動物疫病監(jiān)測樣品的采集技術(shù)探討

習(xí)紅英

摘 要 動物疫病監(jiān)測對動物疫病防控有著重要作用，作為動物疫病監(jiān)測重要內(nèi)容，實(shí)驗(yàn)室檢測成為了控制疫病傳播的基礎(chǔ)保障。但實(shí)際上，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素較多，尤其是樣品采集技術(shù)。對此，強(qiáng)化樣品采集的針對性、時(shí)效性等尤為關(guān)鍵，規(guī)范采集監(jiān)測樣品，繼而提高檢測結(jié)果精確度，為動物疫病監(jiān)測發(fā)展助力。

關(guān)鍵詞 動物疫病監(jiān)測：樣品采集；注意事項(xiàng)

科學(xué)規(guī)范的樣品采集，是動物疫病監(jiān)測、診斷工作的重要質(zhì)控環(huán)節(jié)，關(guān)系到實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的真實(shí)性與可利用價(jià)值，影響監(jiān)測區(qū)域動物疫情預(yù)控的有效性。作為樣品采集人員，應(yīng)明確掌握細(xì)菌、病毒、血清學(xué)等監(jiān)測樣品采集技術(shù)與注意事項(xiàng)，確保樣片采集質(zhì)量與檢測結(jié)果。

1 各監(jiān)測對象的樣品采集

1.1 用于檢測細(xì)菌的樣品

用于檢測細(xì)菌的樣品，應(yīng)取發(fā)病典型，或剛病逝的整體動物最好。動物不方便送往實(shí)驗(yàn)室，可采集肝臟與血樣、組織樣品接種血平板。組織樣品采集后，不得展開任何處理，或是放入雜質(zhì)，應(yīng)立即放入滅菌容器內(nèi)，貼好標(biāo)識標(biāo)簽并冷藏，立即送檢。

1.2 病毒檢測樣品

病毒檢測應(yīng)在初病期間采集糞便、組織臟器等樣品，采集后的組織樣品密封、貼標(biāo)簽、冷藏、送檢。送往實(shí)驗(yàn)室的間隔時(shí)間過長，應(yīng)凍結(jié)樣品，或是將組織浸泡在乳汁液（PH7.4）內(nèi)，乳汁內(nèi)每升加1000IU青霉素、1000IU鏈霉素，冷藏后送檢。采集血液樣品（抗凝血）前，在真空采血管內(nèi)每毫升血液加1ml肝素（0.1%）。家禽從耳靜脈采血，豬從前腔靜脈采血，馬牛羊從頸或尾靜脈采血[1]。

1.3 血清學(xué)檢測樣品

用一次性注射器或采血器抽取3ml左右靜脈血，貼簽后冷藏送檢，血液樣品低溫冷凍處理避免溶血。不能及時(shí)展開檢測的，應(yīng)在4℃左右溫度下保存。禁止反復(fù)凍融與長時(shí)間保存，會干擾抗體效價(jià)。

1.4 病理組織學(xué)樣品

樣品應(yīng)新鮮，取病變明顯部位，連同健康組織一同采集。采集組織厚度長厚分別為2cm、0.5cm，浸泡在中性甲醛緩沖液（4%）或是95%酒精內(nèi)固定，固定液要超出組織體積10倍左右。不能及時(shí)送檢的，需24h后更換固定液，密封貼簽動檢。

2 樣品采集注意事項(xiàng)

2.1 采集代表性樣品

樣品應(yīng)根據(jù)檢測的目的采集，圍繞針對性檢測病疫采集重點(diǎn)病例樣品。不能確定疫病種類的應(yīng)全面采集，如口蹄疫采集水泡液與淋巴結(jié)等，豬瘟采集扁桃體、淋巴結(jié)、全血等。病菌學(xué)檢驗(yàn)樣品，應(yīng)采集癥狀典型、未經(jīng)藥物治療、病變明顯的樣品。病毒學(xué)檢驗(yàn)樣品，應(yīng)采集普遍特征病死動物，同時(shí)也需采集并發(fā)癥明顯的動物樣品[2]。

2.2 樣品采集時(shí)效性

根據(jù)實(shí)際情況確定采集時(shí)間，免疫抗體監(jiān)測樣品，應(yīng)根據(jù)動物疫苗接種時(shí)間、疫苗類型、病種等確定采集時(shí)機(jī)。病原分離樣品應(yīng)在初病發(fā)熱期，或是癥狀典型時(shí)采集。病死后的家禽應(yīng)立即采集樣品，避免是錯(cuò)過最佳采集時(shí)機(jī)干擾檢測結(jié)果的真實(shí)性。在監(jiān)測疫苗免疫成效工作中，通常會在免疫后2周內(nèi)采集樣品，剛接種疫苗的動物樣品，并不能真實(shí)反映疫苗免疫成效。監(jiān)測病原時(shí)，由于患病初期體內(nèi)病原分布不均且含量少，監(jiān)測時(shí)應(yīng)根據(jù)采集部位、時(shí)期采集檢測組織樣品。如禽流感，患病初期肺部含有大量病毒，中期泄殖腔排泄病毒，后期排泄停止可能檢測不到病毒。

2.3 采集足量樣品

采集的樣品應(yīng)滿足檢測方法對樣品量的需求；對此，應(yīng)根據(jù)檢測方法確定采集量。首先樣品個(gè)數(shù)足量，通常一個(gè)監(jiān)測點(diǎn)，應(yīng)采集超過30個(gè)的動物樣品。其次樣品采集量充足，確保檢測工作正常展開。

2.4 無菌操作采集

尤其是病原學(xué)、血清學(xué)檢測用樣品的采集，應(yīng)嚴(yán)格無菌操作。采樣用具、容器及時(shí)消毒滅菌。尸體解剖先采樣后檢查，避免樣品被污染，影響檢測結(jié)果。

2.5 詳細(xì)送檢樣品背景資料

檢驗(yàn)人員會根據(jù)送檢樣品的背景資料，確定檢測目的與方法等，以及參照其分析檢測結(jié)果；對此，送檢樣品背景資料越詳細(xì)越好。若不了解動物免疫情況、品種等資料，會致使檢測人員選擇錯(cuò)誤檢驗(yàn)項(xiàng)目，最終影響檢驗(yàn)結(jié)果，以及疫情監(jiān)測工作的正常展開[3]。

2.6 樣品保存運(yùn)輸

樣品采集過程應(yīng)規(guī)范，盡可能的減少環(huán)境污染?？鼓杉瘯r(shí)，應(yīng)與血液及時(shí)混勻，避免細(xì)胞破裂出現(xiàn)溶血。采集血清后應(yīng)靜置片刻，血清析出后再搖動避免溶血。樣品為生物制品，為保持其生物特性，應(yīng)在防震、避光、冷藏等條件下儲存運(yùn)輸。樣本運(yùn)輸中，最重要的防污染，不僅是對樣品對環(huán)境的污染，或是環(huán)境對樣品抗原抗體等質(zhì)量的影響。除此之外，應(yīng)加強(qiáng)人身防護(hù)，避免病原擴(kuò)散，做好危害不就措施，指派專人運(yùn)送。

3 總結(jié)

樣品采集不僅注意適量性、時(shí)效性、無菌操作等，更要注意檢測的時(shí)效性，減少樣品保存對疫病監(jiān)測樣本質(zhì)量的影響。尤其是動物內(nèi)臟、尸體等組織，含有多重微生物，冷凍后也會出現(xiàn)腐敗，致使樣品不符合檢測要求，從而弱化了病疫監(jiān)測的預(yù)警作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]彭群明，陸海，凌丹，等.基層動物疫病監(jiān)測樣品采集難的原因分析與建議[J].廣西畜牧獸醫(yī)， 2017， 33（2）：100-102.

[2]呂海兵.動物疫病監(jiān)測樣品的采集及注意事項(xiàng)[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2017（5）：131-131.

[3]王自強(qiáng)，梁勇，余潤熹，等.如何做好動物疫病監(jiān)測樣品的采集[J].畜牧獸醫(yī)科技信息， 2018（5）.