• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    葉面噴施鉀肥對霞脆桃果實(shí)品質(zhì)及KUP基因表達(dá)的影響

    2018-09-10 00:53:05宋志忠許建蘭張斌斌俞明亮馬瑞娟
    江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報 2018年5期
    關(guān)鍵詞:鉀素成熟度鉀肥

    宋志忠 許建蘭 張斌斌 俞明亮 馬瑞娟

    摘要:以霞脆桃為材料,研究了葉面噴施鉀肥對果實(shí)品質(zhì)的影響及果實(shí)發(fā)育中K+動態(tài)平衡與KUP家族基因表達(dá)水平之間的聯(lián)系。結(jié)果表明:噴施鉀肥顯著增加了霞脆桃的鮮質(zhì)量和體積大小,改善了果皮著色指標(biāo),提高了果實(shí)可溶性固形物和可溶性糖含量,有效提升了桃果實(shí)品質(zhì),并有效增強(qiáng)了果實(shí)發(fā)育不同時期果肉的鉀素營養(yǎng)狀況;桃KT/HAK/KUP家族基因在桃果實(shí)發(fā)育不同時期的表達(dá)水平存在差異,Ppe KUP1基因在霞脆桃整個果實(shí)發(fā)育期的表達(dá)水平最高,其次是PpeKUP5和PpeKUP3,而PpeKUP14~PpeKUP16在果實(shí)發(fā)育不同時期均沒有檢測到表達(dá)量;PpeKUP1、Ppe KUP2和PpeK UP7在轉(zhuǎn)錄水平上對噴施鉀肥處理最為敏感,其表達(dá)水平與對照相比,在第2次果實(shí)膨大期(75 DAFB)至達(dá)到商業(yè)成熟度時(95 DAFB)均顯著增強(qiáng)。

    關(guān)鍵詞:桃;果實(shí)發(fā)育;鉀肥;葉面噴施;KT/HAK/KUP家族;基因表達(dá)

    中圖分類號:S662.1

    文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

    文章編號: 1000-4440(2018) 05-1107-06

    鉀是植物細(xì)胞中含量最為豐富的金屬元素之一,在維持細(xì)胞電荷平衡,調(diào)節(jié)細(xì)胞膨壓,參與光合作用和蒸騰作用等多種生命過程中起重要作用,是植物正常生長發(fā)育必需的營養(yǎng)元素。土壤缺鉀影響植物光合作用與葉綠素合成,缺鉀嚴(yán)重將引起植物組織萎縮。果園中,鉀肥施用與花的開放、桃果實(shí)品質(zhì)、產(chǎn)量及果實(shí)采后貯藏品質(zhì)密切相關(guān)。缺鉀土壤中施用適量鉀肥,能顯著提高果實(shí)可溶性固形物含量,改善糖酸比,提升果實(shí)內(nèi)在品質(zhì),并能增加果實(shí)單果質(zhì)量,改善著色指數(shù)以及果頂形狀,提高果實(shí)外觀品質(zhì)。此外,施用鉀肥可顯著改善果實(shí)的抗裂果特性和貯藏運(yùn)輸特性。然而,諸多研究主要集中在生理生化層面,鉀素營養(yǎng)與果樹生長及果實(shí)發(fā)育過程中K+吸收與轉(zhuǎn)運(yùn)的分子機(jī)制研究報道鮮少。

    KT/HAK/KUP家族基因編碼高親和的K+轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白,介導(dǎo)植物對K+的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和分配,維持植物體內(nèi)鉀素營養(yǎng)平衡。然而,該家族成員的功能尚未完全清楚,個別基因的研究多見于模式植物擬南芥。吸收動力學(xué)研究結(jié)果表明擬南芥AtK UP1介導(dǎo)根部細(xì)胞吸收外界K+,既具有低親和吸附系統(tǒng)(IAS)的特征,又具有高親和吸附系統(tǒng)(HAS)的特征。表觀遺傳學(xué)研究結(jié)果表明AtKUP2、AtKUP4和AtHAK5主要控制根毛區(qū)延長和細(xì)胞擴(kuò)張,介導(dǎo)根部吸收的K+向地上部轉(zhuǎn)運(yùn)或分配;AtKUP7介導(dǎo)根部K+的吸收并將吸收的K+運(yùn)輸?shù)侥举|(zhì)部,特別是缺鉀條件下,其將K+從根部向地上部的轉(zhuǎn)運(yùn)作用更顯著。借助生物信息學(xué)分析方法,宋志忠等從葡萄和桃中分別鑒定出18和16個KUP基因成員。然而,多年生木本植物(尤其是果樹作物)KT/HA K/K UP家族成員的功能依然未知。

    桃[Prunus persica(L.)Batsch]是一種全球重要的水果,隨著基因組序列的公布,迅速成為最具研究潛力的園藝作物之一。本研究分析了鉀肥施用對霞脆桃生長指標(biāo)及果實(shí)品質(zhì)的影響,并通過實(shí)時熒光定量PCR分析了果實(shí)發(fā)育中K+動態(tài)平衡與KUP家族基因表達(dá)水平之間的聯(lián)系,從分子層面探討鉀肥施用、鉀素營養(yǎng)狀況與果實(shí)發(fā)育及品質(zhì)之間的密切關(guān)系,為果樹施用鉀肥提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料及取樣

    供試材料為江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院桃試驗(yàn)園中的7年生早中熟桃品種霞脆,試驗(yàn)于2015和2016年重復(fù)開展,重復(fù)性驗(yàn)證一致,本文展示數(shù)據(jù)源自2015年試驗(yàn)。鉀肥施用處理參照宋志忠等和李靖等報道的方法。選擇同一田地的2行桃樹(各6棵,行株距為5mx3m),其中一行為對照,另一排行進(jìn)行葉片噴施處理。盛花后45d(5月上旬),即桃幼果已成形并將進(jìn)入第1次快速膨大期,對選定的桃樹噴施3%(本研究室前期鉀肥預(yù)試驗(yàn)所得的最佳噴施量)的KH2P04溶液,以滴液為度,試驗(yàn)植株按常規(guī)栽培措施管理。果實(shí)樣品采集:從盛花后35d(4月下旬,30DAFB)起,每隔20d取一次樣,至果實(shí)達(dá)到商業(yè)成熟度時(6月底,95 DAFB),共采樣4次,用于基因表達(dá)分析,達(dá)到商業(yè)成熟度的果實(shí)用于果實(shí)品質(zhì)的各項(xiàng)指標(biāo)測定。

    1.2 桃果實(shí)生理指標(biāo)測定

    用分析天平測定果實(shí)單果質(zhì)量,并用游標(biāo)卡尺測定果實(shí)的縱徑、橫徑和側(cè)徑。在果實(shí)縫合線兩側(cè)中部用TA.XT.Plus型質(zhì)構(gòu)儀測定帶皮果肉硬度,探頭直徑8mm,測試深度5mm,貫人速度lmm/s。

    參照馬瑞娟等的方法,用Color Quest XE色差計測定果實(shí)顏色指標(biāo)。其中L4表示顏色的亮度,取值范圍為[1,100];α*、b*表示顏色組分,取值范圍為,α*值為紅綠色差指標(biāo),b*值為黃藍(lán)色差指標(biāo)。a*/b*值反映果實(shí)的真實(shí)色澤,負(fù)值時果實(shí)為綠色,零值時表示果實(shí)顏色由綠色轉(zhuǎn)為黃色或橙紅色,正值時表示果實(shí)色澤為黃色或橙紅色。

    果實(shí)硬度測定完成后,取測定硬度的2個點(diǎn)處果肉的汁液用便攜數(shù)顯折光儀PAL-1測定果實(shí)的可溶性固形物含量,取2個點(diǎn)的平均值作為每個果實(shí)的實(shí)際可溶性固形物含量。果肉勻漿后以702 SM Titrino自動電位滴定儀測定可滴定酸含量,用斐林試劑滴定法測定可溶性糖含量。

    鉀離子含量測定參照Song等的方法:樣品在105℃中殺青30min.并在65℃烘箱烘烤48h,均勻粉碎后用HNO3-HC104消化過夜,并通過石墨高溫消解儀消煮4.5h,定容后用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜儀(ICP-AES)測定。

    1.3 果肉總RNA的提取和熒光定量PCR

    利用MiniBEST Plant RNA Extraction Kit(TaKa-Ra公司產(chǎn)品)提取果實(shí)樣品的總RNA,并通過Pri—meScriptTM RT reagent Kit反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司產(chǎn)品)合成第一鏈cDNA作為模板,用于實(shí)時熒光定量PCR。通過NCBI/Primer-BLAST在線服務(wù)器設(shè)計桃PpeKUP基因的特異性表達(dá)引物,分別以桃Ubiquitin,基因(GenBank No.KJ598788)和Actin,基因(GenBank No.KP690196)為內(nèi)參,所用引物序列參照Song等的報道,通過ABI 7500實(shí)時熒光定量PCR儀檢測桃PpeKUP基因在桃花不同開放時期的表達(dá)特征。熒光染料為SYBR Green(TaKaRa公司產(chǎn)品),反應(yīng)體系參照商品說明書。反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性30s:95℃變性5s,58℃退火34s(40個循環(huán));最后72℃延伸10s。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    所有數(shù)據(jù)通過SPSS 13.0軟件進(jìn)行顯著性分析,在鉀肥處理與對照2個獨(dú)立桃果實(shí)樣品間進(jìn)行£檢驗(yàn)(P<0.05為顯著水平,P<0.01為極顯著水平)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 噴施鉀肥對桃果實(shí)外觀的影響

    桃果實(shí)鮮質(zhì)量隨果實(shí)的發(fā)育而逐漸積累(表1),在盛花后75d(6月上旬,75DAFB)出現(xiàn)第2次果實(shí)膨脹期,在達(dá)到商業(yè)成熟度時(6月底,95DAFB),霞脆桃平均單果質(zhì)量達(dá)到最高(157.76g)。噴施KH2PO4鉀肥顯著提高了不同發(fā)育時期的桃果實(shí)單果質(zhì)量,在經(jīng)濟(jì)采收期(95DAFB)達(dá)到了178.42g,即顯著提高了15%(表1和圖1)。

    桃果實(shí)體積隨著果實(shí)的發(fā)育而逐漸增加,在經(jīng)濟(jì)采收期,霞脆桃果實(shí)的平均縱徑、橫徑和側(cè)徑分別達(dá)到最大值(表1)。與對照相比,噴施鉀肥顯著提高了不同檢測時期平均縱徑和側(cè)徑的長度(P<0.05),在經(jīng)濟(jì)采收期(95 DAFB)縱徑和側(cè)徑分別提高了11.36%和12.65%,而橫徑?jīng)]有顯著變化(表1和圖1)。

    霞脆屬于易著色桃品種,在桃果實(shí)發(fā)育和成熟過程中,果皮顏色由綠色逐漸轉(zhuǎn)為紅色。在達(dá)到商業(yè)成熟度時(95 DAFB),桃果實(shí)α*和α*/b*達(dá)到峰值。與對照相比,噴施KH2PO4鉀肥顯著增強(qiáng)了桃果實(shí)的α*和α*/b*,分別提高了20.97%和15.20%.而對桃果實(shí)L*值沒有顯著影響(表2),說明噴施鉀肥可能通過提高果實(shí)的α*和α*/b*值改善果皮色澤和外觀。

    2.2 噴施鉀肥對桃果實(shí)品質(zhì)的影響

    果實(shí)硬度、可溶性固形物含量、可溶性糖含量和可滴定酸含量等都是影響果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)的重要指標(biāo)。在達(dá)到商業(yè)成熟度時(95 DAFB),噴施鉀肥的桃果實(shí)可溶性固形物和可溶性糖含量相比于對照分別提高了15.81%和15.20%,而果實(shí)硬度和可滴定酸含量沒有顯著差異(表3)。

    霞脆桃果實(shí)發(fā)育不同時期果肉中K+含量存在差異,隨著桃果實(shí)的不斷發(fā)育而逐漸增加,在第2次果實(shí)膨大期(75 DAFB)至達(dá)到商業(yè)成熟度時(95DAFB),K+含量達(dá)到峰值(表4)。在盛花后55d、75d和95d,噴施鉀肥的果肉K+含量與對照相比分別上升20.26%、16.51%和21.00%。

    2.3 桃果實(shí)發(fā)育過程中KT/HAK/KUP家族基因的表達(dá)特征

    在前期研究中,筆者從桃基因組中鑒定并克隆了16個KUP家族基因。熒光定量PCR分析結(jié)果表明:PpeKUPl~PpeKUP13基因在霞脆果實(shí)中均能檢測到,且表達(dá)水平差異較大,其中,PpeKUPI基因的表達(dá)水平最高,其次是PpeKUP5和PpeKUP3,其他基因的表達(dá)量相對較低,而PpeKUP14~Ppe-KUP16基因在霞脆果實(shí)中沒有檢測到表達(dá)量(圖2)。此外,PpeKUPl~PpeKUP13基因在試驗(yàn)的4個不同時期的表達(dá)趨勢類似,均在第1次果實(shí)膨大期(35DAFB)和硬核期(55DAFB)的表達(dá)水平較高,并隨著果實(shí)的不斷發(fā)育和成熟而逐漸降低。其中,PpeKUP1基因在硬核期(55DAFB)最為突出,其表達(dá)水平約為其他PpeKUP基因的5—20倍,說明其在果實(shí)發(fā)育初期是尤為重要的鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)體(圖2)。

    2.4桃果實(shí)發(fā)育過程KT/HAK/KUP家族基因?qū)娛┾浄实捻憫?yīng)

    熒光定量PCR結(jié)果表明,PpeKUP1、PpeKUP2和PpeKUP7在轉(zhuǎn)錄水平對噴施鉀肥處理較為敏感,PpeKUI的表達(dá)水平在噴施鉀肥后的3次不同檢測點(diǎn)均顯著上升,而PpeKUP2和PpeKUP7的表達(dá)水平在第2次果實(shí)膨大期(75DAFB)至達(dá)到商業(yè)成熟度時均顯著增強(qiáng)(圖3),其他基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)水平不受噴施鉀肥影響。

    3 討論

    K+是植物細(xì)胞中含量最為豐富的陽離子之一,鉀是植物正常生長和發(fā)育必不可缺的品質(zhì)元素,與花的開放、果實(shí)發(fā)育、品質(zhì)形成及產(chǎn)量密切相關(guān)。本研究從生理層面分析了噴施鉀肥對霞脆桃果實(shí)品質(zhì)的影響,結(jié)果表明噴施鉀肥顯著提高了霞脆桃果實(shí)鮮質(zhì)量和果實(shí)大小,改善了果皮著色指標(biāo),并提高了果實(shí)可溶性固形物和可溶性糖的含量,提升了果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)。這些結(jié)果與鉀肥施放改善番茄、蘋果、檸檬、獼猴桃、龍眼、蟠桃、油桃和普通桃等果實(shí)品質(zhì)的諸多報道是一致的。而且噴施鉀肥有效改善了桃果實(shí)發(fā)育不同時期果肉的鉀素營養(yǎng)狀況,推測鉀素營養(yǎng)狀況的改善,促進(jìn)了果實(shí)縱徑和側(cè)徑發(fā)育,可能是桃果實(shí)鮮質(zhì)量增加的直接因素,也可能是桃果實(shí)品質(zhì)得以改善的因素之一。

    果樹研究中,有關(guān)鉀肥控釋促進(jìn)果實(shí)發(fā)育及其鉀素營養(yǎng)的分子基礎(chǔ)研究鮮少。本研究從轉(zhuǎn)錄水平分析桃鉀轉(zhuǎn)運(yùn)體KT/HAK/KUP家族基因在霞脆桃果實(shí)發(fā)育不同時期的表達(dá)特征及其對噴施鉀肥的差異響應(yīng)。結(jié)果表明,KT/HA K/KUP家族基因在果實(shí)發(fā)育與成熟不同時期的表達(dá)水平差異明顯,均在第1次果實(shí)膨大期(35DAFB)和硬核期(55DAFB)的表達(dá)水平較高,表明在桃幼果形成和硬核形成時期需要更多的KUP轉(zhuǎn)運(yùn)體發(fā)揮作用,以便富集較多的K+參與果實(shí)發(fā)育初期細(xì)胞內(nèi)各種依賴K+的生理過程,也可能為第2次果實(shí)膨大(75 DAFB)和果實(shí)成熟儲備充足的K+驅(qū)動力。伴隨著桃果實(shí)的不斷發(fā)育和成熟,KT/HAK/KUP家族基因的表達(dá)水平逐漸降低,說明桃果實(shí)發(fā)育成熟后這些轉(zhuǎn)運(yùn)體的功能下降。桃果實(shí)發(fā)育成熟后,體內(nèi)K+有可能向其他組織(例如一年生枝條的韌皮部或樹干)轉(zhuǎn)移,但依然維持在較高的鉀素營養(yǎng)狀態(tài),維持并保障采收后果實(shí)的基本形態(tài)和鮮質(zhì)量。

    Song等研究結(jié)果表明PpeKUPI基因在桃幼苗的根、莖和葉中均有表達(dá),且在根部易受外界非生物脅迫的調(diào)控。宋志忠等發(fā)現(xiàn)PpeKUPL基因在桃花中的表達(dá)量相對較低,遠(yuǎn)低于該家族其他成員基因。本研究結(jié)果表明PpeKUP1基因在霞脆桃果實(shí)發(fā)育初期至硬核期(55 DAFB)的表達(dá)量極高,約為其他PpeKUP基因表達(dá)水平的5~20倍,且在轉(zhuǎn)錄水平上對噴施鉀肥非常敏感,其表達(dá)水平從硬核期(55DAFB)至達(dá)到商業(yè)成熟度時(95DAFB)是持續(xù)被誘導(dǎo)的,提示PpeKUPl是果實(shí)發(fā)育過程中(特別是幼果形成及發(fā)育初期)重要的鉀離子轉(zhuǎn)運(yùn)體,在維持果肉鉀素營養(yǎng)方面發(fā)揮較大作用。盡管Ppe-KUP5基因是桃幼苗(特別是根部)KT/HA K/KUP家族基因中表達(dá)量最高的,但在桃花中的表達(dá)量是極低的。本研究中,PpeKUP5在桃果實(shí)發(fā)育中的表達(dá)水平僅次于PpeKUPI,且在霞脆桃果實(shí)發(fā)育早期(35~55DAFB)的表達(dá)量較高,但對噴施鉀肥不敏感。雖然PpeKUP7基因在桃幼苗和桃花中表達(dá)量相對較低,在霞脆桃果實(shí)中表達(dá)量也是極低的,但對噴施鉀肥較為敏感,在第2次果實(shí)膨大期(75DAFB)至達(dá)到商業(yè)成熟度時(95DAFB)其表達(dá)均顯著增強(qiáng),表明其與PpeKUOI和PpeKUP5在桃果實(shí)發(fā)育與成熟過程中,是響應(yīng)和增強(qiáng)果肉鉀素營養(yǎng)狀態(tài)所不可或缺的。同時,在果實(shí)發(fā)育成形并不斷成熟時,一年生枝條韌皮部和樹葉也逐漸生長和發(fā)育,這3個轉(zhuǎn)運(yùn)體基因也有可能在將果實(shí)內(nèi)K+向一年生枝條韌皮部、樹葉或樹干的轉(zhuǎn)移和分配中發(fā)揮一定的作用。此外,PpeKUP14~PpeKUP16基因在幼苗根、莖和葉中均有表達(dá)(低于PpeKUP5),但在桃花開放后不同時期均不表達(dá),PpeKUP14~PpeKUP16在霞脆桃果實(shí)發(fā)育不同時期亦檢測不到,且對外界鉀肥施用沒有響應(yīng),充分表明這3個轉(zhuǎn)運(yùn)體可能在桃花開放和果實(shí)形成及發(fā)育過程中不發(fā)揮作用,而可能參與其他生命過程。

    猜你喜歡
    鉀素成熟度鉀肥
    我國在境外首個百萬噸級鉀肥項(xiàng)目竣工
    釋放鉀肥儲備正當(dāng)時
    產(chǎn)品制造成熟度在型號批生產(chǎn)風(fēng)險管理中的應(yīng)用
    整機(jī)產(chǎn)品成熟度模型研究與建立
    鉀肥迎來零關(guān)稅
    不同成熟度野生水茄果實(shí)的種子萌發(fā)差異研究
    種子(2018年9期)2018-10-15 03:14:04
    剛好夠吃6天的香蕉
    姍姍來遲的鉀肥大合同
    長期定位施肥對夏玉米鉀素吸收及土壤鉀素動態(tài)變化的影響
    鉀素對玉米莖腐病抗性反應(yīng)中糖類物質(zhì)代謝的影響
    亚洲中文字幕日韩| 多毛熟女@视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 黄色视频不卡| 一区二区三区四区激情视频| 考比视频在线观看| 日韩大片免费观看网站| 91字幕亚洲| 精品国产一区二区久久| 香蕉丝袜av| 亚洲精华国产精华精| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 精品国产乱码久久久久久男人| 午夜91福利影院| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产亚洲精品一区二区www | 51午夜福利影视在线观看| 一本大道久久a久久精品| 久久久水蜜桃国产精品网| 成人影院久久| 亚洲,欧美精品.| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产成人系列免费观看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 日韩电影二区| 国产片内射在线| 欧美黑人欧美精品刺激| 色视频在线一区二区三区| 久久久久精品人妻al黑| 大陆偷拍与自拍| 成年人免费黄色播放视频| 男女无遮挡免费网站观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久精品国产综合久久久| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 黄色毛片三级朝国网站| 伊人亚洲综合成人网| 久久久久久人人人人人| e午夜精品久久久久久久| 国产野战对白在线观看| 成人三级做爰电影| 国产伦理片在线播放av一区| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久久国产精品人妻一区二区| 少妇的丰满在线观看| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲成国产人片在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 美女高潮到喷水免费观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 黄色a级毛片大全视频| 99国产综合亚洲精品| 久热爱精品视频在线9| 十八禁人妻一区二区| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产精品 欧美亚洲| 欧美激情极品国产一区二区三区| 午夜福利影视在线免费观看| 午夜福利在线观看吧| 999久久久国产精品视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 成年人免费黄色播放视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产av又大| 国产在线一区二区三区精| 免费av中文字幕在线| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 母亲3免费完整高清在线观看| 精品第一国产精品| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 午夜成年电影在线免费观看| 99热国产这里只有精品6| 人妻久久中文字幕网| 精品少妇久久久久久888优播| 老司机影院成人| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美激情久久久久久爽电影 | 伊人亚洲综合成人网| 自线自在国产av| 亚洲avbb在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 久久久国产成人免费| 搡老岳熟女国产| 精品第一国产精品| 电影成人av| 桃红色精品国产亚洲av| 无遮挡黄片免费观看| 国产高清videossex| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲中文字幕日韩| 一本色道久久久久久精品综合| 免费在线观看完整版高清| 99国产精品一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品久久久人人做人人爽| netflix在线观看网站| 国产av又大| 他把我摸到了高潮在线观看 | 国产亚洲欧美精品永久| www.av在线官网国产| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品久久久久久电影网| 亚洲av美国av| 下体分泌物呈黄色| 亚洲国产av新网站| 国产精品影院久久| 日韩大片免费观看网站| 男女午夜视频在线观看| 一级毛片女人18水好多| 中国美女看黄片| 精品一区二区三卡| 精品国产国语对白av| 久久久国产成人免费| 国产不卡av网站在线观看| 欧美性长视频在线观看| 国产成人av教育| 深夜精品福利| 九色亚洲精品在线播放| 中文字幕色久视频| 国产成人精品在线电影| 国产成人欧美| 丰满迷人的少妇在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 精品人妻一区二区三区麻豆| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产精品久久久人人做人人爽| 最近最新免费中文字幕在线| 美女大奶头黄色视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 91成人精品电影| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 黄片小视频在线播放| 99精品久久久久人妻精品| 深夜精品福利| 蜜桃国产av成人99| 人人澡人人妻人| 脱女人内裤的视频| 亚洲欧美激情在线| 男人添女人高潮全过程视频| 两个人免费观看高清视频| 美女午夜性视频免费| 天天影视国产精品| 天天影视国产精品| 啦啦啦免费观看视频1| 国产又色又爽无遮挡免| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美久久黑人一区二区| 国产精品偷伦视频观看了| 国产伦理片在线播放av一区| 妹子高潮喷水视频| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产熟女午夜一区二区三区| www.999成人在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 午夜免费鲁丝| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲av电影在线进入| 国产精品影院久久| 又黄又粗又硬又大视频| 少妇的丰满在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 九色亚洲精品在线播放| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲国产av新网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产欧美日韩一区二区三 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 99久久综合免费| 久9热在线精品视频| videosex国产| 少妇精品久久久久久久| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜激情久久久久久久| 男女边摸边吃奶| 午夜福利,免费看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 美女福利国产在线| 亚洲精品乱久久久久久| 国产成人精品久久二区二区91| 一区福利在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 免费高清在线观看日韩| 日韩一区二区三区影片| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲人成77777在线视频| 天天影视国产精品| 欧美成人午夜精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产免费福利视频在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 丝袜在线中文字幕| netflix在线观看网站| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产男女超爽视频在线观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| a级毛片黄视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美日韩黄片免| 午夜91福利影院| 国产亚洲欧美精品永久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 女人久久www免费人成看片| 国产日韩欧美在线精品| 久久久久网色| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久这里只有精品19| cao死你这个sao货| 久久中文看片网| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国精品久久久久久国模美| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲欧美色中文字幕在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 成人三级做爰电影| 亚洲天堂av无毛| 欧美xxⅹ黑人| 99国产精品免费福利视频| 97在线人人人人妻| 亚洲五月色婷婷综合| 国产免费一区二区三区四区乱码| 2018国产大陆天天弄谢| 制服诱惑二区| 国产亚洲精品久久久久5区| 18禁国产床啪视频网站| 丁香六月天网| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品久久久久成人av| 我的亚洲天堂| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 在线观看免费高清a一片| 成人国产一区最新在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| av欧美777| 一二三四社区在线视频社区8| 18禁国产床啪视频网站| 国产免费现黄频在线看| 免费在线观看完整版高清| 久久狼人影院| 十八禁高潮呻吟视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 黄色视频在线播放观看不卡| 热re99久久国产66热| av天堂久久9| av又黄又爽大尺度在线免费看| 一进一出抽搐动态| 在线观看免费日韩欧美大片| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 色精品久久人妻99蜜桃| 三级毛片av免费| 脱女人内裤的视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 高清在线国产一区| 一本色道久久久久久精品综合| 视频区图区小说| 久久性视频一级片| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 黑丝袜美女国产一区| 欧美日本中文国产一区发布| 一区福利在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲精品第二区| 亚洲av成人一区二区三| av国产精品久久久久影院| 国产一区二区 视频在线| av网站在线播放免费| 日韩大片免费观看网站| 午夜精品久久久久久毛片777| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲第一青青草原| av欧美777| 美女午夜性视频免费| 丝袜喷水一区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 纯流量卡能插随身wifi吗| 不卡一级毛片| 国产亚洲一区二区精品| 日韩 亚洲 欧美在线| www日本在线高清视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 91精品国产国语对白视频| 久久久久精品国产欧美久久久 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| √禁漫天堂资源中文www| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲国产欧美在线一区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 99香蕉大伊视频| 亚洲天堂av无毛| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 日本av免费视频播放| 香蕉国产在线看| 欧美日韩视频精品一区| 这个男人来自地球电影免费观看| 天天操日日干夜夜撸| 欧美精品一区二区大全| 性色av一级| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 黄色 视频免费看| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美 日韩 精品 国产| 中文字幕制服av| 亚洲精品国产av蜜桃| 纯流量卡能插随身wifi吗| 18禁观看日本| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲成人免费av在线播放| 99久久人妻综合| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美精品高潮呻吟av久久| 美女中出高潮动态图| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久久欧美国产精品| 宅男免费午夜| 欧美日本中文国产一区发布| 性高湖久久久久久久久免费观看| 午夜福利免费观看在线| 大陆偷拍与自拍| 在线观看免费视频网站a站| 91成人精品电影| 亚洲精品国产av蜜桃| 自线自在国产av| 日本91视频免费播放| 丁香六月天网| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲精品一区蜜桃| 午夜免费成人在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 老熟妇仑乱视频hdxx| av在线app专区| 国产真人三级小视频在线观看| 考比视频在线观看| 十八禁网站免费在线| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 老司机影院毛片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 黄色视频,在线免费观看| 国产在线视频一区二区| 99精国产麻豆久久婷婷| 交换朋友夫妻互换小说| 国产色视频综合| av网站免费在线观看视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 中文欧美无线码| 男女之事视频高清在线观看| 中国美女看黄片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧洲日产国产| 看免费av毛片| 我要看黄色一级片免费的| 日韩 亚洲 欧美在线| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 热99国产精品久久久久久7| 免费少妇av软件| 欧美精品一区二区大全| 国产精品欧美亚洲77777| 97人妻天天添夜夜摸| 两个人免费观看高清视频| 亚洲一区二区三区欧美精品| 狂野欧美激情性xxxx| 脱女人内裤的视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产一级毛片在线| 欧美97在线视频| 五月开心婷婷网| 国产精品 国内视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 人妻久久中文字幕网| 中文字幕av电影在线播放| 欧美日韩精品网址| 嫩草影视91久久| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产精品一二三区在线看| av超薄肉色丝袜交足视频| 热99国产精品久久久久久7| 欧美激情 高清一区二区三区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久久久国内视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产av一区二区精品久久| 操美女的视频在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 日韩视频在线欧美| 色精品久久人妻99蜜桃| 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜精品国产一区二区电影| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲精品美女久久av网站| 麻豆av在线久日| 婷婷丁香在线五月| 亚洲成人手机| 性色av一级| 欧美变态另类bdsm刘玥| 黄频高清免费视频| 一区二区av电影网| 我的亚洲天堂| 9热在线视频观看99| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲av国产av综合av卡| 中文字幕色久视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 丝袜在线中文字幕| av视频免费观看在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 一区二区av电影网| 亚洲 欧美一区二区三区| 一级黄色大片毛片| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲国产av新网站| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 69av精品久久久久久 | 国产av国产精品国产| 亚洲三区欧美一区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一进一出抽搐动态| 不卡av一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| 精品人妻1区二区| 成人免费观看视频高清| 成人黄色视频免费在线看| av天堂久久9| 国精品久久久久久国模美| 热re99久久精品国产66热6| 热99久久久久精品小说推荐| cao死你这个sao货| 人妻久久中文字幕网| 热99国产精品久久久久久7| 精品亚洲成国产av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲国产欧美一区二区综合| 免费观看a级毛片全部| 首页视频小说图片口味搜索| 欧美大码av| 精品国产国语对白av| 亚洲全国av大片| 岛国毛片在线播放| 99热国产这里只有精品6| 中文字幕av电影在线播放| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲国产日韩一区二区| 欧美精品一区二区免费开放| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线观看www视频免费| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲美女黄色视频免费看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 超色免费av| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品久久久久久精品古装| 一二三四社区在线视频社区8| 免费观看a级毛片全部| 亚洲精品av麻豆狂野| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 热99re8久久精品国产| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产日韩欧美亚洲二区| 免费观看av网站的网址| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 国产在线免费精品| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲欧美清纯卡通| tube8黄色片| a级毛片在线看网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 婷婷色av中文字幕| 成人免费观看视频高清| 女人精品久久久久毛片| 久久久久网色| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 99国产精品免费福利视频| 女警被强在线播放| 一本大道久久a久久精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 免费看十八禁软件| 久久99热这里只频精品6学生| 老汉色∧v一级毛片| 免费高清在线观看日韩| 老司机福利观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久av网站| 国产成人欧美| 久久国产精品大桥未久av| 91麻豆av在线| 亚洲熟女毛片儿| 国产精品.久久久| 国产男人的电影天堂91| 成年av动漫网址| 精品国产乱码久久久久久小说| 男人舔女人的私密视频| 国产成人免费观看mmmm| 无遮挡黄片免费观看| 人人妻人人澡人人看| 亚洲三区欧美一区| 人成视频在线观看免费观看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 成年人免费黄色播放视频| 搡老乐熟女国产| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 在线看a的网站| 久久青草综合色| 国产真人三级小视频在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 在线观看一区二区三区激情| 亚洲精品自拍成人| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品久久久久久精品电影小说| 十八禁网站免费在线| 国产男女内射视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 色综合欧美亚洲国产小说| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲精品国产av蜜桃| 国产成人精品在线电影| 制服人妻中文乱码| 韩国精品一区二区三区| videosex国产| 中国国产av一级| 国产在线观看jvid| 久久久国产成人免费| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 老熟女久久久| 91国产中文字幕| 色老头精品视频在线观看| 午夜福利免费观看在线| 9色porny在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜老司机福利片| 一区二区三区激情视频| 性色av乱码一区二区三区2| 我的亚洲天堂| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 91精品三级在线观看| 久久久精品94久久精品| 一个人免费看片子| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲欧美激情在线| 欧美在线一区亚洲| 黑人操中国人逼视频| 日韩三级视频一区二区三区| 精品一区在线观看国产| 91成人精品电影| 人人妻人人澡人人看| 久久久久久免费高清国产稀缺| av超薄肉色丝袜交足视频| 我要看黄色一级片免费的| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲视频免费观看视频| 国产男女内射视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久这里只有精品19| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久性视频一级片| 亚洲精品第二区| 老鸭窝网址在线观看| 欧美性长视频在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日日爽夜夜爽网站| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 午夜免费鲁丝| 美女高潮喷水抽搐中文字幕|