小柴胡湯不同煎煮方式對(duì)黃岑有效化學(xué)成分的影響

陳露露 林汝秀 李瑞明

摘要 目的：探析不同煎煮方式對(duì)小柴胡湯中黃岑有效化學(xué)成分的影響。方法：選取高效液相色譜法測(cè)定小柴胡湯用去滓再煎法與不去滓煎法2種煎煮后的黃岑有效化學(xué)成分（黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素）的含量。對(duì)照品溶液包括黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素，檢測(cè)開始前先進(jìn)行對(duì)照品溶液的線性關(guān)系考察及精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)。結(jié)果：黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素對(duì)照品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為Y=4 345 730.98X-8 888.11（r=0.999 8）、Y=2 478 268.68X911.05（r=0.999 5）、Y=771 988 9.74X2 449.03（r=0.999 9）。黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素對(duì)照品溶液的精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)與回收率試驗(yàn)的RSD均低于2%，平均回收率均高于95%。供試品溶液A中所測(cè)得的黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素含量分別為（0.364 2±0.027 1）g/L、（10.192 3±0.387 5）g/L、（18.082 2±0.746 5）μg/mL，高于供試品溶液B的（0.282 4±0.047 8）g/L、（8.215 0±0.354 1）g/L、（12.698 2±0.642 9）μg/mL（P<0.05）。結(jié)論：去滓再煎法較之傳統(tǒng)不去滓煎法更利于小柴胡湯中黃岑有效化學(xué)成分黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素的溶出。

關(guān)鍵詞 小柴胡湯;煎煮;方式;黃岑;有效;化學(xué)成分

Effects of Different Decoction Methods of Xiaochaihu Decoction on Active

Chemical Constituents of Scutellaria Baicalensis Georgi

Chen Lulu1， Lin Ruxiu1， Li Ruiming2

（1 Department of Pharmacy， Nanfang Hospital of Southern Medical University， Guangzhou 510515， China;

2 Department of Pharmacy， Seventh Affiliated Hospital of Zhongshan University， Shenzhen 518107， China）

Abstract Objective：To study the effects of different decoction methods on the effective chemical composition of Scutellaria baicalensis Georgi in Xiaochaihu Decoction. Methods：The contents of effective chemical composition （Baicalin， Baicalein， Wogonin） in Xiaochaihu decoction boiled by deslagging and non-deslagging and then decocting were determined by high performance liquid chromatography. The comparison solution included the Baicalin， Baicalein and Wogonin. The linear relationship of the comparison solution and the precision test， the stability test and the recovery rate test were carried out before the start of the test. Results：The standard curve equation of Baicalin， Baicalein and Wogonin comparison solution were Y=4 345 730.98X888 8.11 （r=0.999 8）， Y=247 826 8.68X911.05 （r=0.999 5） and Y=771 988 9.74X244 9.03 （r=0.999 9）. The RSD of Baicalin， Baicalein， Wogonin reference solution in the precision test， stability test and the recovery test were all lower than 2% and the average recoveries were all higher than 95%. The contents of Baicalin， Baicalein and Wogonin in test solution A were （0.364 2±0.027 1）mg/mL， （10.192 3±0.387 5）mg/mL and （18.082 2±0.746 5）μg/mL， which were higher than （0.282 4±0.047 8）mg/mL， （8.215 0±0.354 1）mg/mL and （12.698 2±0.642 9）μg/mL in test solution B （P<0.05）. Conclusion：The deslagging and then decocting were more beneficial to the dissolution of Baicalin， Baicalein， Wogonin in Xiaochaihu decoction compared to the non-deslagging and then decocting.

Key Words Xiaochaihu decoction; Decoction method; Scutellaria baicalensis Georgi; Effective chemical composition

中圖分類號(hào)：R289.5;R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.03.050

小柴胡湯為臨床經(jīng)典方劑，在各種發(fā)熱性疾病的治療中應(yīng)用廣泛?！叭プ以偌濉笔撬幬锏囊环N特殊煎煮方式，即于藥物煎煮一定時(shí)間后將藥渣濾去再次煎煮使藥液濃縮。有中醫(yī)研究認(rèn)為，去滓再煎可使藥液濃縮，減少藥液量，減輕患者胃腸負(fù)擔(dān);另外藥汁再煎后藥液濃度大，適用于水液運(yùn)化、轉(zhuǎn)輸障礙的患者[1]。已有研究顯示，去滓再煎法在半夏瀉心湯、小柴胡湯等方劑中較為多用，且以上湯方均為臨床常用方劑[2]。但有專家提出[3-4]，煎煮方式、藥物配伍比例、炮制等因素均會(huì)對(duì)中藥方劑中有效成分的溶出造成影響，但有關(guān)去滓再煎、不去滓再煎后有效成分含量變化的研究較少，故本研究采用高效液相色譜法測(cè)定小柴胡湯用去滓再煎法與不去滓煎法2種煎煮后的黃岑有效化學(xué)成分黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素的含量，以探析不同煎煮方式對(duì)小柴胡湯中黃岑有效化學(xué)成分的影響，以期為臨床中藥煎煮方式的合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（型號(hào)LC-20AT，購(gòu)自日本島津公司）;分析天平（型號(hào)AEL-200，購(gòu)自湘儀天平儀器廠）;超聲波清洗器（型號(hào)KQ3200E，購(gòu)自昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑

黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素對(duì)照品;甲醇（購(gòu)自北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司，純度≥98%）作為對(duì)照品。

1.3 分析樣品

小柴胡湯配方：生柴胡120 g，黃芩（枯芩）、人參、生姜、半夏、大棗各45 g，甘草30 g。組方中所涉及藥材均購(gòu)自同仁堂藥店。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱溫6 ℃，流動(dòng)相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫（5%～12% A，0～5 min;12%～24% A，5～15 min;24%～27% A，15～20 min;27% A，20～30 min;27%～70% A，20～30 min;70%～100% A，40～50 min;100%～5% A，50～55 min），流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，黃芩苷檢測(cè)波長(zhǎng)在200～400 nm之間掃描，最終供試品在278 nm處有吸收峰而對(duì)照品溶液無(wú)，確定在278 nm處測(cè)定波長(zhǎng)。按照以上色譜條件將不同梯度濃度的對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值。并以對(duì)照品A、B、C的進(jìn)樣量作為衡坐標(biāo)（X）、峰面積值作為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素，置于量瓶中，加甲醇（購(gòu)自天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到對(duì)照品溶液A、B、C。取20 μL甲醇作為空白溶劑，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，證實(shí)空白試劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)影響后開始測(cè)定。

2.3 供試品溶液的制備

分別用2種方法煎煮小柴胡湯：去滓再煎法：按組方劑量稱量藥材，稱量誤差需控制在±0.01 g。稱好后將藥材置于5 L的容器中，加入2 400 mL超純水浸泡0.5 h。后大火煎煮，水沸后調(diào)至小火維持微沸狀態(tài)，至藥汁濃縮為1 200 mL時(shí)關(guān)火，將藥渣濾去，微沸狀態(tài)下繼續(xù)煎煮藥汁至600 mL，再次關(guān)火。得到供試品溶液A。不去滓煎法：按組方劑量稱量藥材，稱好后將藥材置于5 L的容器中，加入2 400 mL超純水浸泡0.5 h。大火煎煮至水沸，調(diào)至小火維持微沸狀態(tài)，至藥汁濃縮為600 mL，關(guān)火。得到供試品溶液B。

2.4 專屬性試驗(yàn)

取甲醇20 μL為空白對(duì)照試劑，加入液相色譜儀內(nèi)，在2.1色譜條件下測(cè)定，顯示空白溶劑<5 min出峰且較小，無(wú)干擾，另取混合對(duì)照組溶液、供試品溶液C 20 μL注入液相色譜儀，2.1色譜條件下測(cè)定，顯示有效成分和相鄰峰分離均>1.5。

2.5 線性關(guān)系考察

取對(duì)照品溶液A、B、C，3種溶液均平均分為6份，分別稀釋為6個(gè)梯度濃度。見表1。

表1 3種對(duì)照品溶液的線性回歸方程

2.6 中間精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液A、B、C各6份，測(cè)定278 nm處的吸收度，計(jì)算精密度試驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD），結(jié)果精密度試驗(yàn)RSD低于2%。見表2。

表2 中間精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.7 對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

再次精密量取對(duì)照品溶液A、B、C各6份，分別于0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h、3.0 h時(shí)測(cè)定278 nm處的吸收度，計(jì)算穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD。結(jié)果：穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD低于2%。見表3。

表3 對(duì)照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.8 回收率試驗(yàn)

精密量取6份供試品溶液B，每份9 mL，分別置于10 mL的量瓶中，然后加入1 mL的對(duì)照品溶液A、B、C各2份進(jìn)行超聲混合。之后加入甲醇至刻度線進(jìn)行定容。按照2.3中色譜條件分別進(jìn)樣，計(jì)算黃岑苷的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）。結(jié)果：回收率試驗(yàn)RSD低于2，平均回收率高于95%。見表4。

表4 回收率試驗(yàn)

2.9 樣品測(cè)定結(jié)果

分別取供試品溶液A、B各6份，按2.3中色譜條件每次進(jìn)樣20 μL測(cè)定樣品中黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素的含量。應(yīng)用SPSS 19.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用（±s）表示，比較采取獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。供試品溶液A中所測(cè)得的黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素含量均高于供試品溶液B（P<0.05）。見表5。

表5 2種煎煮方法的黃岑有效化學(xué)成分含量比較

（±s，n=6）

3 討論

目前，黃岑藥材內(nèi)主要主要化學(xué)成分的測(cè)量方法有電化學(xué)法、分光光度法、高效液相色譜法等。其中電化學(xué)法、分光光度法檢測(cè)的選擇性差，含量的測(cè)定結(jié)果易受雜質(zhì)的干擾，為提高研究結(jié)果的精度，故本研究選擇高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。

黃岑的主要成分為黃酮類，包括黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素等。有藥理學(xué)研究顯示[5-6]，黃岑苷具有消炎、抗菌等作用;黃岑素可抗菌、利尿并抗變態(tài)反應(yīng);漢黃岑素可利尿、解痙，故本研究選擇黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素作為對(duì)照品。液相色譜法測(cè)定過(guò)程中，為防止色譜柱出現(xiàn)堵塞導(dǎo)致柱壓升高，研究中的對(duì)照品溶液及供試品溶液均經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)后進(jìn)樣。另外，臨床以往多于黃酮類成分顯色后在510 nm處測(cè)定其含量[7]，但本研究中的供試品溶液A與B在510 nm處均未見吸收，推測(cè)與本研究中的供試品溶液中成分復(fù)雜有關(guān)。經(jīng)多次試驗(yàn)，最終在278 nm處進(jìn)行測(cè)定，且效果滿意。結(jié)果顯示黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素對(duì)照品溶液均具有良好的線性關(guān)系，精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)與回收率試驗(yàn)結(jié)果也表明，RSD均在2%以上，平均回收率均達(dá)95%以上，故本研究的科學(xué)性與準(zhǔn)確性基本滿意。

中藥的藥療是多組分的協(xié)同作用這一觀點(diǎn)已基本達(dá)成共識(shí)[8]。有研究稱，小柴胡湯為復(fù)方制劑，不同成分之間會(huì)相互影響[9]。有研究認(rèn)為，小柴胡湯中的柴胡、人參等藥材中含蛋白、皂苷等表面活性物質(zhì)，可促使黃酮類成分進(jìn)入蛋白、皂苷等“膠團(tuán)”中而使黃岑主要成分的溶解度獲得提高[10]。也有專家指出，人參與柴胡的極性較大，皂化能力強(qiáng)，因而黃岑與柴胡及人參等中藥材配伍后溶出效果更佳，有利于提高方劑療效[12]。有研究提出，中藥方劑在相同配伍的前提下，煎煮方式對(duì)有效成分的溶出也會(huì)造成不同影響[13]。全方水煎煮是中藥方劑中藥材的傳統(tǒng)提取方法，隨著單味配方顆粒及根據(jù)藥味“有效成分”理化性質(zhì)確定提取方法等新觀點(diǎn)的提出[14-16]，中藥復(fù)方制劑的提取方法也逐漸發(fā)生變化。在此現(xiàn)狀下明確不同提取工藝對(duì)中藥方劑療效的影響非常重要。由于不去滓煎法是臨床最常見的中藥煎煮方式，故本研究設(shè)置了去滓煎法與不去滓煎法的2種供試品溶液。結(jié)果顯示，供試品溶液A中所測(cè)得的黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素含量均高于供試品溶液B，證實(shí)小柴胡湯采取去滓煎法更利于黃岑主要化學(xué)成分的溶出，從而發(fā)揮該方劑的藥理學(xué)作用[17-18]。姜俠等[19]的研究也證實(shí)，不去滓煎法所測(cè)得的黃岑苷含量低于去滓再煎法，與本研究結(jié)論一致，但2組煎煮方法導(dǎo)致黃岑主要有效化學(xué)成分含量差異的具體原因尚不明確。有研究在探討煎藥器具、煎藥時(shí)間及火候等因素對(duì)中藥方劑主要成分的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，煎藥時(shí)間的影響系數(shù)最大[20]。而不去滓煎法與去滓再煎法的煎藥時(shí)間理論上會(huì)存在差異，推測(cè)可能是造成黃岑有效化學(xué)成分含量差異的因素之一，有待進(jìn)一步深入研究。另外，本研究仍存在一定局限性，如尚未觀察其他藥材化學(xué)有效成分含量的變化，因此本研究雖初步認(rèn)為去滓再煎法可提高黃岑類成分的溶出，但方中皂苷類等成分的變化還需完善研究。

綜上所述，小柴胡湯采取去滓再煎法更利于黃岑有效化學(xué)成分黃岑苷、黃岑素、漢黃岑素的溶出。

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