子午流注針法聯(lián)合干擾素治療對宮頸癌合并HPV感染患者T淋巴細(xì)胞亞群的影響

翟垚青 閆文靜 喬志燕

摘要目的：探討子午流注針法聯(lián)合干擾素治療對宮頸癌合并人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染的臨床療效，并觀察其對Th17細(xì)胞因子表達(dá)的影響。方法：選取宮頸癌合并HPV感染患者70例，隨機(jī)分為對照組和觀察組，每組35例。2組患者均接受紫杉醇+卡鉑化療方案以及重組人α2β干擾素均勻涂宮頸表面，觀察組在上述治療方案的基礎(chǔ)上加用子午流注針法聯(lián)合治療，比較2組治療臨床療效、KPS評分、外周血Th17細(xì)胞百分比的變化，并觀察不良反應(yīng)發(fā)生情況。結(jié)果：治療后2組KPS評分均較治療前提高，其中觀察組提高的趨勢較對照組明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。觀察組臨床總有效率為7429%，對照組臨床總有效率4286%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=329，P<005）。治療后觀察組有26例HPV轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰率7429%，對照組12例轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰率3429%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=283，P<005）。治療后2組外周血Th17百分比均較治療前下降，觀察組較對照組下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。結(jié)論：子午流注針法可改善宮頸癌合并HPV感染的免疫抑制狀態(tài)，明顯提高患者的生命質(zhì)量。

關(guān)鍵詞宮頸癌；HPV感染；干擾素；子午流注針法；Th17；T淋巴細(xì)胞亞群；療效；免疫抑制

Effect of Acupuncture Based on Midnightnoon Cycle of Qi in Combination with Interferon

on T Lymphocyte Subsets in Patients with Cervical Cancer Coinfection of HPV

Zhai Yaoqing1， Yan Wenjing2， Qiao Zhiyan1

（1 Department of Gynecology， Jiaozuo City Maternal and Child Health Hospital， Jiaozuo 454000， China； 2 Department

of Pathology， Jiaozuo City Maternal and Child Health Hospital Pathology， Jiaozuo 454000， China）

AbstractObjective：To investigate the clinical curative effect of the acupuncture based on midnightnoon cycle of qi in combination with interferon on cervical cancer coinfection of human papilloma virus （HPV）， and to observe the effects on Th17 cytokines. Methods：A total of 70 cases of patients with cervical cancer coinfection of HPV in our hospital included into the study， and were randomly divided into the control group and the observation group， with 35 cases in each group. Two groups of patients accepted chemotherapy regimens of paclitaxel + carboplatin and recombinant human interferon α2βevenly cervical surface， and the observation group combined with acupuncture based on midnightnoon cycle of qi on the basis of the above treatment. The clinical curative effect， Karnofsky Performance Status （KPS）， peripheral blood Th17 cells percentage changes of two groups were compared， and the adverse reactions were observed. Results：1）KPS scores improved in the two groups after treatment， and the increase trend of observation group was more obviously than the control group. The differences were statistically significant （P<005）. 2）The clinical total effective rate of observation group was 7429%， and that was 4286% in the control group. The differences were with statistically significant （χ2=329， P<005）. After treatment， 26 cases of HPV turned to negative in the observation group， and the negative conversion ratio was 7429%，12 cases turned to negative in the control group， and the negative conversion ratio was 3429%. The differences were statistically significant （χ2=283， P<005）. 3）After a stage of treatment， peripheral blood Th17 percentage in the two groups decreased， and the observation group decreased more obvious than the control group. The differences were statistically significant （P<005）. Conclusion：The acupuncture based on midnightnoon cycle of qi can improve the immunosuppression of cervical cancer coinfection of HPV， and can significantly improve the patient′s quality of life.

Key WordsCervical cancer； HPV infection； Interferon； Acupuncture based on midnightnoon cycle of qi； Th17； T lymphocyte subsets； Efficacy； Immunosuppression

中圖分類號：R245文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.048

宮頸癌是女性惡性腫瘤中發(fā)病率僅次于乳腺癌的疾病，發(fā)病率呈逐年增加的趨勢，目前有文獻(xiàn)[13]證實(shí)HPV的持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生的主要原因，國內(nèi)外專家雖進(jìn)行大量研究，但仍無法顯著降低HPV的感染率。多數(shù)腫瘤合并感染的患者處于免疫抑制狀態(tài)[4]，且與患者的臨床預(yù)后相關(guān)，因此，我們認(rèn)為改善宮頸癌合并HPV感染的免疫力將有可能成為治療的靶方向。

子午流注針法在臨床被廣泛運(yùn)用[5]，并不斷發(fā)展和完善，擇時(shí)施治可以調(diào)整臟腑功效。本研究利用子午流注針法治療宮頸癌合并HPV感染，并對其部分作用機(jī)制進(jìn)行研究。

1資料與方法

11一般資料選取2014年1月至2015年1月我院合并HPV感染的宮頸癌患者70例，按隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組和觀察組，每組35例。對照組患者年齡36～70歲，平均年齡（4529±948）歲，病程6個(gè)月至3年，平均病程（126±023）年，國際婦產(chǎn)科協(xié)會（FIGO）分期為Ⅰ期4例、Ⅱ期13例、Ⅲ期10例、Ⅳ期8例；觀察組患者年齡37～71歲，平均年齡（4611±838）歲，病程5個(gè)月至25年，平均病程（114±014）年，F(xiàn)IGO分期為Ⅰ期5例、Ⅱ期11例、Ⅲ期9例、Ⅳ期10例。同時(shí)取同期健康體檢者30名作為健康對照組，年齡34～73歲，平均年齡（4629±1002）歲，2組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005），具有可比性。本研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)（倫理批件號2014EK021）。

12診斷標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)陰道鏡檢查及宮頸活檢確診宮頸癌，經(jīng)快速導(dǎo)流雜交技術(shù)檢測存在HPV感染[3]。

13納入標(biāo)準(zhǔn)1）符合12者；2）年齡35～75歲；3）無心、腦、肺、腎等重大臟器并發(fā)癥者；4）知情同意并簽署知情同意書者。

14排除標(biāo)準(zhǔn)1）存在精神疾患或者認(rèn)知障礙者；2）存在免疫缺陷疾病者；3）對化療藥物過敏者。

15脫落與剔除標(biāo)準(zhǔn)1）在治療過程中因故中途退出者；2）隨訪中自然脫落者；3）治療過程出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)者；4）依從性差者。

16治療方法對照組采用紫杉醇+卡鉑聯(lián)合化療方案，首先用改良Seldinger穿刺法進(jìn)行置管，靜脈滴注絲裂霉素（上海上藥新亞藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字號H31020504）+順鉑（德州德藥制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字號H20023236）+5氟脲嘧啶（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H31020593）。觀察組在對照組基礎(chǔ)上加用子午流注針法，以本地時(shí)間為時(shí)間依據(jù)，依照“陽日陽時(shí)開陽經(jīng)之穴，陰日陰時(shí)開陰經(jīng)之穴”的開穴原則進(jìn)行開穴，每日按時(shí)開穴的時(shí)間體見表1。具體操作方法：患者雙側(cè)肢體取穴，保持仰臥位，用75%乙醇對穴位局部進(jìn)行消毒，用華佗牌針具進(jìn)行針刺，平補(bǔ)平瀉手法，每次留針30 min，1次/d，以10次為1個(gè)療程，連續(xù)進(jìn)行3個(gè)療程治療，每個(gè)療程間隔開3 d。2組均進(jìn)行為期6個(gè)月隨訪。

17觀察指標(biāo)

171KPS評分KPS評分是對腫瘤患者健康狀態(tài)進(jìn)行評估的一種手段，從正常，無癥狀和體征至死亡分為11個(gè)級別，每個(gè)級別對應(yīng)的分值不同，正常，無癥狀和體征代表10分，能進(jìn)行正?；顒?dòng)，有輕微癥狀和體征代表9分，勉強(qiáng)進(jìn)行正常活動(dòng)，有一些癥狀或體征代表8分；生活能自理，但不能維持正常生活和工作代表7分；生活能大部分自理，但偶爾需要?jiǎng)e人幫助代表6分；常需要人照料代表5分；生活不能自理，需要特別照顧和幫助代表4分；生活嚴(yán)重不能自理代表3分；病重，需要住院和積極的支持代表2分；病重，需要住院和積極的支持治療代表1分；死亡代表0分。得分越低，健康狀況越差，若低于60分，許多有效的抗腫瘤治療就無法實(shí)施。

172Th17細(xì)胞百分比取2組宮頸癌患者治療前以及隨訪6個(gè)月后和健康組外周血5 mL，用人淋巴細(xì)胞分離液將上述血液中的單核細(xì)胞分離出并調(diào)整密度為1×106/mL，取200 μL置于10%胎牛血清RPMI 1640培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，加入事先混合完成的工作液，工作液內(nèi)含有刺激劑佛波醇乙酯及離子霉素等，將培養(yǎng)瓶置于37 ℃，5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)4～6 h，培育結(jié)束后用磷酸鹽緩沖液沖洗，以5 000 r/min速度下離心，收集細(xì)胞后加入5μL異硫氰酸熒表1“子午流注納甲法”擇時(shí)按日開穴時(shí)間時(shí)辰時(shí)間日干甲己乙庚丙辛丁壬戊癸辰7～9支溝支溝陽溪商陽昆侖昆侖陽陵泉俠溪后溪后溪巳9～11商丘隱白經(jīng)渠經(jīng)渠陰谷然谷太沖太沖大陵大陵午11～13陽溪陽溪委中通谷足臨泣足臨泣中渚后溪、京骨、陽池陽池、厲兌厲兌未13～15尺澤魚際太溪太溪?jiǎng)趯m太沖、太溪少沖少沖商丘商丘申15～17委中委中液門足臨泣、合谷少澤少澤解溪解溪二間二間酉17～19中沖太溪、太白大敦大敦靈道靈道大都大都尺澤尺澤

光素對CD4（CD4FITC）進(jìn)行標(biāo)記，加入5 μL藻紅蛋白對IL17（IL17AAPC）細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，隨后采用流式細(xì)胞檢測技術(shù)進(jìn)行Th17細(xì)胞的檢測。

18療效判定標(biāo)準(zhǔn)采用FIGO評定標(biāo)準(zhǔn)對腫瘤治療效果進(jìn)行判定[6]，完全緩解（CR）：肉眼下未見腫瘤組織，且無新病灶出現(xiàn)；部分緩解（PR）：腫瘤組織體積較治療前縮小50%以上，且無新病灶出現(xiàn)；病情穩(wěn)定（SD）：腫瘤組織體積較治療前未達(dá)50%，且無新病灶出現(xiàn)；病情進(jìn)展（PD）：治療前后腫瘤組織大小無變化或出現(xiàn)新病灶。HPV療效標(biāo)準(zhǔn)：1）轉(zhuǎn)陰；2）無效。

19統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本課題所得數(shù)據(jù)均在SPSS 200統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

212組KPS評分比較治療后2組KPS評分均較治療前提高，其中觀察組提高較對照組明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見表2。

222組臨床有效率比較觀察組臨床有效率為7429%，對照組臨床有效率4286%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=329，P<005）。見表3。

232組HPV轉(zhuǎn)陰率比較治療后觀察組有26例HPV轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰率7429%，對照組12例轉(zhuǎn)陰，轉(zhuǎn)陰率3429%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=283，P<005）。

242組Th17細(xì)胞百分率比較2組隨訪6個(gè)月后2組外周血Th17百分率雖仍較健康組高，但均較治療前明顯下降，觀察組較對照組下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見圖1。

3討論

宮頸癌的發(fā)病率近年來一直居高不下，對女性的生命安全產(chǎn)生嚴(yán)重危害。HPV感染是宮頸癌發(fā)生發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，而持續(xù)性的免疫功能下降則是HPV持續(xù)性感染的危險(xiǎn)因子[78]，Bhavsar等[9]證實(shí)免疫能力高低與癌癥患者的預(yù)后存在正相關(guān)。故我們認(rèn)為調(diào)節(jié)患者的免疫功能以抵御HPV感染是治療宮頸癌患者的重要措施。

子午流注理論源自《黃帝內(nèi)經(jīng)》，是天人相應(yīng)觀點(diǎn)的充分體現(xiàn)，后世醫(yī)賢在臨床實(shí)踐中不斷將其完善，逐步形成了目前較為完善的理論及實(shí)踐體系?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》中認(rèn)為人身之氣血周流出入皆有定時(shí)，人體氣血的虛盛具有周期性變化，此規(guī)律與天干、地支、陰陽五行相配合形成擇時(shí)定期開闔五腧穴的一種方法，此法充分體現(xiàn)了中醫(yī)針灸學(xué)注重時(shí)間條件取穴的特色，正如明代醫(yī)家楊繼洲《針灸大成》中曰：“剛?cè)嵯嗯?，陰陽結(jié)合，氣血循環(huán)，時(shí)穴開闔”。在氣血灌注之時(shí)對特定的穴位進(jìn)行刺激，充分調(diào)節(jié)氣血陰陽，疏通經(jīng)絡(luò)，促進(jìn)機(jī)體功能恢復(fù)。子午流注法被廣泛運(yùn)用于臨床治療各類疾病，療效好，越來越受到患者的青睞。董淑艷和馮萬才[10]利用子午流注法對中風(fēng)后遺癥患者進(jìn)行治療，結(jié)果顯示該療法可明顯提升患者的日常生活能力（ADL）；孫云廷等[11]對慢性乙酸胃潰瘍模型大鼠進(jìn)行子午流注針法干預(yù)，結(jié)果顯示子午流注針法可明顯加速大鼠潰瘍創(chuàng)面的愈合，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；有研究發(fā)現(xiàn)子午流注納甲法可明顯提高乙肝患者的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶復(fù)常率以及HBVDNA陰轉(zhuǎn)率，其療效明顯優(yōu)于單純使用拉米夫定的對照組（P<005），這提示子午流注針法對抑制乙型肝炎病毒的復(fù)制、提高肝功能有理想效果[1213]。諸如此類的臨床報(bào)道不勝枚舉，諸多醫(yī)家從臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了子午流注法的有效性及可行性。本研究利用子午流注針法對宮頸癌合并HPV感染患者進(jìn)行治療，結(jié)果顯示該療法不但提高了患者的關(guān)于腫瘤的臨床有效率，提升了KPS評分，且明顯增加了HPV的轉(zhuǎn)陰率。

Th17是近年來發(fā)現(xiàn)的CD4+淋巴細(xì)胞亞群，其結(jié)構(gòu)與作用于Th1及Th2不同，Th17參與了機(jī)體自身免疫及炎性反應(yīng)改變的過程，在部分疾病中Th17還是發(fā)病的主要調(diào)節(jié)者[1417]。宮頸癌合并HPV感染患者大多表現(xiàn)為免疫抑制及炎性反應(yīng)，幼稚CD4+T細(xì)胞在一定條件下分化為Th17細(xì)胞，產(chǎn)生了IL17效應(yīng)因子，而IL17是重要的促炎因子之一，與相應(yīng)受體結(jié)合后發(fā)揮促進(jìn)炎性反應(yīng)發(fā)展、免疫應(yīng)答等多種功能，因此調(diào)控Th17細(xì)胞分化有重要的臨床價(jià)值。在對該療法作用機(jī)制探討中我們檢測了2組宮頸癌患者外周血Th17細(xì)胞比例的變化，同時(shí)與健康組進(jìn)行對照比較。本研究結(jié)果顯示，2組宮頸癌合并HPV感染患者外周血中Th17的表達(dá)頻率明顯高于健康對照組，由此我們推斷Thl7、IL17等在宮頸癌合并HPV感染中可能起到作用，隨訪6個(gè)月后2組外周血Th17百分比雖仍較健康組高，但均較治療前明顯下降，觀察組較對照組下降更明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005），這進(jìn)一步提示Th17可能是宮頸癌合并HPV感染一個(gè)重要因素，而子午流注針法發(fā)揮臨床療效可能與下調(diào)Th17的表達(dá)有關(guān)。因此我們認(rèn)為糾正Th17的功能失調(diào)可能是治療宮頸癌的一個(gè)靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]Capote Negrin LG.Epidemiology of cervical cancer in Latin America[J].Ecancermedicalscience，2015，9：577.

[2]王春曉，佟林林，孫淑娥.宮頸癌流行病學(xué)調(diào)查和篩查研究進(jìn)展[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，28（7）：826830.

[3]馬春華，吐爾遜阿衣·買買提明，王琳，等.高危型HPV基因型檢測在新疆宮頸癌篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國生育健康雜志，2016，27（5）：432437.

[4]陳仲波，余紅萍，朱筧青，等.合并HPV感染宮頸癌患者外周血Th1/Th2細(xì)胞免疫功能變化及臨床意義[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2016，26（24）：56775679.

[5]蘇緒林，彭楚湘，謝雨君.子午流注針法時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)芻議[J].中國針灸，2010，30（7）：574576.

[6]瞿秋紅，韋立蓓，尹伶.白蛋白結(jié)合型紫杉醇治療晚期宮頸癌的療效與安全性探討[J].中國生化藥物雜志，2017，37（9）：4041，43.

[7]Cicchini L，Westrich JA，Xu T，et al.Suppression of Antitumor Immune Responses by Human Papillomavirus through Epigenetic Downregulation of CXCL14[J].MBio，2016，7（3）.pii：e0027016.

[8]Zhang W，Tian X，Mumtahana F，et al.The existence of Th22，pure Th17 and Th1 cells in CIN and Cervical Cancer along with their frequency variation in different stages of cervical cancer[J].BMC Cancer，2015，15：717.

[9]Bhavsar NA，Bream JH，Meeker AK，et al.A peripheral circulating TH1 cytokine profile is inversely associated with prostate cancer risk in CLUE II[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2014，23（11）：25612567.

[10]董淑艷，馮萬才.子午流注針法合頭針體針治療中風(fēng)后遺癥療效觀察[J].中國民族民間醫(yī)藥，2010，19（4）：106107.

[11]孫云廷，樊留博，鄧春雷.子午流注納甲法對慢性乙酸胃潰瘍大鼠潰瘍愈合的影響[J].陜西中醫(yī)，2008，29（1）：113115.

[12]王蘇芳.子午流注納甲納子法治療周圍性面神經(jīng)麻痹100例[J].中國民間療法，2011，19（8）：1415.

[13]張素釗，寧沛，李梅，等.子午流注針法配合辨證取穴對缺血性腦血管病患者腦血流動(dòng)力學(xué)的影響[J].河北中醫(yī)，2016，38（1）：98102.

[14]袁芳.Th1/Th2和Th17/Treg平衡失調(diào)與宮頸癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系及術(shù)后CD4+淋巴細(xì)胞亞群的改變[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2014.

[15]呂翰林，陳雋.宮頸癌患者血清細(xì)胞因子與細(xì)胞免疫的水平及關(guān)系[J].中國婦幼保健，2015，30（18）：29152917.

[16]Baker AJ.Adrenergic signaling in heart failure：a balance of toxic and protective effects[J].Pflugers Arch，2014，466（6）：11391150.

[17]Filippatos G，F(xiàn)armakis D，Bistola V，et al.Temporal trends in epidemiology，clinical presentation and management of acute heart failure：results from the Greek cohorts of the Acute Heart Failure Global Registry of Standard Treatmentand the European Society of CardiologyHeart Failure pilot survey[J].Eur Heart J Acute Cardiovasc Care，2014 Mar 4.