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    牛初乳類產(chǎn)品免疫調(diào)節(jié)作用的動物試驗研究

    2018-10-17 06:24:46王青云楊曉波李凱鋒
    中國乳業(yè) 2018年9期
    關(guān)鍵詞:完達山經(jīng)口小鼠

    文/王青云 楊曉波* 李凱鋒 梁 超

    ( 黑龍江省完達山乳業(yè)股份有限公司)

    牛初乳富含具有調(diào)節(jié)機體生理功能的活性物質(zhì),其中免疫因子主要是高含量、具有抗原結(jié)合特性的IgG[1],具有豐富的營養(yǎng)價值。初乳中常規(guī)營養(yǎng)成分(蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì))和生物活性物質(zhì)(免疫因子、激素、生長因子等)的含量比常乳高數(shù)倍,具有極高的開發(fā)利用價值[2]。本文主要用完達山牌乳珍產(chǎn)品喂食小鼠,對細胞免疫功能、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、體液免疫功能、單核—巨噬細胞吞噬功能和NK細胞活性進行檢測,驗證產(chǎn)品具有免疫調(diào)節(jié)作用。

    1 材料與方法

    1.1 樣品

    完達山牌乳珍產(chǎn)品,由黑龍江省完達山乳業(yè)股份有限公司提供,樣品為乳黃色粉末,感官檢查未見異常。

    1.2 試驗動物

    由黑龍江省腫瘤研究所實驗動物中心提供,編號為醫(yī)動字第09-2-7號。將健康雌性小鼠隨機分為5 組,分別進行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗和小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗(免疫Ⅰ組)、碳廓清試驗(免疫Ⅱ組)、脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗和NK細胞活性測定(免疫Ⅲ組)、半數(shù)溶血值(HC50)測定和抗體生成細胞檢測(免疫Ⅳ組)。

    1.3 劑量設(shè)計

    完達山牌乳珍產(chǎn)品的人體推薦量為每人每日2 g(含IgG 2.26%),如成人體重以60 kg計,則相當(dāng)于0.033 g/kg·bw。小鼠的等效劑量為人體推薦量的10 倍,即每日0.33 g/kg·bw(中劑量),上、下各設(shè)一個劑量組:0.99 g/kg·bw(高劑量)和0.17 g/kg·bw(低劑量)。同時設(shè)清潔水(20 mL)和普通奶粉(0.33 g/kg·bw)分別作為陰性對照組和普通奶粉對照組。各組動物則按20 mL/kg·bw灌胃容積進行灌胃,連續(xù)灌胃30 d后測定各項免疫指標。

    1.4 儀器與試劑

    動物天平、分析天平、冰箱、離心機、722型分光光度計、顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱等。

    無菌手術(shù)器械、游標卡尺(精密度0.01 mm)、微量注射器(25 μL)、細胞計數(shù)器、紗布、試管、計時器、血色素吸管、24孔培養(yǎng)板等。

    綿羊紅細胞(SRBC)、雞紅細胞、生理鹽水、補體(豚鼠血清)、SA緩沖液、都氏試劑、印度墨汁、Na2CO3、Hank's液(pH值7.2~7.4)、RPMI 1640培養(yǎng)液、小牛血清、青鏈霉素、氧化型輔酶I等。

    表1 完達山牌乳珍對小鼠體重的影響

    表2 完達山牌乳珍對小鼠臟器/體重比值的影響

    表3 完達山牌乳珍對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響(免疫Ⅰ組)

    1.5 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定

    用方差分析進行統(tǒng)計分析。

    2 結(jié)果

    2.1 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠體重的影響

    小鼠喂食完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d后的體重變化見表1。由表1可見,各劑量組與對照組相比,初始體重和終末體重均無顯著性差異(p>0.05),說明本試驗條件下完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠體重增長無影響。

    2.2 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠臟器/體重值的影響

    喂食小鼠完達山牌乳珍30 d對臟器/體重值的影響見表2。由表2可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,低、中、高劑量組與對照組相比,脾臟/體重值和胸腺/體重值均無顯著性差異(p>0.05),即完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠的臟器/體重值無影響。

    2.3 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(D TH)的影響

    喂食小鼠完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響見表3。由表3可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,高劑量組與普通奶粉對照組相比,注射SRBC 24 h后的小鼠足跖腫脹度(足跖厚度)差異極顯著(p<0.01),即完達山牌乳珍產(chǎn)品能增強小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。

    表4 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠巨噬細胞吞噬紅細胞功能的影響(免疫Ⅰ組)

    表5 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠單核—巨噬細胞碳廓清功能的影響(免疫Ⅱ組)

    2.4 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞功能的影響

    喂食小鼠完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞功能的影響見表4。由表4可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,各劑量組與普通奶粉對照組相比,吞噬百分數(shù)和吞噬指數(shù)均無顯著性差異(p>0.05),即完達山牌乳珍產(chǎn)品不能增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能。

    2.5 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠單核—巨噬細胞碳廓清功能的影響

    喂食小鼠完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d對小鼠單核—巨噬細胞碳廓清功能的影響見表5。由表5可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,中、高劑量組與對照組相比,碳廓清功能差異顯著(p<0.05),即完達山牌乳珍產(chǎn)品能夠顯著增強小鼠單核—巨噬細胞的碳廓清功能。

    2.6 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能的影響

    喂食小鼠完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d對小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能的影響見表6。由表6可見,經(jīng)口給予不同劑量的完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,各劑量組與陰性對照組相比,小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能均無顯著性差異(p>0.05),說明完達山牌乳珍產(chǎn)品不能影響小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能。

    2.7 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠NK細胞活性的影響

    喂食小鼠完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d對小鼠NK細胞活性的影響見表7。由表7可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達山牌乳珍30 d后,各劑量組與普通奶粉對照組相比,小鼠NK細胞活性均無顯著性差異(p>0.05),說明完達山牌乳珍產(chǎn)品不能增強小鼠NK細胞活性。

    2.8 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠半數(shù)溶血值(HC50)的影響

    喂食小鼠完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d對小鼠半數(shù)溶血值(HC50)的影響見表8。由表8可見,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,高、中劑量組與普通奶粉對照組相比,小鼠半數(shù)溶血值差異分別極顯著(p<0.01)和顯著(p<0.05),表明完達山牌乳珍產(chǎn)品能顯著提高小鼠半數(shù)溶血值。

    表6 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能的影響(免疫Ⅲ組)

    表7 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠NK細胞活性的影響(免疫Ⅲ組)

    表8 完達山牌乳珍產(chǎn)品對小鼠半數(shù)溶血值(HC50)的影響(免疫Ⅳ組)

    表9 完達山牌乳珍對小鼠抗體生成細胞的影響(免疫Ⅳ組)

    2.9 完達山牌乳珍對小鼠抗體生成細胞的影響

    喂食小鼠完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d對小鼠抗體生成細胞的影響見表9。由表9可見,經(jīng)口給予不同劑量的完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d后,高、中劑量組與普通奶粉對照組相比,抗體生成細胞差異顯著(p<0.05),表明完達山牌乳珍產(chǎn)品能增強小鼠抗體生成細胞功能。

    3 小結(jié)

    經(jīng)口給予小鼠不同劑量的完達山牌乳珍產(chǎn)品30 d,進行了4 類、7項試驗,即細胞免疫功能檢測(小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗和遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗)、體液免疫功能檢測(抗體生成細胞檢測和半數(shù)溶血值測定)、單核—巨噬細胞吞噬功能檢測(小鼠單核—巨噬碳廓清功能試驗和小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗)以及NK細胞活性檢測。結(jié)果表明,完達山牌乳珍產(chǎn)品可顯著增強小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、碳廓清功能、半數(shù)溶血值及抗體生成細胞功能。由此可見,完達山牌乳珍產(chǎn)品可增強體液免疫功能、細胞免疫功能和單核—巨噬細胞吞噬功能,即具有免疫調(diào)節(jié)作用。

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