IL-10基因多態(tài)性與中國北方人群糖尿病腎病易感性的關(guān)系*

馬東紅，劉 云，石 巖，許清玉，郭明好

(新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，河南衛(wèi)輝 453100)

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是導致終末期腎功能衰竭的主要原因之一，在美、日和歐洲等發(fā)達國家和地區(qū)，DN已成為終末期腎病的首位病因(約占35%)，在我國這一比例也逐漸上升[1]。但發(fā)病機制至今尚未完全闡明。環(huán)境和生活方式因素，如高血壓、肥胖、高尿酸血癥、高腎小球濾過率、血糖控制等都參與DN的發(fā)病[2]。另外，遺傳易感性在DN的發(fā)展和嚴重程度上也發(fā)揮了舉足輕重的作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在DN的發(fā)病過程中，腎臟炎癥起了至關(guān)重要的作用。白細胞介素(IL)-10主要由輔助性T細胞(Th2細胞)產(chǎn)生，是一個眾所周知的免疫調(diào)節(jié)細胞因子，其主要調(diào)節(jié)T細胞和單核細胞/巨噬細胞[3]。IL-10基因位于染色體1q31-1q32，編碼一個相對分子質(zhì)量為4.7×103的蛋白質(zhì)，在其5′區(qū)域的轉(zhuǎn)錄起始點已證實存在3個常見的單核苷酸多態(tài)性，其對IL-10的產(chǎn)生是重要的決定因子。他們分別是-1082位點G/A(rs1800896)、-819位點T/C(rs1800871)、-592位點A/C(rs1800872)[4]。已有研究報告，IL-10水平與DN患者尿蛋白/肌酐比值呈明顯正相關(guān)，這表明炎癥細胞因子和趨化因子的異常產(chǎn)生是DN潛在的免疫病理機制[5]。另有研究發(fā)現(xiàn)，隨著DN的進展，外周血中炎癥細胞因子水平明顯增加[6]。已有研究報道，IL-10-592C/A、-819C/T和-1082G/A基因多態(tài)性與DN易感性的關(guān)系，但結(jié)果并不一致[7-11]。因此，本研究主要探討IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態(tài)性與中國DN易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院2012年6月到2015年12月確診為2型糖尿病(DM)及DN的患者224例(觀察組)。DM參照1999年世界衛(wèi)生組織制定的標準，根據(jù)蛋白尿及腎小球濾過率的水平診斷為DN。伴有嚴重難以控制的高血壓(160/100 mm Hg)、急性或慢性感染、合并腫瘤等患者除外。DN患者的平均年齡為(56.85±11.44)歲，男性占54.91%。選取同期在本院進行常規(guī)健康檢查的健康人350名作為對照組。根據(jù)空腹血糖水平、蛋白尿和腎小球濾過率確定對照組均無DM和DN。對照組平均年齡為(53.43±10.73)歲，男性占54.57%。觀察組和對照組受試者均在入組時由專一護士登記、收集其人口學資料，根據(jù)就醫(yī)記錄收集臨床數(shù)據(jù)。所有研究對象在實驗前簽署知情同意書。該項研究通過本院臨床研究倫理委員會的批準。

1.2基因分型 研究對象晨起空腹采集靜脈血4 mL，-80 ℃保存。全基因組DNA通過血液DNA提取試劑盒(Qiagen公司，瓦倫西亞，CA，USA)從全血標本中分離出來。IL-10-1082G/A，-819T/C和-592A/C多態(tài)性通過聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性進行分型。IL-10-1082G/A，-819T/C和-592A/C的PCR引物和限制酶見表1。PCR反應(yīng)條件如下：起始模板變性94 ℃，5 min；其后30個循環(huán)：94℃變性45 s，可變溫度退火30 s，72 ℃延伸45 s。所得片段經(jīng)2%瓊脂糖凝膠用溴化乙錠染色，以確定2個多態(tài)位點。

2 結(jié) 果

2.1人口學資料 兩組對象在年齡、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、高血壓、三酰甘油(TG)水平、總膽固醇(CHO)水平、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平、血肌酐(SCr)水平等指標差異均有統(tǒng)計學意義；而在性別、吸煙情況、飲酒情況等指標之間差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

表1 PCR引物及限制性內(nèi)切酶

表2 兩組對象的人口統(tǒng)計資料及臨床特征

續(xù)表2 兩組對象的人口統(tǒng)計資料及臨床特征

-：無數(shù)據(jù)

2.2IL-10-1082G/A、-819T/C，和-592A/C基因多態(tài)性的分布 觀察組患者中的IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C多態(tài)性的基因型分布并沒有偏離哈迪-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)，P=0.82、0.33、0.59。對照組IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C多態(tài)性的基因型分布的P=0.33、0.25、0.31，也沒有偏離HWE。χ2比較顯示IL-10-1082G/A多態(tài)性上的GG、GA和AA基因頻率存在一個顯著的區(qū)別，在DN和對照組之間差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.729，P= 0.021)，而IL-10-819T/C和-592A/C多態(tài)性上的基因頻率，在觀察組和對照組之間差異無統(tǒng)計學意義，見表3。

表3 IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態(tài)性的分布[n(%)]

表4 IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態(tài)性和患DN風險的關(guān)聯(lián)[n(%)]

續(xù)表4 IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態(tài)性和患DN風險的關(guān)聯(lián)[n(%)]

2.3IL-10-1082G/A、-819T/C和-592A/C基因多態(tài)性和罹患DN風險的關(guān)聯(lián) Logistic回歸分析顯示，和野生型基因相比，IL-10-1082G/A的AA基因型明顯增加了DN的易感性(OR=2.147，95%CI=1.225～3.762)。此外，與G等位基因相比，A等位基因增加了罹患DN的風險(OR=1.404，95%CI=1.095～1.800)。然而，IL-10-819T/C和-592A/C基因多態(tài)性的Logistic回歸分析顯示他們的基因型和等位基因與DN的易感性不相關(guān)，見表4。

3 討 論

DN的病程發(fā)展受很多環(huán)境因素的影響，例如腎小球高濾過、高壓力、嚴格的血糖控制以及種族差異[12]。然而，即使暴露于完全相同的危險因素下，并非所有的患者均發(fā)生DN，這說明DN的發(fā)生有遺傳因素參與，即不同種族間DN的發(fā)病率存在顯著差異。

長期以來，DN一直被認為是代謝性疾病。然而，最新研究發(fā)現(xiàn)，在DN的發(fā)病過程中，腎臟局部炎癥起了至關(guān)重要的作用。IL-10是抗炎細胞因子，可抑制巨噬細胞合成IL-6、IL-1β、IL-1α和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，抑制T細胞產(chǎn)生干擾素-γ(IFN-γ)。IL-10主要由Th2細胞、調(diào)節(jié)性T細胞、單核/巨噬細胞產(chǎn)生，在免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)中起重要作用。IL-10具有抗炎和免疫抑制雙重特性，且IL-10的活性和DN的臨床預(yù)后密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，DN患者中外周血IL-10水平明顯升高。另有研究發(fā)現(xiàn)，IL-10水平和DN腎臟損害程度密切相關(guān)。因此，本研究觀察IL-10-1082G/A、-819T/C、-592A/C的基因多態(tài)性與DN發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。結(jié)果提示，IL-10-1082G/A多態(tài)性在中國人口中與野生型相比罹患DN的風險明顯增加。

越來越多的研究報道IL基因的改變和糖尿病之間的關(guān)系[13]。例如，有研究報道在自身免疫性糖尿病小鼠中IL-10表達的升高起到保護作用[14]。也有報道IL-10基因轉(zhuǎn)移可使促炎癥細胞因子表達下調(diào)，減弱胰腺的胰島炎癥，以及抑制胰腺β細胞凋亡，從而降低雌性非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的發(fā)病率[15]。這些研究表明，IL-10的高表達可提高糖尿病的易感性。

DN是糖尿病的常見并發(fā)癥之一，有研究探討了IL-10基因多態(tài)性在DN發(fā)展中的作用。然而，這些研究的結(jié)果并不一致。有研究報道了在德國人中，IL-10-1082G/A的GG基因型多態(tài)性可增加罹患罹患終末期腎臟病的風險[16]。同樣，在突尼斯人口中IL-10-819T/C上的T等位基因和DM之間存在關(guān)聯(lián)[11]。

而在中國人中，IL-10基因多態(tài)性與DN的易感性關(guān)系如何，目前此方面研究較少。因此，本研究發(fā)現(xiàn)IL-10-1082G/A基因多態(tài)性與罹患DN的風險有顯著的相關(guān)性，即AA基因型明顯增加了DN的易感性。

這項研究有一定的局限性。(1)研究受試者是從單一的區(qū)域(豫北地區(qū))招募的，而中國南北地區(qū)季節(jié)、生活習慣等差異較大，不能準確地代表整個中國人群；(2)本研究的樣本量相對較小，這可能影響到群體之間的統(tǒng)計學存在顯著差異。需要進一步的擴大樣本量以驗證本研究結(jié)果?？傊?，本研究結(jié)果顯示IL-10-1082 G/A多態(tài)性與DN的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。