p75NTR對胃癌轉(zhuǎn)移的抑制機制研究

劉 郁，于 亮，段紹斌

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊830000)

p75NTR全稱神經(jīng)生長因子受體p75是由399個氨基酸組成的I 型細(xì)胞跨膜糖蛋白。朱曉婷,趙郁,王軼楠等人[1]認(rèn)為P75NTR在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元和免疫系統(tǒng)的中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞等廣泛的分布可通過免疫途徑對胃癌細(xì)胞的繁殖與擴散產(chǎn)生一定的抑制作用。雖然很多學(xué)者從不同角度論述了p75NTR對胃癌轉(zhuǎn)移有一定的抑制能力，但實驗數(shù)據(jù)的支撐還很不足，因此急需建立較大的數(shù)據(jù)庫，并利用統(tǒng)計學(xué)對這些數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。本文目的在于通過制備組織樣本和建立胃癌細(xì)胞系來研究p75NTR在胃癌組織中的表達(dá)以及其對胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制能力，探討p75NTR對胃癌轉(zhuǎn)移抑制的機制。

1 材料與方法

1.1材料

a.組織樣本：選取我院2015年至2016年收治的胃癌患者80例，將其分為兩組，其中一組為無轉(zhuǎn)移胃癌患者，另一組為有轉(zhuǎn)移胃癌患者，兩組患者均為40例。所有患者均經(jīng)病理診斷確診為無轉(zhuǎn)移胃癌和有轉(zhuǎn)移胃癌，每位患者各取一份病理組織。

b.胃癌細(xì)胞系：利用本院胃癌患者活檢組織進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)，獲得細(xì)胞系。

1.2主要試劑與儀器

a.SP試劑盒和DAB顯色試劑盒：北京中山公司；b.RPMI1640培養(yǎng)基：Invitrogen公司；c.ECL Western blot檢測試劑盒：Amersham公司；d.超凈工作臺：賽默飛世爾科技有限公司；e.CO2培養(yǎng)箱：上海喬躍電子科技有限公司；f.核酸蛋白檢測儀：上海嘉鵬科技有限公司；g.光學(xué)顯微鏡：Nikon；h.電轉(zhuǎn)移儀：Bio-Rad公司

1.3方法

首先進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)：取胃癌患者的活檢組織，剪碎后于RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，3 d傳代一次，隔天換液一次。其次制備組織標(biāo)本：取患者胃癌組織于福爾馬林溶液中保存48 h后取出，石蠟包埋，切片，HE染色，DAB顯色，染色評分[2]。最后進(jìn)行western blog檢測：利用Amersham公司的ECL Western blot檢測試劑盒對胃癌組織中的p75NTR的表達(dá)進(jìn)行檢測，計算其表達(dá)率。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1p75NTR在胃癌組織中的表達(dá)及胃癌組織的染色評分p75NTR在無轉(zhuǎn)移胃癌中的表達(dá)率為75%，染色評分為(1.25±0.32)；p75NTR在有轉(zhuǎn)移胃癌中的表達(dá)率為17.5%，染色評分為(0.51±0.11)，見表1、圖1。

表1 p75NTR在胃癌組織中的表達(dá)及胃癌組織的染色評分

由表1可知，發(fā)生轉(zhuǎn)移的胃癌組織中p75NTR表達(dá)率和染色評分均顯著低于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的胃癌組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2胃癌細(xì)胞是否轉(zhuǎn)染p75NTR的侵襲率和轉(zhuǎn)移率比較轉(zhuǎn)染p75NTR的胃癌細(xì)胞侵襲入細(xì)胞外基質(zhì)的侵襲率為13.5%，胃癌細(xì)胞的遷移率為23.6%；未轉(zhuǎn)染p75NTR的胃癌細(xì)胞侵襲入細(xì)胞外基質(zhì)的侵襲率為35.8%，胃癌細(xì)胞的遷移率為57.3%，見表2。

由表可知，轉(zhuǎn)染p75NTR的胃癌細(xì)胞侵襲入細(xì)胞外基質(zhì)的侵襲率和轉(zhuǎn)移率均顯著低于未轉(zhuǎn)染p75NTR的胃癌細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

a 癌旁組織；b和c 無轉(zhuǎn)移的胃癌原發(fā)灶；d 有轉(zhuǎn)移的胃癌原發(fā)灶；e 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶；f 陰性對照

表2 胃癌細(xì)胞是否轉(zhuǎn)染p75NTR的侵襲率和轉(zhuǎn)移率比較

3 討論

胃癌在發(fā)展到一定程度后就會發(fā)生轉(zhuǎn)移，在胃癌早期多數(shù)患者的癥狀不典型，而且胃癌病程較短，有相當(dāng)一部分胃癌病人在確診之時已有明顯的胃癌轉(zhuǎn)移癥狀，并很快出現(xiàn)惡病質(zhì)[3]。胃癌的轉(zhuǎn)移途徑有很多種，不同患者情況不同，胃癌的轉(zhuǎn)移途徑也會不一樣。肝臟和腹腔、左側(cè)鎖骨上淋巴結(jié)都是最多見的胃癌的轉(zhuǎn)移途徑，胃癌發(fā)生腹腔廣泛轉(zhuǎn)移可出現(xiàn)腹水，肝臟轉(zhuǎn)移時可出現(xiàn)肝腫大及相關(guān)的癥狀[4]。研究顯示，胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌轉(zhuǎn)移的重要途徑，而且發(fā)生較早。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移占胃癌轉(zhuǎn)移的70%，胃下部癌腫常轉(zhuǎn)移至幽門下、胃下及腹腔動脈旁等淋巴結(jié)，而上部癌腫常轉(zhuǎn)移至胰旁、賁門旁、胃上等淋巴結(jié)[5,6]。

近年來，越來越多的研究證實了，p75NTR對于部分腫瘤的發(fā)展有抑制作用，被認(rèn)為是一種潛在的腫瘤抑制劑[7]。相關(guān)報道稱，p75NTR對前列腺癌的生長和增殖有顯著的抑制作用；然而又有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，p75NTR對黑色素瘤細(xì)胞的腦轉(zhuǎn)移又有促進(jìn)作用[8,9]。兩項報道的結(jié)論之間存在著顯著的矛盾，這也提示我們p75NTR發(fā)揮的作用并不是固定的，而可能因環(huán)境與腫瘤的不同而發(fā)揮著不同的作用[10,11]。本文先通過western blot檢測了p75NTR在有轉(zhuǎn)移胃癌組織和無轉(zhuǎn)移胃癌組織中的表達(dá)，探討了p75NTR的表達(dá)與胃癌組織發(fā)生轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，又通過顯微鏡觀察了有無p75NTR存在的情況下，胃癌細(xì)胞侵襲入細(xì)胞外基質(zhì)的能力和其轉(zhuǎn)移運動能力[12]。結(jié)果顯示,p75NTR在無轉(zhuǎn)移胃癌中的表達(dá)率為75%，染色評分為1.25±0.32；p75NTR在有轉(zhuǎn)移胃癌中的表達(dá)率為17.5%，染色評分為0.51±0.11。轉(zhuǎn)染p75NTR的胃癌細(xì)胞侵襲入細(xì)胞外基質(zhì)的侵襲率為13.5%，胃癌細(xì)胞的遷移率為23.6%；未轉(zhuǎn)染p75NTR的胃癌細(xì)胞侵襲入細(xì)胞外基質(zhì)的侵襲率為35.8%，胃癌細(xì)胞的遷移率為57.3%。研究表明p75NTR通過一定的作用機制抑制了胃癌組織的轉(zhuǎn)移。

綜上,p75NTR在有轉(zhuǎn)移胃癌組織中的表達(dá)顯著低于無轉(zhuǎn)移胃癌組織，且能明顯抑制胃癌細(xì)胞的侵襲能力和轉(zhuǎn)移能力，對于臨床上利用靶向治療轉(zhuǎn)移胃癌有一定的參考意義。