• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    鴨兒芹的化學(xué)成分及對(duì)Hep G2細(xì)胞毒性

    2018-09-10 09:45:17劉安韜張婷梁杏梅
    廣西植物 2018年4期
    關(guān)鍵詞:化合物

    劉安韜 張婷 梁杏梅

    摘 要:該研究采用大孔樹脂(D101)、硅膠、羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20)和十八烷基硅烷鍵合硅膠 (ODS)等色譜方法,對(duì)鴨兒芹的化學(xué)成分進(jìn)行了分離純化,根據(jù)理化性質(zhì)、質(zhì)譜和核磁共振波譜數(shù)據(jù),并參考相關(guān)文獻(xiàn)綜合分析化合物結(jié)構(gòu),進(jìn)而采用噻唑藍(lán)(MTT)法,對(duì)鴨兒芹化合物抗Hep G2細(xì)胞活性進(jìn)行篩選。結(jié)果表明:共從鴨兒芹中分離鑒定了7個(gè)化合物,分別為p-(acetylamino)phenol(1),辛酸甲酯(2),丁酸異戊酯(3),N,N-二甲基-苯并咪唑-2胺(4),5-羥基-1-(4-羥基-3-甲氧苯基)庚3酮(5),3,5二丁基六氫吡咯里嗪(6),(S)-4-(1-hydroxyallyl)phenyl acetate(7)。其中,化合物6對(duì)細(xì)胞具有抑制作用,抑制率達(dá)到89.1%。該研究結(jié)果表明化合物1-7均為首次從鴨兒芹中分離得到,其中化合物6對(duì)Hep G2細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用,且具有劑量依賴性。

    關(guān)鍵詞:鴨兒芹, 化合物, 抗腫瘤活性

    中圖分類號(hào):Q946

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1000-3142(2018)04-0469-06

    Abstract:Chemical constituents of Cryptotaenia japonica were separated and purified by macroporous resin D101, silica gel chromatography, Sephadex LH-20 and octadecylisilyl(ODS). Component structures were identified by physical and chemical properties, using spectral analysis included MS and NMR. MTT method was used to evaluate anti-tumor activities of chemical components. The results were as follows:Seven constituents were obtained from C. japonica. The structures were identified as p-(acetylamino)phenol(1), methyl caprylate(2),isopentyl butyrate(3), N,N-dimethyl-1H-benzo [d]imidazol-2-amine(4),5-hydroxy-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)heptan-3-one(5),(3R*,5S*,7aR)-3,5-dibutylhexahydro-1H-pyrrolizine(6), (S)-4-(1-hydroxy-allyl)phenyl acetate(7). Componds 1-7 were obtained for the first time from C. japonic. Component 6 showed significant inhibitory effect against Hep G2 with the inhibition ratio 89.1% and had dose-dependent effect.

    Key words:Cryptotaenia japonica, compond, anti-tumor activity

    鴨兒芹(Cryptotaenia japonica)為傘形科植物鴨兒芹的全草,又名三葉芹、鴨腳板草、野芹菜等。在全國(guó)各地均有廣泛的分布(中國(guó)科學(xué)院植物研究所,1985)。鴨兒芹具有消炎解毒、活血消腫的功效,主治肺炎、肺膿腫、淋病、感冒咳嗽、跌打損傷,外用治皮膚瘙癢等病癥(江蘇新醫(yī)學(xué)院,1977)。鴨兒芹中含有黃酮類化合物(李長(zhǎng)生等,2006;李勝華和牛友芽,2012)和揮發(fā)油類成分(江豐等,2006),揮發(fā)性萜類化合物,占總揮發(fā)性成分的82.37%(瞿萬云等,2003)。鴨兒芹提取物有著較廣泛的藥理活性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其具有清咽(高敏等,2005),保肝降酶等作用(田琳和龔其海,2008;李娟等,2012)。

    本研究運(yùn)用大孔樹脂(D101),硅膠,羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20),十八烷基硅烷鍵合硅膠 (ODS)等色譜方法,對(duì)鴨兒芹的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化,從中分離鑒定了7個(gè)化合物,分別為p-(acetylamino)phenol(1),辛酸甲酯(2),丁酸異戊酯(3),N,N-二甲基-苯并咪唑-2胺(4),5-羥基-1-(4-羥基-3-甲氧苯基)庚3酮(5),3,5二丁基六氫吡咯里嗪(6),(S)-4-(1-hydroxyallyl)phenyl acetate(7)?;衔?-7均為首次從鴨兒芹中分離得到,進(jìn)而采用四氯唑鹽還原(MTT)法,對(duì)鴨兒芹的化合物抗Hep G2細(xì)胞活性進(jìn)行篩選,化合物6對(duì)細(xì)胞具有抑制作用,且具有劑量依賴性。

    1 材料與方法

    1.1 儀器和材料

    R3型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪有限公司),AV-400 型核磁共振光譜儀(德國(guó) Bruker公司),1100 Series LC/MSD Trap質(zhì)譜儀(美國(guó)Agilent 公司),XR6A型顯微熔點(diǎn)儀(上海光學(xué)儀器一廠),Sephadex LH-20(美國(guó)Pharmacia公司),薄層色譜硅膠預(yù)涂板(青島裕民源硅膠試劑廠),ODS(80Bin,YMC,日本Merck公司),柱色譜硅膠(80~100,300~400目,青島裕民源硅膠試劑廠),MR-96A型酶標(biāo)儀(深圳邁瑞公司),CJ-1F型醫(yī)用凈化工作臺(tái)(蘇州馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司),3111 型CO2培養(yǎng)箱(美國(guó)熱電(賽默飛世爾)公司),臺(tái)式離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司),DMIL倒置顯微鏡(德國(guó) Leica)。

    人肝癌細(xì)胞株Hep G2,購自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。

    培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板購自Corning公司。噻唑藍(lán)(3- [4,5-dimethylthiazol-2yl]-2,5-diphenyltetrazoliumbromide, MTT)、二甲基亞砜(DMSO)購自Sigma公司;青霉素、 鏈霉素購自Invitrogen公司,DMEM 培養(yǎng)基購自GIBCO公司,胎牛血清購自 Hyclone 公司。鴨兒芹植物樣本于2014年3月至2015年5月采自廣西桂林雁山區(qū),經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)廖月葵高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為傘形科植物鴨兒芹(Cryptotaenia japonica)。

    1.2 方法

    1.2.1 提取和分離 首先取鴨兒芹干燥藥材粗粉約5 kg,60%乙醇加熱回流提取3次,每次3 h,過濾合并提取液,濃縮,回收乙醇獲得浸膏980 g。然后浸膏混懸于水溶液中分別用石油醚,氯仿,醋酸乙酯,正丁醇進(jìn)行萃取,回收溶劑得到石油醚部分浸膏29.44 g,氯仿部分浸膏48.6 g、乙酸乙酯部分浸膏57.9g、正丁醇部分浸膏230 g。最后水溶液部位過大孔樹脂D101,用水洗脫后,用95%乙醇洗脫,洗脫液減壓回收乙醇,真空干燥,獲得水溶性部分浸膏約535.5 g。

    正丁醇部分經(jīng)硅膠柱色譜分離,氯仿-甲醇(9∶1、8∶2)甲醇-乙酸乙酯(14∶1、12∶1)洗脫,共分得7個(gè)部分,各部分繼續(xù)用氯仿-甲醇為流動(dòng)相硅膠柱色譜分離,經(jīng)反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜、ODS柱色譜分離純化得到化合物1(43.1 mg)。

    乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠柱色譜分離,氯仿-乙酸乙酯(50∶1、10∶1、1∶1),氯仿-甲醇(10∶1、1∶1)乙酸乙酯-甲醇(1∶5、1∶1)洗脫,共分成8個(gè)部分,其中1~5部分經(jīng)反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜,ODS柱色譜分離純化得到化合物2(50 mg)、化合物3(17.5 mg)、化合物4(95 mg)、化合物5(51 mg)、化合物6(61.8 mg)、化合物7(9 mg)。

    1.2.2 抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn) 細(xì)胞株用含10% 胎牛血清、100 U·mL-1青霉素和鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基,于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),2~3 d換一次液, 用0.25%胰蛋白酶消化傳代。在Leica顯微鏡下觀察加藥前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。

    取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞,制成 2×104~3×104個(gè)·mL-1單細(xì)胞懸液,接種于 96 孔板,每孔200 μL,每組設(shè)3個(gè)平行孔,37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h 后分別加入不同濃度的樣品。另設(shè)陰性對(duì)照組,繼續(xù)培養(yǎng)72 h。實(shí)驗(yàn)終止前4 h,每孔加入濃度為1 mg·mL-1的MTT 50 μL, 4~6 h后,棄去培養(yǎng)液,每孔加DMSO 100 μL,震蕩5 min,待結(jié)晶溶解后用酶標(biāo)儀于570 nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值。按公式計(jì)算腫瘤細(xì)胞抑制率:抑制率(Inhibitory Rate,IR%)=(1-實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值)×100%,用SPSS 18.0,計(jì)算抑制50%細(xì)胞生長(zhǎng)的樣品濃度,以IC50表示。

    2 結(jié)構(gòu)鑒定與抗腫瘤活性測(cè)試

    2.1 結(jié)構(gòu)鑒定 圖1

    化合物1 白色結(jié)晶。FAB-MS m/z:167.16,分子式為C8H9NO3。1H-NMR (600 MHz,CD3OD) δ:3.68 (3H, s,-OCH3),7.38(2H,dd,J=7.5,1.5Hz,H-3,5),6.73(2H,dd,H-2,4),9.97(1H,s,H-NH),9.94(1H,s,-OH)。13C-NMR (600MHz,CD3OD) δ:172.87(C=O),131.4(C- 4),116.70 (C-2,C-4),124.54 (C-3,C-5),154.8(C-5),23.84(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與Lewis et al(2003)報(bào)道一致,推斷化合物1為p-(acetylamino)phenol。

    化合物2 白色脂肪狀。FAB-MS m/z:15813,分子式為C9H18O2。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:0.88(3H,d,J=8.0Hz,H-1),1.26(2H,dd,J=7.1,8.0Hz,H-2),1.26(2H,s,J=7.1Hz,H-3),1.26(2H,dd,J=7.1Hz,H-4),1.33(1H,s,J=7.1Hz,H-5),1.66(2H,s,H-6),2.32(2H,dd,H-7),3.61(3H,s,H-OCH3)。13C-NMR (600 MHz,CD3OD)δ:13.28(C-1),22.39(C-2),31.7(C-3),28.82(C-4,5),24.67(C-6),33.61(C-7),78.05(C-8),50.94(C-OCH3),174.4(C=O)。以上數(shù)據(jù)與Chinta et al(2016)報(bào)道一致,推斷化合物2為辛酸甲酯。

    化合物3 淡黃色粉末。FAB-MS m/z:158.13,分子式為C9H18O2。1H-NMR (600 MHz,CD3OD) δ:0.99(3H,d,J=8.0Hz,H-1),0.97(6H,d,J=8.0Hz,H-8,9),4.13(2H,d,J=7.1Hz,H-3),2.32(1H,d,J=7.1Hz,H-5),1.81(1H,m,H-7),1.68(2H,m,H-2),1.52(2H,m,H-6)。13C-NMR (600MHz,CD3OD)δ:13.09(C-1),28.81(C-8,C-9),22.32(C-2),33.66(C-5),31.64(C-3),24.7(C-7),176.71(C-4),115.58(C-6),175.0(C=O)。以上數(shù)據(jù)推斷,故鑒定化合物3為丁酸異戊酯。

    化合物4 淡黃色粉末。FAB-MS m/z:161.1,分子式為C9H11N3。1H-NMR(600 MHz,CD3OD) δ:12.40(1H,s,J=8.0Hz,H-2),3.06(6H,s,H-CH3),7.12(4H,d,J=7.5,1.5Hz,H-4,5,6,7)。13C-NMR (600MHz,CD3OD)δ:170.13(C-2),153.28 (C-4a),130.27(C-7a),122.1(C-6),122.4(C-7),114.84(C-4),22.12(C-CH3),22.12(C-CH3)。以上數(shù)據(jù)與Benassi et al(2010)報(bào)道一致,鑒定化合物4為N,N-二甲基-苯并咪唑-2胺。

    化合物5 淡黃色油滴。FAB-MS m/z:252.14,分子式為C14H20O4。1H-NMR(600 MHz,CD3OD) δ:9.96(1H,s,J=8.0Hz,H-4′-OH),6.77(1H,s,H-5-OH),6.59(1H,d,J=8.5Hz,H-6′),6.64(2,dd,J=8.5,1.5Hz,H-5′),6.78(1H,d,J=1.5Hz,H-2′),3.72(1H,m,J=7.0Hz,H-5),3.77(3H,s,H-3′-OCH3),2.80(2H,d,H-2),2.71(2H,m,H-4),2.78(2H,d,H-1),1.46(2H,m,H-6),0.89(3H,d,H-7)。13C-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:28.96(C-1),31.87(C-2),178.44(C-3),33.88(C-4),73.32(C-5),29.56(C-6),14.12(C-7),133.09(C-1′),113.21(C-2′),150.50(C-3′),171.33(C-4′),116.46(C-5′),121.98(C-6′),37.26(C-OCH3)。 從以上數(shù)據(jù)推斷, 故鑒定化合物5為5-羥基-1-(4-羥基-3-甲氧苯基)庚3酮。

    化合物6 淡黃色粉末。FAB-MS m/z:224.23,分子式為C15H29N。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:2.25(2H,m,J=8.0Hz,H-3,5),2.25(1H,m,H-8),1.66(4H,m,H-1,2,6,7),1.41(4H,m,H-1,2,6,7),1.31(4H,m,H-9,9′),1.25(4H,m,H-10,10′),1.31(4H,m,H-11,11′),0.88(6H,m,H-12,12′)。13C-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:29.07(C-1,7),29.25(C-2,6),31.94(C-3,5),33.94(C-8),29.60(C-9,9′),29.69(C-10,10′),24.70(C-11,11′),22.7(C-12,12′),14.13(C-13,13′)。從以上數(shù)據(jù)推斷,故鑒定化合物6為(3R,5S,7ar)-3,5-dibutylhexahydro-1H-pyrrolizine(3,5二丁基六氫吡咯里嗪)。

    化合物7 淡白色結(jié)晶。FAB-MS m/z:192.08,分子式為C11H12O3。1H-NMR(600 MHz,CD3OD)δ:5.12(1H,s,J=8.0Hz,H-7-OH),7.21(2H,d,J=8.2Hz H-2,6),7.28(2H,d,J=8.2 Hz H-3,5),5.56(1H,d,H-7),2.31(3H,s,H-CH3),6.30(1H,d,J=12.2Hz,H-8),5.00(1H,d,J=12.2Hz ,H-9),4.99(1H,m,H-9)。13C-NMR(600MHz,CD3OD)δ:121.97(C-1),78.10(C-2,6),78.10(C-3,5),114.82(C-4),77.58(C-7),114.82 (C-8),77.84(C-9),169.95(C-CO),22.2(C-CH3),以上數(shù)據(jù)推斷,故鑒定化合物7為(S)-4-(1-hydroxyallyl)phenyl acetate。

    2.2 抗腫瘤活性測(cè)試

    細(xì)胞藥理篩選結(jié)果(表1)表明,在7個(gè)化合物中,其中化合物6對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用, 抑制率達(dá)到89.1%,可以使Hep G2細(xì)胞皺縮變圓,細(xì)胞密度明顯降低,細(xì)胞碎片增多,部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡樣變,并且具有劑量依賴性。IC50濃度為(52.31±4.77)μg·mL-1,在得到的所有化合物中對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用最為明顯。

    3 討論與結(jié)論

    通過對(duì)鴨兒芹化學(xué)成分進(jìn)行提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定,確證7個(gè)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu),均為首次從鴨兒芹植物中分離得到的?;衔?對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用,抑制率達(dá)到89.1%,可以使Hep G2 細(xì)胞皺縮變圓,細(xì)胞密度明顯降低,細(xì)胞碎片增多,部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡樣變,并且具有劑量依賴性。 IC50濃度為(52.31±4.77)μg·mL-1,在得到的所有化合物中對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用最為明顯。

    化合物6為雙吡咯分子的雜環(huán)化合物,該類結(jié)構(gòu)(顏文革和張守芳,2000)首先發(fā)現(xiàn)于吡咯里西啶生物堿分子中,該類化合物在新藥開發(fā)上是一個(gè)相當(dāng)活躍的研究領(lǐng)域,相信化合物6為先導(dǎo)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化和修飾,可能發(fā)現(xiàn)新的具有抗癌作用的藥物。

    參考文獻(xiàn):

    BENASSI R, GRANDI R, PAGNONI UM, et al, 2010. Study of the effect of N-protonation and N-methylation on the 1H and 13C chemical shifts of the six-membered ring in benzazoles and 2-substituted N, N-dimethylamino derivatives [J]. Magn Reson Chem, 24(5):415-420.

    CHINTA SP, GOLLER S, UHL G, et al, 2016. Identification and synthesis of branched wax type esters, novel surface lipids from the spider Argyrodes elevatus (Araneae:Theridiidae) [J]. Chem Biodivers, 13(9):1202-1220.

    GAO M, LIU J, WANG Y, et al, 2005. The effect on the throat-clearing function and wistar rats weight and biochemistry indexes of the Crytotaenia japonica [J]. J Prev Med Inf, 21(3):375-376. [高敏, 劉佳, 王雨, 等, 2005. 鴨兒芹的清咽功能及對(duì)大鼠體重和生化指標(biāo)的影響 [J]. 預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志, 21(3):375-376.]

    Institute of Botany, the Chinese Academy of Sciences, 1985. Chinese higher plant illustrations(Ⅱ) [M]. Beijing:Science Press:406. [中國(guó)科學(xué)院植物研究所, 1985. 中國(guó)高等植物圖鑒(第二冊(cè)) [M]. 北京:科學(xué)出版社:406.

    JIANG F, FENG LH, LAI XP, 2006. To optimize the preparation technology of oil in Crytotaenia japonica by orthogonal test [J]. Jiangxi Med J, 41(7):509-510. [江豐, 馮麗華, 賴小平, 2006. 正交試驗(yàn)法優(yōu)選鴨兒芹揮發(fā)油的提取工藝 [J]. 江西醫(yī)藥, 41(7):509-510.

    Jiangsu New Medical College, 1977. The dictionary of Chinese herbal medicine [M]. Shanghai:Shanghai Science and Technology Press:1842-1843. [江蘇新醫(yī)學(xué)院, 1977. 中藥大辭典(下冊(cè)) [M]. 上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社:1842-1843.]

    LEWIS EA, ADAMEK TL, VINING LC, et al, 2003. Metabolites of a blocked chloramphenicol producer [J]. J Nat Prod, 66(1):62-66.

    LI CS, ZHU D, DENG J, et al, 2006. Study on the extraction technology and determination of flavonoids in Crytotaenia japonica [J]. Food Sci, 27(11):357-360. [李長(zhǎng)生, 朱篤, 鄧娟, 等, 2006. 鴨兒芹總黃酮提取及含量測(cè)定研究 [J]. 食品科學(xué), 27(11):357-360.]

    LI J, XIE YC, JIANG XH, et al, 2012. Hepatoprotective effect and antioxidant activity of Cryptotaenia japonica extracts [J]. Highl Sciencepap Onl, 5(23):2264-2267. [李娟, 謝運(yùn)昌, 蔣小華, 等, 2012. 鴨兒芹提取物抗氧化和保肝作用研究 [J]. 中國(guó)科技論文在線精品論文, 5(23):2264-2267.]

    LI SH, NIU YY, 2012. Study on chemical constituents in Cryptotaenia japonica[J]. Chin Trad Herb Drugs, 43(12):2365-2368 [李勝華, 牛友芽, 2012. 鴨兒芹的化學(xué)成分研究 [J]. 中草藥, 43(12):2365-2368.]

    QU WY, YANG CH, YU AN, et al, 2003. Study of the volatile chemical constituents of Cryptotaenia japonica Hassk [J]. Fine Chem, 20(7) :416-418. [瞿萬云, 楊春海, 余愛農(nóng), 等, 2003. 鴨兒芹揮發(fā)性化學(xué)成分的研究 [J]. 精細(xì)化工, 20(7):416-418.]

    TIAN L, GONG QH, 2008. Protective effect of total flavonoids from Cryptotaenia japonica Hassk on CCl4-induced acute liver injury in mice [J]. Acta Acad Med Zunyi, 31(1):8-10. [田琳, 龔其海, 2008. 鴨兒芹總黃酮對(duì)四氯化碳致急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用 [J]. 遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 31(1):8-10.]

    YAN WG, ZHANG SF, 2000. The survey of studies on the pyrrolizinone derivatives [J]. Chin J Med Chem, 10(1):71-74. [顏文革, 張守芳, 2000. 吡咯里嗪化合物的藥用研究概況 [J]. 中國(guó)藥物化學(xué)雜志, 10(1):71-74.]

    猜你喜歡
    化合物
    “碳及其化合物”考點(diǎn)知多少
    碳及其化合物題型點(diǎn)擊
    碳及其化合物題型點(diǎn)擊
    MS-DAIL聯(lián)合MS-FINDER鑒定中藥黃酮類化合物
    例析高考中的鐵及其化合物
    例談氯及其化合物的學(xué)習(xí)與考查
    釩及其化合物在高考中的考查
    反柄紫芝中的二個(gè)新化合物
    Modeled response of talik development under thermokarst lakes to permafrost thickness on the Qinghai-Tibet Plateau
    新型三氮烯類化合物的合成與表征
    午夜久久久在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲av男天堂| 久久国产精品人妻蜜桃| 丝袜喷水一区| 高潮久久久久久久久久久不卡| av又黄又爽大尺度在线免费看| 色婷婷av一区二区三区视频| 夫妻午夜视频| 男男h啪啪无遮挡| 精品久久久精品久久久| 国产精品久久久久成人av| 亚洲欧美一区二区三区久久| 搡老乐熟女国产| 国产精品三级大全| 欧美日韩视频精品一区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 丝袜美腿诱惑在线| 成年人午夜在线观看视频| 久久ye,这里只有精品| 国产免费福利视频在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| av福利片在线| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 大话2 男鬼变身卡| 美女视频免费永久观看网站| 一级黄片播放器| 2021少妇久久久久久久久久久| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久久久视频综合| 成年女人毛片免费观看观看9 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| bbb黄色大片| 国产成人免费观看mmmm| 日本色播在线视频| 制服诱惑二区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| a级毛片黄视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲伊人色综图| 成年av动漫网址| www.自偷自拍.com| 99国产精品免费福利视频| 麻豆av在线久日| 男女边吃奶边做爰视频| 一级a爱视频在线免费观看| 男人添女人高潮全过程视频| 一级,二级,三级黄色视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲五月色婷婷综合| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲人成电影观看| 久久青草综合色| 亚洲欧美激情在线| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产一区二区 视频在线| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美变态另类bdsm刘玥| 香蕉国产在线看| 国产一区二区 视频在线| 在线观看www视频免费| a级片在线免费高清观看视频| 1024视频免费在线观看| 欧美另类一区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 免费高清在线观看日韩| 国产激情久久老熟女| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 大型av网站在线播放| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 少妇人妻久久综合中文| 一本综合久久免费| 美女午夜性视频免费| 久久99一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索 | 日韩人妻精品一区2区三区| 老司机午夜十八禁免费视频| 老汉色∧v一级毛片| 午夜久久久在线观看| 香蕉丝袜av| 国产一区有黄有色的免费视频| 一本久久精品| 国产黄频视频在线观看| 国产成人系列免费观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 新久久久久国产一级毛片| 国产深夜福利视频在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 久久天堂一区二区三区四区| 国产有黄有色有爽视频| 又大又黄又爽视频免费| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 精品国产一区二区久久| av福利片在线| 日本色播在线视频| 国产精品.久久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久久久精品国产欧美久久久 | 国产又色又爽无遮挡免| 国产精品av久久久久免费| 成年人黄色毛片网站| 一级片'在线观看视频| 亚洲精品乱久久久久久| 国产成人影院久久av| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 男女下面插进去视频免费观看| 免费在线观看黄色视频的| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲欧美色中文字幕在线| 国产成人精品久久二区二区91| 午夜久久久在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看 | 亚洲精品国产av成人精品| 国产淫语在线视频| 麻豆国产av国片精品| 9191精品国产免费久久| 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久国产精品人妻蜜桃| 99久久人妻综合| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲国产精品国产精品| 99国产精品一区二区蜜桃av | 最近中文字幕2019免费版| av网站在线播放免费| 秋霞在线观看毛片| 一本大道久久a久久精品| 亚洲精品一区蜜桃| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 波多野结衣av一区二区av| 欧美在线一区亚洲| av在线播放精品| 在线观看人妻少妇| 国产精品国产三级专区第一集| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲 国产 在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 在线av久久热| 黄片播放在线免费| 老司机影院成人| 成人国产一区最新在线观看 | 爱豆传媒免费全集在线观看| 成人影院久久| 丝袜美足系列| 热99国产精品久久久久久7| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 一级黄片播放器| 婷婷成人精品国产| 亚洲视频免费观看视频| 十八禁人妻一区二区| 国产人伦9x9x在线观看| 久久久久网色| 热re99久久精品国产66热6| 国产av一区二区精品久久| videosex国产| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 晚上一个人看的免费电影| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 两个人看的免费小视频| 三上悠亚av全集在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美另类一区| 亚洲 国产 在线| 大型av网站在线播放| 久久久久久久久免费视频了| 久久狼人影院| 国产精品一国产av| 99九九在线精品视频| 赤兔流量卡办理| 人人妻人人澡人人看| 老司机亚洲免费影院| 尾随美女入室| 大码成人一级视频| 韩国精品一区二区三区| 18在线观看网站| 午夜日韩欧美国产| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 在线观看www视频免费| 久久中文字幕一级| 久久久久久久精品精品| 国产av一区二区精品久久| 人人妻人人澡人人看| 午夜激情av网站| 啦啦啦 在线观看视频| av网站在线播放免费| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 一级片免费观看大全| 国产成人a∨麻豆精品| 精品人妻在线不人妻| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 欧美精品亚洲一区二区| 99国产综合亚洲精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 午夜免费成人在线视频| 日本av免费视频播放| 热99国产精品久久久久久7| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产精品免费大片| av在线老鸭窝| 午夜av观看不卡| 老司机影院成人| 国产在线免费精品| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| av天堂在线播放| 国产精品国产三级专区第一集| av电影中文网址| 亚洲,欧美,日韩| 久9热在线精品视频| 各种免费的搞黄视频| 国产三级黄色录像| 午夜福利乱码中文字幕| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 激情视频va一区二区三区| 在现免费观看毛片| 国产免费一区二区三区四区乱码| svipshipincom国产片| 成人国语在线视频| 日本av免费视频播放| 成年美女黄网站色视频大全免费| 免费看十八禁软件| 久久精品国产亚洲av涩爱| 天天添夜夜摸| 亚洲av国产av综合av卡| 大码成人一级视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美精品亚洲一区二区| 中文字幕制服av| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 两性夫妻黄色片| av片东京热男人的天堂| 一区二区三区四区激情视频| 97在线人人人人妻| 久久免费观看电影| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲精品国产av蜜桃| 99re6热这里在线精品视频| 日韩大码丰满熟妇| 男女边摸边吃奶| 一级片'在线观看视频| 美女福利国产在线| 免费在线观看影片大全网站 | 十八禁人妻一区二区| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲精品成人av观看孕妇| 午夜福利乱码中文字幕| 久久久久久久久久久久大奶| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲伊人久久精品综合| 免费观看a级毛片全部| 亚洲国产av新网站| 国产一区亚洲一区在线观看| 成人国产av品久久久| 国产精品免费视频内射| 亚洲,欧美精品.| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲av在线观看美女高潮| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 人妻一区二区av| 国产福利在线免费观看视频| 777米奇影视久久| 国产亚洲一区二区精品| 国产成人精品久久二区二区91| 大片免费播放器 马上看| 99国产精品免费福利视频| www.熟女人妻精品国产| 国产xxxxx性猛交| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 韩国高清视频一区二区三区| 免费人妻精品一区二区三区视频| www日本在线高清视频| 国产免费现黄频在线看| 午夜福利视频精品| 视频区欧美日本亚洲| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久av网站| 一边亲一边摸免费视频| 久久狼人影院| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产野战对白在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 国产高清视频在线播放一区 | 久久久久久久久免费视频了| 国产91精品成人一区二区三区 | 欧美黄色淫秽网站| 国产野战对白在线观看| 日韩大片免费观看网站| av在线老鸭窝| 国产一区亚洲一区在线观看| 日本欧美视频一区| 成人三级做爰电影| 成年动漫av网址| 女人精品久久久久毛片| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲成国产人片在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 一级片免费观看大全| 五月天丁香电影| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 午夜日韩欧美国产| 国产高清不卡午夜福利| 国产免费一区二区三区四区乱码| 成人亚洲欧美一区二区av| 在线观看免费高清a一片| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 精品人妻在线不人妻| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 青春草视频在线免费观看| 欧美黄色淫秽网站| 国产精品久久久av美女十八| 少妇的丰满在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 各种免费的搞黄视频| 国产野战对白在线观看| 少妇的丰满在线观看| videos熟女内射| 亚洲欧洲国产日韩| 精品人妻1区二区| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 青草久久国产| 亚洲精品在线美女| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产亚洲一区二区精品| 后天国语完整版免费观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 婷婷色综合大香蕉| www.自偷自拍.com| 七月丁香在线播放| 搡老岳熟女国产| 日韩中文字幕视频在线看片| 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲精品乱久久久久久| 男女无遮挡免费网站观看| 一级片'在线观看视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| av片东京热男人的天堂| 国产成人系列免费观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 美女中出高潮动态图| av网站在线播放免费| 青春草视频在线免费观看| 午夜激情久久久久久久| 一区福利在线观看| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲第一青青草原| 脱女人内裤的视频| 视频区欧美日本亚洲| 男男h啪啪无遮挡| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲av片天天在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲精品日本国产第一区| 永久免费av网站大全| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲精品第二区| 欧美日韩成人在线一区二区| 超碰97精品在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美 日韩 精品 国产| 日韩伦理黄色片| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产麻豆69| 嫩草影视91久久| 性少妇av在线| 国产真人三级小视频在线观看| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品一区二区三卡| 国产视频首页在线观看| 国产成人一区二区在线| av在线播放精品| 女人久久www免费人成看片| 丝袜美足系列| 亚洲欧美精品自产自拍| 一二三四在线观看免费中文在| 国产黄色免费在线视频| 老司机靠b影院| 69精品国产乱码久久久| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产成人91sexporn| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美国产精品一级二级三级| 男女床上黄色一级片免费看| 日日夜夜操网爽| 色94色欧美一区二区| 国产一区二区激情短视频 | 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 亚洲av在线观看美女高潮| 精品久久久久久电影网| 精品一区二区三卡| av天堂久久9| 99国产精品免费福利视频| 高清不卡的av网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 男女边摸边吃奶| 欧美成人午夜精品| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产主播在线观看一区二区 | 大陆偷拍与自拍| 99国产精品一区二区三区| 欧美精品一区二区大全| 中文字幕高清在线视频| 国产午夜精品一二区理论片| 99久久精品国产亚洲精品| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲七黄色美女视频| 久久青草综合色| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品欧美一区二区三区在线| 国产高清视频在线播放一区 | 国产av精品麻豆| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日本欧美视频一区| 制服诱惑二区| 九色亚洲精品在线播放| 天天添夜夜摸| 啦啦啦在线免费观看视频4| 免费在线观看完整版高清| 亚洲免费av在线视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品偷伦视频观看了| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 亚洲精品在线美女| a级毛片在线看网站| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 色网站视频免费| 日日夜夜操网爽| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久国产精品人妻蜜桃| 赤兔流量卡办理| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| av在线老鸭窝| 色婷婷av一区二区三区视频| 自线自在国产av| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品久久久久久精品古装| 超色免费av| 一区二区三区激情视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 免费少妇av软件| 国产高清videossex| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 一区二区三区乱码不卡18| 老鸭窝网址在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 大陆偷拍与自拍| 丝袜脚勾引网站| 国产黄频视频在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| av一本久久久久| www.av在线官网国产| 老司机深夜福利视频在线观看 | 久久久久久久久免费视频了| 最近中文字幕2019免费版| 水蜜桃什么品种好| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产一区有黄有色的免费视频| 成人影院久久| 90打野战视频偷拍视频| a级毛片黄视频| 国产精品一国产av| 丝袜喷水一区| 国产一区二区 视频在线| 波野结衣二区三区在线| 手机成人av网站| 国产精品成人在线| 在线观看人妻少妇| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 午夜激情av网站| 中文字幕人妻熟女乱码| 美女中出高潮动态图| 校园人妻丝袜中文字幕| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲熟女毛片儿| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产99久久九九免费精品| 日本a在线网址| 午夜两性在线视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 日本欧美视频一区| xxxhd国产人妻xxx| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲av综合色区一区| 亚洲精品乱久久久久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 欧美 亚洲 国产 日韩一| 韩国高清视频一区二区三区| 免费看十八禁软件| 亚洲成人免费电影在线观看 | 精品高清国产在线一区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 在现免费观看毛片| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 在线av久久热| 国产野战对白在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产一级毛片在线| 十八禁人妻一区二区| 国产精品一区二区精品视频观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 啦啦啦在线免费观看视频4| 99re6热这里在线精品视频| 青青草视频在线视频观看| 国产精品九九99| 亚洲国产最新在线播放| 人体艺术视频欧美日本| 咕卡用的链子| 久久精品国产亚洲av高清一级| 狂野欧美激情性bbbbbb| 只有这里有精品99| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 无遮挡黄片免费观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 18禁国产床啪视频网站| 久久久久久久久免费视频了| 五月开心婷婷网| 国精品久久久久久国模美| 最近中文字幕2019免费版| 久久久久网色| 最新的欧美精品一区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本wwww免费看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| www.精华液| 宅男免费午夜| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 夫妻性生交免费视频一级片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 久久亚洲国产成人精品v| 中文字幕av电影在线播放| 国产男女超爽视频在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 大香蕉久久成人网| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲成国产人片在线观看| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲 欧美一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久男人| 一二三四在线观看免费中文在| 视频在线观看一区二区三区| 国产一级毛片在线| 日本wwww免费看| 日韩电影二区| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久中文字幕一级| 少妇 在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 美女午夜性视频免费| www.熟女人妻精品国产| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| www.999成人在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 一级毛片女人18水好多 | 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 男女无遮挡免费网站观看| 91老司机精品| 色网站视频免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产成人影院久久av| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美黄色淫秽网站| 午夜免费观看性视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 色94色欧美一区二区| 日本欧美国产在线视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 亚洲黑人精品在线| 黄色 视频免费看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 少妇被粗大的猛进出69影院| 看免费av毛片| 色网站视频免费| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 欧美日韩成人在线一区二区|