西藏牦牛乳酸奶對(duì)降低小鼠體內(nèi)膽固醇的效果研究

◎ 楊鳳志，胡錦虎，白瑪央宗

（西藏大學(xué)，西藏 拉薩 850000）

牦牛是世界上生活在海拔最高處的哺乳動(dòng)物之一，主要生長在中國青藏高原海拔3 000 m以上地區(qū)[1]。為適應(yīng)高寒生態(tài)條件，牦牛奶具有抗寒、抗缺氧、抗疲勞的特性，而牦牛乳經(jīng)過益生菌發(fā)酵變成牦牛乳酸奶，其中的營養(yǎng)價(jià)值發(fā)生了很大的改變。西藏牦牛乳酸奶是藏區(qū)傳統(tǒng)飲品，其中含有大量的維生素、礦物質(zhì)以及人體所必需的氨基酸，是天然的綠色食品[2-4]。

牦牛乳經(jīng)益生菌發(fā)酵成牦牛乳酸奶，其酸奶中含有的c9-CLA具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低脂肪積累、增強(qiáng)機(jī)體生理調(diào)控能力、減緩生理系統(tǒng)的副反應(yīng)，還具有調(diào)節(jié)血糖，調(diào)節(jié)代謝能力等多種生理功能[7]?，F(xiàn)在人們生活水平提高，飲食偏油膩，從而導(dǎo)致膽固醇易升高，引起多種心腦血管疾病。

血清總膽固醇的測(cè)定是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病防治、臨床診斷和營養(yǎng)研究的重要指標(biāo)[5]。所以，關(guān)于西藏牦牛乳酸奶降膽固醇效果的研究，有利于當(dāng)前人們的健康發(fā)展。通過研究可以提高人們對(duì)牦牛乳酸奶的認(rèn)知度，指導(dǎo)人們?cè)诿鎸?duì)商家宣傳時(shí)更理性地選擇牦牛乳酸奶?；诖?，本實(shí)驗(yàn)對(duì)牦牛乳酸奶降低膽固醇的效果進(jìn)行探究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與儀器

SPF級(jí)小白鼠，雄性，8周齡，體重30～35 g，西藏自治區(qū)獸醫(yī)生物藥品制造廠；凱達(dá)離心機(jī)，TGL16A，湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司；移液槍，德國艾本德股份公司；一次性空針管，浙江康德萊醫(yī)療器械股份有限公司；EP離心管、灌喂針，北京中科恒天科技有限公司；辛伐他汀片，廈門福滿藥業(yè)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 辛伐他汀懸濁液制備

使用研缽將辛伐他汀片研碎，用無菌水配制成辛伐他汀懸濁液，辛伐他汀懸濁液平均濃度10 mg/mL。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)小鼠分組和處理

①分組方法。將28只健康小鼠隨機(jī)分為4組，即空白對(duì)照組（A組）、辛伐他汀組（B組）、普通酸奶組（C組）、牦牛乳酸奶組（D組），每組7只。②處理方式。第1周為適應(yīng)性喂養(yǎng)階段，每組投喂正常飼料。從第2周開始，每組按照分組連續(xù)投喂相應(yīng)材料。A組投喂正常飼料，B組灌喂10 mg/（kg·d）辛伐他汀，C組灌喂1 mL/（只·d）普通酸奶，D組灌喂1 mL/（只·d），連續(xù)投喂4周。小鼠每7 d采集一次血樣。所有小鼠進(jìn)食相同飼料和水，分籠同室飼養(yǎng)。

1.2.3 血清采集

對(duì)4組小鼠每7 d采集一次血樣，采血方式為頜下靜脈采血，對(duì)小鼠頜下靜脈采血后，未發(fā)現(xiàn)小鼠有任何不適，飲水進(jìn)食正常，說明采血量對(duì)小鼠無不適反應(yīng)。血樣采集后，血樣放置于EF離心管，室溫靜置45 min，4 ℃靜置40 min后，使用離心機(jī)離心20 min（2 500 r/min），收集上層血清。

1.2.4 血清總膽固醇的檢測(cè)

本實(shí)驗(yàn)采用偶聯(lián)酶法對(duì)血樣中提取的血清進(jìn)行血清總膽固醇的檢測(cè)。其實(shí)驗(yàn)原理是利用膽固醇酯酶可以將血清膽固酯醇水解為游離膽固醇和游離脂肪酸。膽固醇氧化酶經(jīng)氧化作用把膽固醇分解生成△4-膽甾烯酮和H2O2，H2O2經(jīng)4-氨基安替比林和酚發(fā)生化學(xué)反應(yīng)時(shí)，氧化物酶發(fā)生催化反應(yīng)，此時(shí)有紅色的醌類化合物生成[6]。樣品中血清總膽固醇含量與顏色的深淺程度成正比，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算樣本中血清總膽固醇含量。

2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

對(duì)收集的數(shù)據(jù)使用R軟件做方差分析和多元回歸分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x-±s表示。

3 結(jié)果與分析

由表1可知，在方差分析和相關(guān)性分析中，各組小鼠的血清總膽固醇含量在試驗(yàn)的7～28 d的檢測(cè)日期均沒有顯著性差異（P＞0.05）。

高密度脂蛋白（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）具有維持血液中膽固醇平衡、轉(zhuǎn)送膽固醇到肝臟進(jìn)行代謝的功能，HDL-C的升高對(duì)于TC的降低具有一定的意義[4]。檢測(cè)HDL-C含量可以推測(cè)牦牛乳酸奶對(duì)降低膽固醇是否具有潛在影響。實(shí)驗(yàn)中通過對(duì)HDL-C的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和相關(guān)性分析，在試驗(yàn)的檢測(cè)日期中，各組小鼠的HDL-C含量沒有顯著性差異（P＞0.05）。

表1 各組小鼠TC、HDL-C含量變化表（n=7，s，mmol/L）

表1 各組小鼠TC、HDL-C含量變化表（n=7，s，mmol/L）

組別 TC HDL-C 7 d 14 d 21 d 28 d 7 d 14 d 21 d 28 d A 組 2.48±0.32 2.42±0.28 2.32±0.54 2.19±0.46 1.90±0.34 1.85±0.16 1.84±0.39 1.72±0.31 B 組 2.33±0.30 2.41±0.34 2.35±0.71 1.80±0.67 1.73±0.38 1.92±0.26 1.76±0.37 1.92±0.50 C 組 2.67±0.44 2.96±0.44 2.31±0.56 2.21±0.44 2.03±0.41 1.96±0.27 1.75±0.43 1.67±0.28 D 組 2.45±0.34 2.79±0.30 2.27±0.55 2.22±0.53 1.84±0.31 2.23±0.59 1.74±0.42 1.74±0.37

4 討論

本實(shí)驗(yàn)研究嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)計(jì)劃進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，樣品的投喂和血清的采集均按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，血樣的采集對(duì)小鼠的行為和進(jìn)食無任何不適反應(yīng)，所以血液采集對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有干擾。血清總膽固醇的檢測(cè)是采用當(dāng)前主流的檢測(cè)方法——酶解法，此法結(jié)果精準(zhǔn)，需樣本量小，檢測(cè)過程對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無干擾。血清檢測(cè)后，對(duì)數(shù)據(jù)使用R軟件進(jìn)行方差分析和相關(guān)性分析，得出各組小鼠之間沒有顯著性差異（P＞0.05），無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。牦牛乳酸奶降低膽固醇是得益于酸奶中不同的乳酸桿菌代謝產(chǎn)生的c9-CLA[7-8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有顯著性差異，是由于成品牦牛乳酸奶生產(chǎn)過程中，現(xiàn)代加工工藝較為繁瑣，導(dǎo)致c9-CLA大量流失，使本身含量較少的c9-CLA變得更少[7-9]。在牧區(qū)傳統(tǒng)發(fā)酵工藝的牦牛乳酸奶中的c9-CLA含量較高，其含量在0.782～1.196 mg/mL，因?yàn)閭鹘y(tǒng)發(fā)酵加工工藝較為簡單，所以c9-CLA成分流失較少[7-9]。傳統(tǒng)發(fā)酵加工工藝對(duì)血清總膽固醇的影響還有待探究。

在其他的相關(guān)研究中只是對(duì)牦牛乳酸奶降低膽固醇含量作用的其中一項(xiàng)因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在本實(shí)驗(yàn)中是以綜合性角度進(jìn)行研究。牦牛乳酸奶作為一種食品（并非藥品），只能起到保健作用，所以導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不顯著。對(duì)于牦牛乳酸奶中其他的益生作用還有待于進(jìn)一步探究。本次試驗(yàn)結(jié)果對(duì)今后消費(fèi)者面對(duì)商家宣傳購買牦牛乳酸奶時(shí)可以起到一定的指導(dǎo)作用。