固定電泳法檢測(cè)尿本-周蛋白的應(yīng)用分析

譚鴻霞

（中山市小欖人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東 中山 528415）

臨床醫(yī)師多應(yīng)用血清蛋白電泳、免疫球蛋白定量方法監(jiān)測(cè)M蛋白，但在多種因素的作用下，其特異性與靈敏度相對(duì)較低，本文探討免疫固定電泳法在尿BJP中的應(yīng)用價(jià)值，本文做出如下詳細(xì)論述。

1.材料與方法

1.1 試劑和儀器

乙酸緩沖液、磺基水楊酸、十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠電泳（SDS-AGE）電泳試劑盒、免疫固定電泳試劑盒，儀器以Sebia全自動(dòng)電泳儀、羅氏Cobas8000全自動(dòng)生化分析儀等為主。

1.2 樣本

取2017年3月—2018年5月在我院進(jìn)行住院治療的125例患者晨尿樣本，在3～8℃環(huán)境下保存，7d內(nèi)統(tǒng)一先行檢測(cè)十二烷基硫酸鈉-瓊脂糖凝膠（SDS-AGE）電泳，收集其中有異常區(qū)帶的尿標(biāo)本。

1.3 檢測(cè)方法

（1）固定電泳法的應(yīng)用流程：取適量緩沖液，將蛋白質(zhì)溶入其中，實(shí)現(xiàn)電泳分離處理。取等量晨尿樣本分別行免疫固定電泳于熱沉淀反應(yīng)試驗(yàn)。對(duì)輕鏈2種血清進(jìn)行免疫固定之前實(shí)施有效的分離處理干預(yù)，借用固定的條帶將電泳后蛋白質(zhì)的整個(gè)面貌呈現(xiàn)處理，并把其設(shè)為參考泳道。沉淀后的蛋白質(zhì)染色環(huán)節(jié)應(yīng)用的染色劑為結(jié)晶紫后，利用酸性溶液把多余的染料沖洗掉，對(duì)最后獲得的監(jiān)測(cè)結(jié)果僅掃描處理。將酸性介質(zhì)沖洗多余染料。對(duì)檢測(cè)結(jié)果行掃描分析。（2）熱沉淀反應(yīng)法參照相關(guān)實(shí)驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行操作行。

2.結(jié)果

2.1 BJP免疫固定電泳

在對(duì)參與本次研究125例患者晨尿樣本監(jiān)測(cè)后，發(fā)現(xiàn)63例患者有異常區(qū)，異常區(qū)段的相對(duì)分子質(zhì)量為25000～50000。將以上63例患者進(jìn)行BJP免疫固定電泳，結(jié)果提示有35例樣本尿中BJP為陽(yáng)性，其中IgG 型21例，IgG 型14例。熱沉淀反應(yīng)法檢測(cè)結(jié)果表明有19例患者尿樣中BJP陽(yáng)性。

2.2 免疫固定電泳檢測(cè)的靈敏度

免疫固定電泳法檢測(cè)出尿BJP陽(yáng)性的尿蛋白濃度是20mg/L，當(dāng)濃度上升至2000mg/L時(shí)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)干擾；但是熱沉淀反應(yīng)法檢測(cè)出尿BJP陽(yáng)性的尿蛋白濃度達(dá)到310mg/L，但濃度上升至1270mg/L時(shí)，就有干擾出現(xiàn)。

2.3 尿蛋白電泳、熱沉淀反應(yīng)法和BJP檢出情況統(tǒng)計(jì)

對(duì)63例尿蛋自SDS-ACE存在異常區(qū)帶的樣木行BJ P免疫固定電泳。結(jié)果提示，尿蛋白電泳出現(xiàn)異常BJP區(qū)帶的陽(yáng)性率為55.56%（35/63）。蛋白異常的樣本經(jīng)免疫固定電泳的BJP檢出率為54.28%，熱沉淀反應(yīng)法的檢出率為30.16%。見(jiàn)表1、表2。

表1 非濃縮尿蛋白電泳的效率[n，(%)]

表2 BJP免疫固定電泳與熱沉淀反應(yīng)法檢測(cè)的效率[n，(%)]

3.討論

因?yàn)樯眢w中某一克隆出現(xiàn)病理性改變而分泌大量單一化、質(zhì)地均勻的單克隆蛋白，又被叫做M蛋白。多發(fā)性骨髓瘤、白血病和淋巴細(xì)胞瘤等疾病均會(huì)伴有單克隆B細(xì)胞增殖，蛋白輕鏈通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)作用后在腎小管分解代謝。伴隨著腫瘤細(xì)胞的增殖，自由輕鏈的合成量增多，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于腎小管的重吸收能力，以致BJP在腎小管內(nèi)和游離鈣結(jié)合、沉淀，破壞腎單位，促使腎功能減退，產(chǎn)生蛋白尿、管型尿，甚至是血尿。尿本-周蛋白為游離單克隆免疫球蛋白輕鏈，相對(duì)分子量為22500，是由具有213～216個(gè)氨基酸構(gòu)成，輕分子鏈為 ?，F(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，尿本周蛋白陽(yáng)性和多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病存在相關(guān)性，其可以被視為診斷多發(fā)性骨髓瘤的標(biāo)記性蛋白，他類疾病患者也可檢出本周蛋白為陽(yáng)性[2]。熱沉淀法、免疫比濁法為臨床檢測(cè)尿中 BJP的常用方法，但受多種因素的干擾，其靈敏度與特異性普遍偏低，檢出率較低。在本次研究中，應(yīng)用熱沉淀法尿 BJP的檢出率僅為30.16%，并且該檢測(cè)方法靈敏度偏低（尿BJP陽(yáng)性的尿蛋白濃度達(dá)到310mg/L，但濃度上升至1270mg/L時(shí)，就有干擾出現(xiàn)），由此可間接的推測(cè)，如果把熱沉淀法運(yùn)用在BJP陽(yáng)性的篩選時(shí)間中，可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果的正確率造成負(fù)面影響。而免疫固定電泳法是以瓊脂糖凝膠為媒介，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行電泳分離以后，將蛋白質(zhì)固定劑、各類免疫球蛋白等眾多物質(zhì)溶入其中，如果血清內(nèi)有與之相對(duì)應(yīng)的抗原，那么就會(huì)在相應(yīng)部位產(chǎn)生抗原—體復(fù)合物，同時(shí)在凝膠介質(zhì)底部有沉淀物生成，經(jīng)過(guò)染色處理以后，沉淀區(qū)段就會(huì)外顯顏色，結(jié)合顯色條帶的位移情況辨識(shí)相關(guān)單克隆組分，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)精確對(duì)各類免疫球蛋白及輕鏈類型的劃分[3～4]。

在本次研究中，出現(xiàn)異常區(qū)帶的樣本中BJP檢出率為55.56%，有28例為假陽(yáng)性，筆者認(rèn)為這可能和某些小分子蛋白出現(xiàn)在該區(qū)帶中相關(guān)?？傊?，免疫固定電泳檢測(cè)尿BJP，具有較高靈敏度與特異性，值得在疾病診斷領(lǐng)域推廣。