白頭翁散超微粉和普通粉中各藥材的薄層對比鑒別

李艷玲，匡秀華，劉永錄，趙建平，張國祖

(河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院，河南鄭州450011)

白頭翁散是《中華人民共和國獸藥典》2015年版二部中收載的經(jīng)典方劑，由白頭翁、黃連、黃柏和秦皮組成。白頭翁可以清熱解毒，涼血治痢，為君藥；黃連，黃柏，秦皮清熱解毒而燥濕，秦皮兼有收澀止痢之功。黃連、黃柏助君藥清熱解毒、燥濕止痢，共為臣藥；秦皮清熱燥濕、收澀止痢，為佐藥。諸藥合用，共奏清熱解毒、涼血止痢之功。其功效為清熱解毒，涼血止痢。主治：熱毒赤痢，濕熱痢疾，赤多白少和發(fā)熱口渴等[1]。在獸醫(yī)臨床上應(yīng)用非常廣泛。可用于禽大腸桿菌病、沙門菌病、霍亂、鴨傳染性漿膜炎等，治療仔豬黃白痢、流行性腹瀉，以及病毒性、細(xì)菌性腹瀉的后期修復(fù)，可以配合西藥一起使用。另外在馬、牛、羊、兔等動物疾病上也多有應(yīng)用。

超微粉碎技術(shù)是指利用機械或流體動力的方法，將物料顆粒粉碎至微米級甚至納米級微粉的過程。中藥超微粉碎技術(shù)在20世紀(jì)90年代中后期興起，它在遵循中醫(yī)藥理論的前提下，結(jié)合中藥物料的特點，采用現(xiàn)代粉體技術(shù)，將中藥材、中藥提取物及中藥制劑微粉化，既保留了傳統(tǒng)飲片的優(yōu)點，又具一些特殊的理化性質(zhì)，如良好的分散性、溶解性、吸附性等。因此它將為中藥的現(xiàn)代化生產(chǎn)、應(yīng)用、開發(fā)注入新的活力，將為中藥走向國際帶來新的動力。

白頭翁散經(jīng)超微粉碎后，可以大大提高藥材的吸收利用率，有效減少臨床用量，節(jié)約藥材資源。但目前白頭翁散超微粉還沒有可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并且經(jīng)超微粉碎后和原來的散劑相比有沒有質(zhì)的變化，這些都還是未知數(shù)。中藥經(jīng)超微粉碎后，由于細(xì)胞破壁，本來一些不易溶出的成分由于沒有了障礙也可能會溶出，為中藥的安全性帶來隱患。因此，我們在鑒別白頭翁散超微粉中各藥材的同時，和白頭翁散普通粉的薄層色譜進(jìn)行了對比研究，以期為將來中藥超微粉的進(jìn)一步發(fā)展提供更多的借鑒。同時，用薄層色譜法定性鑒別白頭翁散超微粉中的白頭翁、黃連、秦皮，為將來其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定奠定基礎(chǔ)。

1 藥材與試劑

藥材：白頭翁、黃連、黃柏、秦皮，購自河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，經(jīng)鑒定是白頭翁是毛茛科植物白頭翁(Pulsatilla chinensis (Bge.)Regel)的干燥根；黃連是毛茛科植物黃連(Coptis chinensis Franch)的干燥根莖；黃柏是蕓香科植物黃皮樹(Phellodendron chinense Schneid)的干燥樹皮；秦皮是木犀科植物苦櫪白蠟樹(Fraxinus rhynchophylla Hance)的干燥干皮。標(biāo)準(zhǔn)品：白頭翁對照藥材(批號：121415-200702，中國藥品生物制品檢定所)；秦皮對照藥材(批號：121415-200702，中國藥品生物制品檢定所)；黃連(三角葉黃連)對照藥材(批號：120913-201008，中國藥品生物制品檢定所)；鹽酸小檗堿(含量：86.8%，批號：110713-200208，中國藥品生物制品檢定所)；試劑：甲醇(色譜純,鄭州派尼化學(xué)試劑廠)，鹽酸(煙臺市雙雙化工有限公司)，三氯甲烷(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 白頭翁的薄層鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取80目白頭翁散和400目白頭翁散超微粉各1.4 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.1.2 對照藥材溶液的制備 白頭翁對照藥材1 g，加甲醇10 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。

2.1.3 陰性對照品的制備 按白頭翁散超微粉的處方制備不含白頭翁的白頭翁散超微粉，并稱取1 g，按制備供試品溶液的方法制備陰性對照品。

2.1.4 薄層色譜法鑒別 吸取上述4種溶液制備各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-醋酸-水(4∶1∶2)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，看是否顯相同顏色的斑點[2]。見圖1。

圖1 白頭翁鑒別薄層圖譜

1: 80目白頭翁散； 2: 白頭翁對照藥材； 3: 400目白頭翁
散超微粉； 4: 白頭翁陰性樣品; 5: 空白溶劑

薄層鑒別結(jié)果顯示，在和白頭翁對照藥材相對應(yīng)的位置，80目和400目白頭翁散均出現(xiàn)了清晰的斑點，并且白頭翁陰性樣品在該位置無斑點，所以該方法可以用來定性鑒別白頭翁散中的白頭翁。400目和80目的白頭翁散相對比，沒有出現(xiàn)新的斑點。

2.2 黃連的薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 稱取80目白頭翁散和400目白頭翁散超微粉各1.3 g，分別加甲醇15 mL，水浴加熱回流10 min，過濾，收集濾液。

2.2.2 黃連對照藥材溶液的制備 稱取黃連對照藥材0.215 g，加甲醇10 mL，水浴加熱回流10 min，過濾，收集濾液。

2.2.3 小檗堿溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

2.2.4 黃連陰性對照溶液的對照品制備 按白頭翁散超微粉的處方制備不含黃連的白頭翁散超微粉，并稱取1 g，按制備供試品溶液的方法制備陰性對照品。

2.2.5 薄層色譜鑒別 吸取上述4種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液(12∶6∶3∶3∶1)為展開劑，置氨蒸汽預(yù)飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的一個黃色熒光斑點。見中插彩版圖2。

薄層鑒別結(jié)果顯示，在和黃連對照藥材相對應(yīng)的位置，80目和400目白頭翁散超微粉均出現(xiàn)了清晰的斑點，并且黃連陰性樣品在該位置均無斑點。400目和80目的白頭翁散相對比，沒有出現(xiàn)新的斑點。

2.3 秦皮的薄層鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 稱取80目白頭翁散和400目白頭翁散超微粉各3 g，分別加乙醇10 mL，加熱回流10 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.3.2 秦皮對照藥材溶液的制備 稱取秦皮對照藥材0.5 g，加乙醇10 mL，水浴加熱回流10 min，過濾，收集濾液。

2.3.3 秦皮陰性對照溶液的制備 按白頭翁散超微粉的處方制備不含秦皮的白頭翁散超微粉，并稱取3 g，按制備供試品溶液的方法制備陰性對照品。

2.3.4 薄層色譜鑒別 吸取上述4種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-三氯甲烷-甲苯-甲酸(8∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見中插彩版圖3

薄層鑒別結(jié)果顯示，在和秦皮對照藥材相對應(yīng)的位置，80目和400目白頭翁散超微粉均出現(xiàn)了清晰的斑點，并且秦皮陰性樣品在該位置無斑點，所以該方法可以用來定性鑒別白頭翁散中的秦皮。400目和80目的白頭翁散相對比，沒有出現(xiàn)新的斑點。

3.討論

中藥材活性成分主要存在于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，活性有效成分只有通過細(xì)胞壁釋放出來后才能被利用。經(jīng)超微粉碎后的中藥，其中藥材的傳統(tǒng)性狀特征已不復(fù)存在，細(xì)胞破壁后其顯微特征已被完全破壞，性狀鑒別、顯微鑒別等方法已不能作為鑒定中藥超微粉的主要手段,必須尋找更加有效的方法來建立中藥超微粉體的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。在對白頭翁散超微粉中白頭翁、黃連、秦皮進(jìn)行定性鑒別的同時，我們比較了80目的普通白頭翁散和400目的白頭翁散在溶出成分上有無差異，所有圖譜均顯示，400目的白頭翁散超微粉和80目相比，并沒有出現(xiàn)不同的斑點，說明白頭翁散超微粉雖然破壁了，但超微粉碎只是減小了粉末粒徑，增加了原有成分的溶出率及溶出量，并沒有改變藥材原有的成分，所以原則上不會產(chǎn)生毒副作用[3]。

在白頭翁的鑒別時，通過查閱大量文獻(xiàn)，對稱樣量、點樣量的進(jìn)行比較優(yōu)化，并嘗試了文獻(xiàn)中不同展開劑，篩選出最為合理的展開顯色條件，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，展開劑為正丁醇-醋酸-水(4∶1∶2)時，斑點較為清晰，且與雜質(zhì)斑點的分離度較好。

鑒別黃連的薄層色譜中，在小檗堿的位置白頭翁散超微粉樣品中仍有斑點，是因為白頭翁散中還有黃柏，而黃柏中主要的化學(xué)成分也是鹽酸小檗堿。所以該方法只能用來定性鑒別白頭翁散中的黃連。

本文分別對白頭翁散超微粉中的3種藥材進(jìn)行薄層鑒別研究，方法簡單快速，可以有效控制白頭翁散超微粉的質(zhì)量。

中藥超微粉碎技術(shù)是對傳統(tǒng)粉碎技術(shù)的更新和發(fā)展，它既豐富了傳統(tǒng)中藥炮制技術(shù)，又為中藥制劑的現(xiàn)代化生產(chǎn)、開發(fā)增加了新的形式，已成為中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵技術(shù)之一 。然而由于該技術(shù)歷史短，發(fā)展快，在基本定義、科學(xué)分級、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、評價體系等方面研究尚不夠完善，限制了該技術(shù)及其制劑的發(fā)展和推廣。在今后的中藥現(xiàn)代化研究中，應(yīng)加快研究步伐，開展多學(xué)科交叉，多種現(xiàn)代技術(shù)融合，盡快制定出中藥超微粉碎分級質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和中藥超微粉制劑的評價體系，使中藥超微粉體技術(shù)在中藥領(lǐng)域中的應(yīng)用日益廣泛。