） [J]. Chem. Commun.， 2011，47（17）：4917-4919.

[10]Frankos V H， Brusick D J， Johnson E M， et al.Safety of sauguinaria extract as used in commercial tooth- paste and oral rinse products[J]. J. Can. Dent. Assoc.， 1990，56：41-47.

[11]Kantas D， Papatsiros V G， Tassis P D， et al.The effect of a natural feed additive （Macleaya cordata）， containing sanguinarine， on the performance and health status of weaning pigs[J]. Anim. Sci. J.， 2015，86（1）：92-98.

[12]Hawkey P M.Mechanisms of resistance to antibiotics[J]. Intensive. Care Med.， 2000，26： S9-S13.

[13]Ke X， Gu B， Pan S Y， et al.Epidemiology and molecular mechanism of integron-mediated antibiotic resistance in Shigella[J]. Arch. Microbiol.， 2011，193（11）：767-774.

[14]Pickler L， Beiro B C B， Hayashi R M， et al.Effect of sanguinarine in drinking water on salmonella control and the expression of immune cells in peripheral blood and intestinal mucosa of broilers[J]. J. Appl. Poult. Res.， 2013，22（3）：430-438.

[15]Zhang C，Ling F，Chi C， et al.Effects of praziquantel and sanguinarine on expression of immune genes and susceptibility to Aeromonas hydrophila in goldfish （Carassius auratus） infected with Dactylogyrus intermedius[J]. Fish Shellfish Immunol.， 2013，35（4）：1301-1308.

[16]Rotimi S O， Ojo D A， Talabi O A， et al.Tissue dyslipidemia in salmonella-infected rats treated with amoxillin and pefloxacin[J]. Lipids in Health and Disease，2012，11：152.

[17]Looft T， Johnson T A， Allen H K， et al. In-feed antibiotic effects on the swine intestinal microbiome[J]. PNAS， 2012，109（5）：1691-1696.