非繁殖季節(jié)母驢誘導(dǎo)發(fā)情、排卵效果的研究

張永昌 ，娜仁花 ，達(dá)拉吉如嘎 ，劉永斌 ，吳海青

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特010031）

驢具有較高的經(jīng)濟價值。其肉具有獨特的營養(yǎng)價值，例如擁有補血、益氣補虛等保健功能，并且風(fēng)味鮮美?？茖W(xué)研究表明，每100 g驢肉當(dāng)中含脂肪 0.7 g、蛋白質(zhì) 18.6 g、鈣 10 mg、磷 144 mg、鐵136 mg，尤其是蛋白質(zhì)的含量要比牛肉、豬肉均高，而脂肪含量卻低于這些肉類，是典型的高蛋白低脂肪肉食品［1］；驢脂肪中含有高達(dá) 59.38%的不飽和脂肪酸［2］。目前，我國驢存欄量低，生產(chǎn)及管理水平低，繁殖技術(shù)落后，同人們對驢產(chǎn)品的大量需求形成了巨大的矛盾。針對驢本身的繁殖特點導(dǎo)致的驢繁殖率不高、難以快速增加驢存欄量等難題，從非繁殖季節(jié)和繁殖季節(jié)空懷母驢入手，利用誘導(dǎo)發(fā)情方法、人工授精技術(shù)、超數(shù)排卵技術(shù)和胚胎移植技術(shù)等來提高優(yōu)良公、母驢的繁殖力，加速品種改良，提高肉驢繁殖率，已成為當(dāng)下養(yǎng)驢事業(yè)中刻不容緩的任務(wù)。該試驗通過外源激素誘導(dǎo)非繁殖季節(jié)母驢發(fā)情進行試驗研究，摸索出誘導(dǎo)母驢發(fā)情的激素使用方案，確定激素用量，人為控制母驢排卵時間，從而減短母驢空懷期，提高母驢妊娠率。

1 材料與方法

1.1 時間與地點

試驗始于2017年10月1日，在內(nèi)蒙古通遼市奈曼旗“綠野牧歌驢業(yè)有限公司”進行。

1.2 實驗動物和材料

1.2.1 實驗動物：選擇 50頭年齡為 2～6歲、膘情良好、體重相近（200～280 kg）、未受孕的母驢。 全部母驢均處于非發(fā)情季節(jié) （當(dāng)年9月—次年3月），經(jīng)直腸檢查卵巢、生殖道機能均正常，無生殖系統(tǒng)疾病。

1.2.2 試驗材料

1.2.2.1 試驗器材：ESAOTE Tringa Linear Vet便攜式獸用B超儀（意大利百勝公司），6.5 MHz大家畜用直腸線陣探頭，照相機，電腦，體重泵，驢用保定架，蔣氏一次性直檢長臂手套，注射器（5～10 mL），石蠟油。

1.2.2.2 試驗藥品：注射用血促性素（PMSG），1 000IU/瓶，浙江寧波第二激素廠，批號110254564；注射用絨促性素Ⅰ（hCG），500 IU/支，浙江寧波第二激素廠，批號 110251281；氯前列醇注射液（PGF2α），規(guī)格為 2 mL：0.2 mg，丹東市綠丹和華動物藥有限公司，批號060292200；生理鹽水。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗分組：將50頭母驢隨機分為4個組，其中 A組 15頭，B組 15頭，C組 10頭，D組 10頭；再將 A 組又分為 A1組（10 頭）、A2組（5 頭），B組又分為 B1組（10 頭）、B2組（5 頭）。 A、B、C 組為試驗組，各組均用激素處理；D組為對照組，不做激素處理。A1、B1組注射 hCG 促進卵泡排卵；A2、B2組自然排卵，不使用hCG處理。試驗期間所有母驢均以正常標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)。

1.3.2 誘導(dǎo)發(fā)情：每天對A、B、C 3組母驢分別注射PGF2α2 mL/頭，連續(xù)注射 5 d。D組為空白對照組，給予2 mL的生理鹽水為安慰劑。經(jīng)PGF2α處理后，第6天對A組和 B組用 PMSG處理，劑量分別為 1 000 IU和 500 IU，C、D兩組不予 PMSG處理，但在同一時間給予等量生理鹽水作為安慰劑。詳情如表1所示。

1.3.3 誘導(dǎo)排卵：用 B超儀檢查 A1、B1、C 3組中的發(fā)情母驢，當(dāng)卵泡直徑大于35 mm時注射hCG（hCG總量為1 500 IU/頭，早、晚各注射 1次，每次750 IU/頭）促進卵泡的發(fā)育并誘導(dǎo)其排卵。A2、B2組母驢不做hCG處理，由卵泡自然發(fā)育至排卵。詳情如表2所示。

1.3.4 試驗?zāi)阁H的發(fā)情鑒定：母驢發(fā)情時表現(xiàn)為舉尾巴、后肢開張、陰門腫脹、頻頻排尿且排尿時可見陰道口為鮮紅色、離群、精神不安、吧嗒嘴、張嘴流涎、嘴唇上翻、頻繁鳴叫、耳朵后抿、主動爬跨其他母驢或接受其他母驢爬跨等表現(xiàn)。試情時，將身體狀況良好具有保護措施的公驢放入母驢群中，處于發(fā)情期的母驢會主動接近公驢，并伴有明顯的發(fā)情行為，公驢具有明顯的爬跨行為，且發(fā)情的母驢與試情公驢很難分開，據(jù)此可判斷該母驢已發(fā)情；而未發(fā)情的母驢具有排斥公驢的特點，并對靠近的公驢發(fā)出警告聲。試驗中，將試情公驢放入試驗?zāi)阁H群中試情，每天 2 次（8：00、15：00），來斷定母驢是否發(fā)情。

表1 試驗分組及激素處理過程

表2 卵泡直徑大于35 mm時采用hCG誘導(dǎo)排卵

1.3.5 直腸檢查方法：直腸檢查是鑒定母驢發(fā)情階段及妊娠情況的最直接方法。在直腸檢查前檢查人員應(yīng)事先修剪雙手指甲，以免對其直腸造成傷害。在進行直腸檢查時，首先將驢趕入四柱欄里進行保定，然后檢查人員雙手帶長臂手套并涂抹適量石蠟油，一手抓住驢尾，另一只手伸入直腸中檢查。檢查過程中，如果驢發(fā)生強烈的努責(zé)，應(yīng)配合其努責(zé)稍微退后手臂，待腸道緩和后繼續(xù)進行檢查。驢的直腸與牛的相比，較為狹窄，所以直腸檢查時需要雙手交替工作：用左手去檢查驢右側(cè)卵巢，驢右側(cè)卵巢位于右側(cè)第三、第四腰椎橫突之下；用右手檢查驢左側(cè)卵巢，左側(cè)卵巢位于左側(cè)第四、第五腰椎橫突末端下面。因上午驢腸道內(nèi)糞便較少，且腸道蠕動不如下午強烈，易于直腸檢查的操作，該試驗直腸檢查定于每日上午進行。該試驗中為更準(zhǔn)確記錄試驗數(shù)據(jù)，直腸檢查時采用B超輔助檢查，先進行直腸檢查確定卵巢位置，確定優(yōu)勢卵泡波發(fā)生在哪側(cè)卵巢，確定優(yōu)勢卵泡發(fā)育具體位置，然后用便攜式獸用B超儀檢查，將探頭貼在卵巢上，轉(zhuǎn)動探頭尋找卵泡，選擇最佳位置進行拍攝，并測量卵泡大小、數(shù)量和形狀。結(jié)合試情法和發(fā)情觀察對有發(fā)情表現(xiàn)的母驢，每天上午進行仔細(xì)檢查，觀察其卵泡變化。對經(jīng)激素處理后無發(fā)情表現(xiàn)的母驢隔天進行檢查。

1.3.6 發(fā)情母驢的配種：在種公驢數(shù)量充裕的情況下，為避免人工授精中的各種不確定因素影響到試驗受胎率，該次試驗對所有經(jīng)誘導(dǎo)發(fā)情后有發(fā)情表現(xiàn)的母驢進行了自然本交。A1、B1、C 3組在經(jīng)過 hCG處理后連續(xù) 2 d進行配種，A2、B2、D 3組根據(jù)卵泡發(fā)育情況進行配種。

1.3.7 妊娠檢查：2018年3月初，對試驗?zāi)阁H中接受過交配的母驢進行直腸檢查。此時，配種已有4個多月，若母驢已經(jīng)妊娠，此時進行直腸檢查子宮及胎兒已十分明顯。

1.3.8 繁殖指標(biāo)的統(tǒng)計

受胎率=妊娠母驢/參配母驢

妊娠率=妊娠母驢/試驗?zāi)阁H

1.4 數(shù)據(jù)處理

利用Excel軟件整理原始數(shù)據(jù)，利用SAS 9.0對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 PGF2α在誘導(dǎo)發(fā)情中的作用

由表3可知，在PGF2α單一處理試驗中，采用PGF2α對C組母驢進行連續(xù)5 d的處理，D組為空白對照。C、D 2組發(fā)情率都較低，C組僅有3頭母驢在PGF2α處理后有發(fā)情表現(xiàn)，而D組10頭母驢在非繁殖季節(jié)觀測的40 d內(nèi)仍然有1頭母驢在較早時（10月初）出現(xiàn)發(fā)情表現(xiàn)，這可能與驢自身體質(zhì)有關(guān)，但之后D組并未再有母驢出現(xiàn)發(fā)情現(xiàn)象。C組平均發(fā)情持續(xù)時間明顯低于D組，C組和D組平均發(fā)情持續(xù)時間分別為2.67 d和5.00 d。發(fā)情次日卵泡直徑C、D 2組差別不大，分別為27 mm和30 mm。在利用B超儀輔助直腸檢查時發(fā)現(xiàn)，C組母驢在經(jīng)PGF2α處理后，卵巢上黃體均開始逐漸消退，處理第5天時黃體基本全部消退。對D組10頭母驢進行直腸檢查時發(fā)現(xiàn)，在非繁殖季節(jié)母驢卵巢上仍有卵泡發(fā)育波的存在，但卵泡發(fā)育直徑均較小，未出現(xiàn)排卵現(xiàn)象。

表3 PGF2α對母驢發(fā)情的影響

表4 不同劑量PMSG對母驢發(fā)情情況的影響

表5 不同劑量PMSG對卵泡發(fā)育的影響

綜上所述，驢屬于季節(jié)性發(fā)情動物，通遼地區(qū)母驢進入10月后，母驢卵巢還有卵泡波的存在，但基本上處于停止自然發(fā)情狀態(tài)；單獨使用PGF2α對非繁殖季節(jié)母驢誘導(dǎo)發(fā)情效果不明顯，而PGF2α對母驢黃體卻有明顯的消除作用。

2.2 PGF2α處理后不同濃度PMSG對母驢誘導(dǎo)發(fā)情的影響

2.2.1 不同劑量的PMSG對驢發(fā)情的影響：由表4可知，PGF2α與PMSG聯(lián)合處理的 A、B組發(fā)情頭數(shù)分別為14頭和13頭，發(fā)情率分別為93.33%和86.66%，結(jié)果顯示PGF2α與不同劑量的PMSG聯(lián)合處理對驢發(fā)情的影響并不明顯，但均明顯高于C組（PGF2α單獨使用對母驢的處理）。以PMSG處理當(dāng)日為第1天，A、B、C 3組分別在處理后（3.93±1.01）d、（4.77±1.00）d 和（6.33±1.15）d 出現(xiàn)發(fā)情現(xiàn)象，發(fā)情間隔天數(shù)隨PMSG劑量減少呈上升趨勢（見圖1），A、B 2組發(fā)情間隔天數(shù)差異不顯著 （P＞0.05），但 A、B 2 組與 C 組差異極顯著（P＜0.01）。而發(fā)情持續(xù)時間 A、B、C 3 組分別為（5.79±1.31）d、（4.54±0.58）d、（2.67±0.97）d，平均發(fā)情持續(xù)天數(shù)隨 PMSG劑量減少呈下降趨勢（見圖1），A、B 2組與C組的發(fā)情持續(xù)時間存在極顯著差異（P＜0.01）。

圖1 母驢發(fā)情時間的變化

綜上所述，PGF2α聯(lián)合PSMG對誘導(dǎo)乏情母驢發(fā)情效果較好，經(jīng)1 000 IU PMSG處理后的母驢，發(fā)情表現(xiàn)的出現(xiàn)要早于500 IU PMSG處理的母驢，但發(fā)情持續(xù)時間較長。

2.2.2 不同劑量的PMSG對卵泡的影響：由表5可知，誘導(dǎo)發(fā)情中不同劑量的PMSG對卵泡波發(fā)育的影響不同。發(fā)情次日對母驢進行直腸檢查，結(jié)果顯示A組優(yōu)勢卵泡平均直徑為（3.47±0.33）mm，B組優(yōu)勢卵泡直徑為 （3.15±0.28）mm，C組優(yōu)勢卵泡直徑為（2.70±0.17）mm，A、B 2 組卵泡直徑大小差異不顯著（P＞0.05），A、B 2個組與 C組優(yōu)勢卵泡直徑差異極顯著（P＜0.01）。大于25 mm卵泡個數(shù)A 組為（2.43±0.65）個、B 組（1.62±0.51）個、C 組（0.67±0.58） 個，A、B、C 3 組之間大于 25 mm 卵泡個數(shù)差異均極顯著（P＜0.01）。由圖 2得知，隨著PMSG注射量的減少，卵巢內(nèi)優(yōu)勢卵泡的直徑和大于25 mm卵泡個數(shù)均呈下降趨勢。在直腸觸診時可明顯發(fā)現(xiàn)經(jīng)1 000 IU劑量處理后的母驢具有優(yōu)勢卵泡的卵巢個體均較大，明顯大于正常發(fā)情母驢卵巢，觸摸時有肥大且具有彈性的感覺，部分母驢有明顯疼痛感；而500 IU劑量處理的母驢，卵巢形態(tài)較為正常，優(yōu)勢卵泡突起明顯，質(zhì)地較硬。

表6 不同劑量PMSG對排卵的影響

表7 相同PMSG劑量下的hCG對排卵的影響

綜上所述，誘導(dǎo)發(fā)情中利用PMSG處理會使非繁殖季節(jié)中的母驢卵泡得到明顯發(fā)育，PMSG劑量越高優(yōu)勢卵泡直徑越大、大卵泡數(shù)量越多；而沒有注射PMSG的母驢卵泡發(fā)育較小。但PMSG在1 000 IU劑量下的卵巢形態(tài)較為異常，這可能是由于同時出現(xiàn)的大卵泡數(shù)量多導(dǎo)致的。

2.3 誘導(dǎo)排卵的試驗結(jié)果

2.3.1 不同劑量PMSG下hCG對排卵的影響：由表6可知，當(dāng)卵泡直徑大于35 mm時使用總量為1 500 IU的hCG分別對 A1、B1和 C 3組發(fā)情母驢進行處理，3組在 48 h內(nèi)排卵率分別為 88.89%、55.56%、33.33%。

由此得出，1 000 IU PMSG（A1組）處理過的母驢，在hCG促進排卵后，優(yōu)勢卵泡基本全部在48 h內(nèi)排出，排卵時間較集中，相比之下經(jīng)500 IU PMSG（B1組）處理的母驢，排卵集中程度較低，不利于配種工作的集中進行。而C組發(fā)情的3頭母驢，只有 1頭成功排卵，其余 2頭的優(yōu)勢卵泡并未排卵。采用hCG處理優(yōu)勢卵泡排卵時，PMSG劑量越大，發(fā)情母驢在短時間內(nèi)排卵越集中。

2.3.2 相同PMSG劑量下的hCG對排卵的影響：由表7可知，在相同PMSG水平下，hCG處理排卵效果明顯，A1、B1最終的排卵率為 100%和77.78%，而A2和B2的排卵率為60.00%和50.00%。結(jié)果表明，在誘導(dǎo)發(fā)情試驗中，利用hCG處理發(fā)情母驢后能成功排卵的母驢數(shù)明顯高于對照組，這證明了hCG對處于乏情期誘導(dǎo)發(fā)情后的母驢卵巢上優(yōu)勢卵泡作用明顯，能加快優(yōu)勢卵泡排卵，且明顯提高母驢的排卵率。

表8 各試驗組發(fā)情狀況

2.4 各處理方法發(fā)情率與妊娠率結(jié)果比較

由表8可知，A、B 2組處理方法的發(fā)情率分別達(dá)到了93.33%和86.67%，而C組發(fā)情率較低僅有30.00%，對照組D組發(fā)情率僅為10.00%，A、B 2組發(fā)情率明顯高于C、D組。由表9和圖3可知，整個試驗過程的受胎率和妊娠率A1組最高分別達(dá)到了88.89%和80.00%，其次是B1組（分別為66.67%和60.00%）。B2、C 2組的受胎率和妊娠率都較低，D組雖然存在1頭母驢發(fā)情，但配種后未妊娠。

分析得出，PGF2α與PMSG聯(lián)合處理可以使大部分處于非繁殖季節(jié)的母驢發(fā)情，且PMSG劑量越高，發(fā)情率越高。 PGF2α、PMSG、hCG 3 種激素聯(lián)合使用，可以使處于非繁殖季節(jié)的母驢發(fā)情，并在配種后成功妊娠。試驗中并未出現(xiàn)排多卵的母驢，證明PMSG在誘導(dǎo)母驢發(fā)情過程中主要起促進卵泡發(fā)育、增大卵泡體積的作用，并不能使卵泡的數(shù)量增多。hCG可促進母驢成熟卵泡的排出，提高受胎率。但在試驗過程中發(fā)現(xiàn)經(jīng)1 000 IU PMSG處理過后的母驢，卵巢體積明顯大于正常水平，并帶有一定的腫脹現(xiàn)象，而經(jīng)500 IU處理的母驢卵巢形態(tài)較為正常，為避免長期使用該激素對母驢卵巢造成不利影響，該研究認(rèn)為A1組和B1相比雖然妊娠率相對較高，但對卵巢的負(fù)面影響不利于長期在實踐中使用，所以綜合考慮，認(rèn)為 B1組處理方法在實踐應(yīng)用中更有優(yōu)勢。

圖2 P MSG對卵泡發(fā)育的影響

表9 各處理方法妊娠結(jié)果

2.5 優(yōu)勢卵泡發(fā)生邊側(cè)

由表10統(tǒng)計可知，對試驗中所有發(fā)情母驢（31頭）進行直腸檢查發(fā)現(xiàn)，優(yōu)勢卵泡在左側(cè)卵巢出現(xiàn)了共計13次，在右側(cè)卵巢出現(xiàn)了共計18次，左、右側(cè)分別占比41.93%和58.07%。由表11可知，左側(cè)排卵母驢妊娠數(shù)量為8頭，受胎率為61.54%，右側(cè)排卵母驢妊娠頭數(shù)為11頭，受胎率為61.11%。分析發(fā)現(xiàn)，母驢右側(cè)卵巢發(fā)生優(yōu)勢卵泡的概率要略高于左側(cè)，但左、右兩側(cè)卵巢優(yōu)勢卵泡的受胎率接近。

3 討論

3.1 非繁殖季節(jié)母驢卵巢特點

圖3 各處理方法妊娠結(jié)果比較

表10 優(yōu)勢卵泡發(fā)生邊側(cè)

在非繁殖季節(jié)母畜體內(nèi)卵巢和垂體分泌激素的能力明顯下降，不能促使卵巢上的卵泡發(fā)育至成熟并排卵，且母畜不出現(xiàn)發(fā)情現(xiàn)象。該試驗中通過對非繁殖季節(jié)母驢進行直腸檢查發(fā)現(xiàn)，在乏情季節(jié)母驢卵巢上仍有卵泡發(fā)育波的出現(xiàn)，但大于30 mm的卵泡并未出現(xiàn)，每一個卵泡波都在發(fā)育到一定程度后開始退化，空白對照組D在觀測的40 d中僅有1頭出現(xiàn)明顯的優(yōu)勢卵泡，并出現(xiàn)自然發(fā)情的表現(xiàn)，這可能與個別驢體質(zhì)有關(guān)，其他驢在試驗過程中未出現(xiàn)發(fā)情現(xiàn)象。Quaresma等［3］對非繁殖季節(jié)母驢卵巢進行監(jiān)測時發(fā)現(xiàn)，在冬季母驢卵巢上仍會有連續(xù)的明顯卵泡波活動，但大部分卵泡直徑小于18 mm，偶爾出現(xiàn)大于 25 mm卵泡，但未發(fā)生優(yōu)勢卵泡和排卵現(xiàn)象，在監(jiān)測的所有驢中僅有個別母驢出現(xiàn)發(fā)情表現(xiàn)。

表11 各側(cè)卵巢受胎率

3.2 母驢左、右側(cè)卵巢對排卵率的影響

研究發(fā)現(xiàn)，母驢右側(cè)卵巢發(fā)生優(yōu)勢卵泡的概率高于左側(cè)，這說明在母驢繁殖過程中右側(cè)卵巢排卵的次數(shù)要高于左側(cè)。這與張新浩等［4］對不同季節(jié)母驢卵巢排卵能力統(tǒng)計中發(fā)現(xiàn)的右側(cè)卵巢的排卵率為55.38%，顯著高于左側(cè)卵巢（P＜0.05）的研究保持一致。但在該試驗中兩側(cè)卵巢發(fā)育的優(yōu)勢卵泡在排卵后受孕的能力是相同的。由此看來，兩側(cè)卵巢僅在排卵次數(shù)上存在差異，但受孕能力是不存在差異的。

3.3 不同激素在母驢誘導(dǎo)發(fā)情中的影響

相比于牛、羊、豬，驢的繁殖力在實際生產(chǎn)中較低，這與驢自身特殊的排卵形式和對繁殖技術(shù)處理中常用的外源激素敏感程度較低有密不可分的關(guān)系。誘導(dǎo)發(fā)情中，常用的激素有神經(jīng)激素類的促性腺激素釋放激素和褪黑激素、促性腺激素類的 FSH、LH、PMSG、hCG等，以及雌激素和孕激素等。該試驗并沒有使用誘導(dǎo)發(fā)情中常用的外源促性腺激素 （例如 FSH、LH），而是選擇了 PGF2α、PMSG和hCG 3種激素對驢進行誘導(dǎo)發(fā)情和排卵，因為上述3種激素均為母驢較為敏感的激素。而目前國內(nèi)誘導(dǎo)發(fā)情與超數(shù)排卵試驗過程中常用的FSH，基本都是從豬垂體分泌物中提取出的，且大量研究數(shù)據(jù)表明馬屬動物對外源FSH處理極不敏感［5］。早在 2009年，國外研究者便利用馬體內(nèi)提取的促卵泡素（eFSH）或馬重組促卵泡素（reFSH）對馬和驢進行處理，處理結(jié)果證明驢對eFSH和reFSSH處理較為敏感，且誘導(dǎo)發(fā)情和超數(shù)排卵效果較好［6］，但現(xiàn)階段國內(nèi)難以購買到該2種激素。PMSG在動物體內(nèi)半衰期較長，而驢發(fā)情持續(xù)時間也相對較長，試驗中一次注射就可以達(dá)到效果，所以試驗并沒有選擇誘導(dǎo)馬屬動物發(fā)情效果較好的reFSH或eFSH，卻選擇了PMSG。

3.3.1 PGF2α對非繁殖季節(jié)母驢的影響：該試驗利用PGF2α處理母驢，可有效消除母驢卵巢上的黃體，B超檢查時發(fā)現(xiàn)存在黃體的母驢在連續(xù)注射PGF2α的過程中黃體全部被溶解，這一結(jié)果與Alcantara［7］的研究結(jié)果相接近，Alcantara 對 25 匹母馬進行氯前列醇處理，處理2 d后，96%的母馬體內(nèi)孕酮水平明顯下降，這說明母馬體內(nèi)黃體已被溶解。張翔等［8］研究表明 PGF2α具有溶解黃體的作用，還發(fā)現(xiàn)在母驢排卵后5～7 d注射效果最佳，且注射PGF2α后可有效縮短母驢發(fā)情周期。

該試驗在 PGF2α誘導(dǎo)發(fā)情結(jié)果中，單獨使用PGF2α的 C組發(fā)情個體較少，僅有 3頭母驢出現(xiàn)發(fā)情現(xiàn)象，且發(fā)情母驢卵泡發(fā)育較小，優(yōu)勢卵泡不明顯，僅有1頭母驢成功排卵，這與空白對照組（D組）差別不明顯，因此，認(rèn)為單獨使用 PGF2α對母驢誘導(dǎo)發(fā)情效果不好，且對卵泡發(fā)育并沒有促進作用，所以單獨使用 PGF2α誘導(dǎo)母驢發(fā)情效果不明顯。同樣何良軍等［9］利用PGF2α在對母驢進行同期發(fā)情試驗中證明單獨使用PGF2α對母驢同期發(fā)情效果不明顯。而PGF2α在母牛誘導(dǎo)發(fā)情中效果極明顯，早在 1996年劉悅竹等［10］利用國產(chǎn)氯前列烯醇對超過3個月未有發(fā)情表現(xiàn)及少數(shù)參配但未孕的109頭母牛進行處理，其中70%以上的母牛在處理后出現(xiàn)發(fā)情表現(xiàn)。張良等［11］對不同品種母羊施用氯前列烯醇進行誘導(dǎo)發(fā)情，試驗?zāi)秆蚬灿? 177只，發(fā)情率達(dá)到了66.19%。由此得出結(jié)論，利用PGF2α誘導(dǎo)發(fā)情，對牛、羊等動物有效，但其對驢的誘導(dǎo)發(fā)情效果不明顯。

研究證實，對驢單次注射大劑量的PGF2α?xí)鼓阁H出現(xiàn)各種副反應(yīng)，如四肢無力、全身發(fā)抖，尤其在對腸胃副作用較大，在注射PGF2α后會出現(xiàn)腸胃功能紊亂、腹瀉等癥狀［7］。而該試驗選擇小劑量 （0.2 mg/頭）PGF2α連續(xù)多天注射的方法并未出現(xiàn)上述副反應(yīng)，說明該處理方法溶解黃體對于母驢是可行的。

3.3.2 不同劑量PMSG對母驢誘導(dǎo)發(fā)情效果的影響：試驗采用PGF2α結(jié)合PMSG的誘導(dǎo)發(fā)情方案在非繁殖季節(jié)誘導(dǎo)母驢發(fā)情，研究了不同劑量PMSG對母驢發(fā)情效果的影響。試驗中PMSG對非繁殖季節(jié)中的母驢卵泡發(fā)育和促使乏情母驢發(fā)情具有明顯的作用，乏情季節(jié)母驢對PMSG處理是敏感的，1 000、500 IU/頭 PMSG處理后的母驢發(fā)情率分別達(dá)到了93%和86%，明顯高于對照組，該結(jié)果與 No?l［12］、 張居農(nóng)［13］、 張學(xué)煒等［14］使用PMSG對羊誘導(dǎo)發(fā)情效果較好保持一致。但1 000 IU/頭劑量下的卵巢形態(tài)較為異常，有囊腫的趨勢，其原因可能是由于同時出現(xiàn)的大卵泡數(shù)量多導(dǎo)致的。綜合PMSG對母驢的副反應(yīng)，在實際生產(chǎn)過程中，采用PMSG誘導(dǎo)母驢發(fā)情劑量選擇500 IU/頭優(yōu)于 1 000 IU/頭。

該試驗中PMSG劑量越高，母驢發(fā)情表現(xiàn)出現(xiàn)越早，發(fā)情持續(xù)天數(shù)越長，優(yōu)勢卵泡直徑越大，大卵泡數(shù)量越多，而沒有注射PMSG的母驢發(fā)情率很低且卵泡發(fā)育較小，試驗中并未出現(xiàn)由于PMSG劑量的提高而導(dǎo)致排多卵的情況。這與何良軍等［15］的研究結(jié)果保持一致，何良軍等人認(rèn)為PMSG可以使卵泡直徑增大、發(fā)育增快，但并不能使母馬超數(shù)排卵。

3.3.3 PMSG和hCG對母驢誘導(dǎo)排卵的影響：該試驗中誘導(dǎo)排卵過程中使用同樣劑量的hCG（1 500 IU/頭） 對 PMSG 劑量不同的 A1、B1、C 3組進行處理。結(jié)果顯示：在處理后48 h內(nèi)排卵率A1組高于 B1組，分別為 88.89%和 55.56%，但 C組在 48 h內(nèi)僅有 1頭母驢排卵；A1在經(jīng)hCG處理后排卵時間較為集中，在實際生產(chǎn)中更利于對排卵時間進行把控和準(zhǔn)確把握配種時間。這也證明了由于PMSG濃度的增加，卵泡在相同時間內(nèi)（hCG處理后至排卵）生長速度更快，且卵泡平均直徑越大，在hCG注射后越容易在短時間內(nèi)排卵。

在相同 PMSG劑量下 A1、B12組注射 hCG（1 500 IU/頭），而對照組（別為 A2、B2組）未作 hCG處理。結(jié)果表明，A1、B1組母驢的排卵率明顯高于各自的對照組。試驗中均是在卵泡直徑達(dá)到35 mm時才做hCG處理的，證明hCG對母驢優(yōu)勢卵泡促進排卵具有明顯效果。雖然A2、B2組均有優(yōu)勢卵泡出現(xiàn)但部分優(yōu)勢卵泡最后退化掉了，并沒有成功排出，這可能是由于處在非繁殖季節(jié)時的母驢激素水平較低，而PMSG雖然使卵泡得到了充分的發(fā)育，但對母驢優(yōu)勢卵泡破裂排卵的能力并不明顯。這與趙德強等［5］對母馬的研究結(jié)果保持一致，在乏情季節(jié)馬卵巢功能較低，自身激素分泌能力不足，而hCG對馬卵泡的作用具有選擇性，卵泡直徑＜35 mm的馬對hCG的處理不敏感；卵泡直徑≥35 mm時，用hCG處理母馬，可以促進卵泡發(fā)育。丁修芳等［16］3年內(nèi)用hCG對318匹母馬進行處理，研究結(jié)果表明10.43%的母馬能在處理后 24 h內(nèi)排卵，69.78%的母馬在處理后 25～48 h排卵，48 h內(nèi)排卵率達(dá)80.21%，經(jīng)處理后無效母馬僅占2.83%。而在對羊的試驗中，Wani等［17］利用PMSG對母羊誘導(dǎo)發(fā)情，當(dāng)母羊發(fā)情時靜脈注射hCG，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法中hCG組與空白對照組的排卵率差異不顯著。

3.4 不同處理方法對誘導(dǎo)發(fā)情效果影響

試驗中使用不同劑量的PMSG和hCG對母驢進行處理時，經(jīng)1 000 IU/頭和500 IU/頭PMSG處理的A、B組發(fā)情率均高于對照C、D組，但在總體妊娠率和受胎率中可以看出A1、A2、B13組明顯高于 B2、C、D 3組，而A1組的 48 h排卵率明顯高于 B1組和 A2組，A1、B1組的試驗誘導(dǎo)發(fā)情處理方法妊娠率分別為80%和60%，均能有效提高養(yǎng)驢場整體的繁殖率，但A1組注射1 000 IU PMSG對母驢副作用較明顯，不利于長期對養(yǎng)驢場進行誘導(dǎo)發(fā)情處理。綜上所述，B1組處理方法無論發(fā)情率、排卵集中程度還是妊娠率，均優(yōu)于其他處理方法，有利于養(yǎng)驢場減短空懷期和控制母驢排卵時間，從而提高種公驢利用率和養(yǎng)驢場的經(jīng)濟效益。

4 結(jié)論

①PGF2α對母驢黃體具有明顯溶解作用；PMSG可以誘導(dǎo)非發(fā)情季節(jié)母驢發(fā)情，促進卵泡波中的卵泡增長，增大優(yōu)勢卵泡直徑，但對母驢并不具有超排效果。采用PGF2α+PMSG方案在非繁殖季節(jié)誘導(dǎo)母驢發(fā)情是可行的。

②使用PGF2α與PMSG對處于乏情期的母驢誘導(dǎo)發(fā)情后，注射hCG對母驢優(yōu)勢卵泡具有明顯的促進排卵作用，可明顯提高試驗?zāi)阁H的受胎率。

③該試驗最終確定的非繁殖季節(jié)誘導(dǎo)發(fā)情最佳方案為：使用0.2 mg PGF2α連續(xù)處理5 d，第6天使用PMSG 500 IU，當(dāng)優(yōu)勢卵泡直徑達(dá)35 mm時使用hCG 1 500 IU，排卵后配種。