山銀花提取物泡騰片的制備工藝及藥效學(xué)研究

梅世露，周 卿

(遵義醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院藥物分析教研室，貴州 遵義 563099)

山銀花味甘性寒，具有清熱解毒、疏風(fēng)散熱的功效，可用于緩解和治療感冒風(fēng)熱、發(fā)熱咽痛等疾病[1～3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用證實(shí)山銀花具有抗菌抗病毒、抗炎、解熱等作用[4]。輔以具有同樣功效的野菊花，可使療效倍增，但由于二者直接泡飲，口味苦澀，故本文研究將其制備成生物利用度高，服用攜帶方便的泡騰片制劑，并對(duì)山銀花提取物泡騰片的解熱、抑菌作用進(jìn)行藥效學(xué)研究，以期為山銀花的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器 單沖壓片機(jī)(上海順儀實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；噴霧干燥機(jī)XY-6000Y(上海析宇儀器有限公司)；RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；DHP-600BS型培養(yǎng)箱(上海楚定分析儀器有限公司)；WGZ-2XJ細(xì)菌濁度儀(海昕瑞儀器儀表有限公司)；SW-CJ-1CU潔凈工作臺(tái)(蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)。

1.2 試藥 碳酸氫鈉和酒石酸購自成都科龍化學(xué)試劑有限公司；聚乙二醇6000和聚乙烯吡咯烷酮K-30購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；綠原酸對(duì)照品購自上海源葉生物科技有限公司；脂多糖購自北京鼎過昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司；甲醇、乙腈為色譜純(德國迪瑪有限公司)；阿斯巴甜為食品級(jí)；阿司匹林購自西南藥業(yè)股份有限公司；實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

山銀花購自貴州省遵義市綏陽小關(guān)鄉(xiāng)山銀花種植基地；野菊花和甘草購自湖北金貴中藥飲片有限公司；藥材經(jīng)遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科楊建文主任中藥師鑒定為正品。

1.3 動(dòng)物和菌種 SD大鼠(SPF)，220～250 g，雌雄兼用，購自第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)為SCXK(渝)2017-0005；金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌，大腸埃希菌均由遵義醫(yī)學(xué)院微免實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4 方法

1.4.1 山銀花泡騰片的制備方法 將山銀花、野菊花與甘草按一定比例混合后，加入7倍量50%的乙醇溶液加熱回流2 h后，過濾，殘?jiān)偌尤?倍量50%的乙醇溶液加熱回流1 h，合并二次濾液，并減壓濃縮，濃縮液經(jīng)噴霧干燥后、過80目篩即得到山銀花提取物干粉。按處方量將山銀花提取物干粉、泡騰崩解劑、乳糖、阿斯巴甜混合攪拌均勻后，過80目篩，噴入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K-30的乙醇溶液制軟材，并于45 ℃烘箱中干燥后分別通過18目篩和80目篩進(jìn)行整粒，再加入聚乙二醇(PEG)6000，混合均勻后，壓片，即得山銀花提取物泡騰片。

1.4.2 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化山銀花泡騰片的制備工藝 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知影響山銀花泡騰片制備工藝的主要影響因素為：A:泡騰崩解劑用量；B：山銀花提取物干粉用量比；C：PVP K-30用量比；D：PEG 6000用量比，選用L9(43)表進(jìn)行正交試驗(yàn)，正交試驗(yàn)因素水平表見表1。

表1 泡騰片配方優(yōu)化正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

1.4.3 山銀花泡騰片藥效學(xué)考察

1.4.3.1 山銀花提取物泡騰片的解熱作用 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥：SD大鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，每日測量體溫1次，選取在造模前3 d體溫不超過38 ℃或2次體溫溫差不超過0.5 ℃的動(dòng)物作為模型用鼠。SD大鼠48只隨機(jī)分為 6組，即空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，阿司匹林對(duì)照組，山銀花提取物泡騰片高、中、低劑量組，每組8只?？瞻讓?duì)照組、模型對(duì)照組予生理鹽水灌胃；阿司匹林對(duì)照組按0.2 g/kg以生理鹽水制備的溶液灌胃；山銀花提取物泡騰片高、中、低劑量組分別按藥液中含綠原酸的量為47.44 g/kg、23.72 g/kg、11.86 g/kg(相當(dāng)于成人用藥劑量的20、10、5倍)灌胃。實(shí)驗(yàn)前各組大鼠禁食12 h，實(shí)驗(yàn)時(shí)按前述劑量分別給予各組大鼠灌胃，給藥1 h后，空白對(duì)照組腹腔注射滅菌氯化鈉溶液，其余各組大鼠分別腹腔注射LPS (100 μg/kg)，誘導(dǎo)動(dòng)物發(fā)熱。注射LPS后開始觀察大鼠體溫變化情況，每隔1 h測體溫1次。

1.4.3.2 山銀花提取物泡騰片的體外抑菌作用 采用倍比稀釋法測定山銀花泡騰片對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸埃希菌的最低抑菌濃度(MIC)。 取11支滅菌具塞試管編號(hào)后置于試管架上，于每支試管內(nèi)加入滅菌后的二次蒸餾水1 mL，然后在1號(hào)管內(nèi)加入滅菌后的山銀花提取物泡騰片溶液1 mL，充分混勻后取1 mL放入2號(hào)管內(nèi)，依次類推，直到第10號(hào)管取出1 mL棄去，配成含藥物成分分別為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024不同濃度的液體，第11號(hào)管不加藥液作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)菌種接種于MH 瓊脂培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)18～24 h，用滅菌后的生理鹽水稀釋至10-3濃度。分別取100 μL實(shí)驗(yàn)菌種菌液加于MH培養(yǎng)基平板上，用涂布棒將細(xì)菌涂勻，在平板上每個(gè)孔內(nèi)加入相應(yīng)編號(hào)的藥物溶液50 μL，37 ℃培養(yǎng)18～24 h后觀察菌種生長情況，測定最低抑菌濃度(MIC)。

2 結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果 以片劑外觀、硬度、崩解時(shí)限和口感進(jìn)行評(píng)價(jià)，片的外觀以光滑、無粉塵為好，口感以無酸澀味為好，評(píng)分值見表2。試驗(yàn)結(jié)果見表3。以崩解時(shí)限、口感為指標(biāo)進(jìn)行方差分析，用直觀分析結(jié)果結(jié)合片劑的外觀、片劑的硬度確定優(yōu)化的結(jié)果為A2B2C3D3，泡騰崩解劑中碳酸氫鈉與酒石酸比例為1∶1.6，用量占片重的40%；山銀花提取物干粉的用量為4.5%；PVP K-30用量為9%；PEG 6000用量為5%；阿斯巴甜1.5%；其余為乳糖。

表2 口感質(zhì)量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表3 泡騰片配方優(yōu)化正交試驗(yàn)結(jié)果

按正交實(shí)驗(yàn)所得的優(yōu)化處方制備3批山銀花提取物泡騰片，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明3批山銀花提取物泡騰片質(zhì)量符合要求，要求山銀花提取物泡騰片以綠原酸含量計(jì)，每片不少于2.0 mg，結(jié)果(見表4)。

2.2藥效學(xué)考察結(jié)果

2.2.1 山銀花提取物泡騰片的解熱作用 山銀花提取物泡騰片的高、中、低劑量組與模型組相比，均表現(xiàn)出明顯抑制體溫升高的作用(P<0.05，見表5)，說明該泡騰片對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠發(fā)熱模型有較好的解熱作用。

表4 山銀花提取物泡騰片含量測定結(jié)果(n=6)

表5 山銀花提取物泡騰片對(duì)LPS致大鼠發(fā)熱的影響

2.2.2 山銀花提取物泡騰片的體外抑菌作用 由表6結(jié)果顯示，山銀花提取物泡騰片對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌均有明顯的抑菌作用，其最低抑菌濃度(MIC)分別為3.575 mg/mL、1.788 mg/mL、14.300 mg/mL。

表6 山銀花提取物泡騰片對(duì)不同菌種的最低抑菌濃度(MIC)

3 討論

在山銀花提取物泡騰片的制備中，由于藥材提取物制成浸膏黏性大，直接制粒較困難，故將提取物藥液直接經(jīng)噴霧干燥后所得干粉用于片劑的制備，制備所得泡騰片表面光滑，且較好地解決了泡騰片劑易吸潮的問題。

在解熱實(shí)驗(yàn)中，模型組與空白對(duì)照組比較，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)溫度差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同時(shí)大鼠伴有寒顫、精神萎靡等癥狀，說明選取LPS劑量為100 μg/kg時(shí)可成功誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱[5-7]。山銀花提取物泡騰片高、中、低不同劑量組與模型組相比，低、中劑量組在1、2、4、5、6 h對(duì)發(fā)熱大鼠有明顯的抑制體溫升高作用(P<0.05)，高劑量組在2、5、6 h對(duì)發(fā)熱大鼠也有明顯的抑制體溫升高作用(P<0.05)，但降溫作用與劑量不呈依賴型，3個(gè)劑量組與阿司匹林組相比較解熱作用相當(dāng)，說明該泡騰片對(duì)LPS誘導(dǎo)的大鼠發(fā)熱模型有較好的抑制作用。

處方中山銀花、野菊花均具有天然抑菌的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明山銀花提取物泡騰片對(duì)咽痛常見致病菌金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌均有抑制作用，但對(duì)大腸埃希菌抑制作用不明顯，這與文獻(xiàn)[8-9]報(bào)道的山銀花對(duì)革蘭氏陽性菌的作用強(qiáng)于革蘭氏陰性菌的結(jié)果一致。

由此可見，由山銀花、野菊花、甘草經(jīng)現(xiàn)代制劑工藝所制備得山銀花提取物泡騰片，處方組成合理，制備方法簡便可行，質(zhì)量可控。經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該泡騰片具有較好的解熱、抑菌作用。