• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    美國(guó)西部不同地區(qū)Grayia spinosa核DNA ITS序列分析

    2018-09-10 10:02:25成彩霞蘇雪高婷周璇
    廣西植物 2018年5期

    成彩霞 蘇雪 高婷 周璇

    摘 要:藜科植物Grayia spinosa是美國(guó)西部地區(qū)的特有種,多生長(zhǎng)在干旱鹽堿地,具有重要的生態(tài)價(jià)值。該研究測(cè)定了采自美國(guó)西部猶他州G. spinosa 的nrDNA ITS序列,與GenBank中已提交的G. spinosa 的所有ITS序列以及G. spinosa的四個(gè)近緣種作為外類群進(jìn)行比較,分析了美國(guó)西部不同地區(qū)G. spinosa ITS序列的一級(jí)結(jié)構(gòu)與其RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的變異規(guī)律。結(jié)果表明:所有G. spinosa樣品的nrDNA ITS序列長(zhǎng)度在611~623 bp之間,GC含量在60.35%~61.0%之間,序列間共存在22個(gè)變異位點(diǎn),5個(gè)為簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)。各樣品間的遺傳距離在0.001 8~0.008 9之間,不同樣品間的遺傳距離與地理距離的相關(guān)性不顯著。鄰接法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示所有G. spinosa聚為一大支,與外類群形成明顯分支。此外,利用RNAfold在線軟件預(yù)測(cè)了G. spinosa ITS序列的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu),將8個(gè)G. spinosa 樣品的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)根據(jù)構(gòu)型差異大體上分為四類,分別記為type A,B,C和D四類,主要變異出現(xiàn)在ITS1和ITS2區(qū)。所不同的是在G. spinosa ITS的一級(jí)結(jié)構(gòu)分析中GSNE1與GSWA8體現(xiàn)出更近的親緣關(guān)系,但二者的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)差異明顯,同時(shí)GSNE2、GSUT3、GSUT4、GSCA5、GSCA6、GSCO7在ITS序列一級(jí)結(jié)構(gòu)分析中也體現(xiàn)出較近的親緣關(guān)系,但是他們的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)差異明顯。這可能與ITS序列的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)在進(jìn)化中體現(xiàn)出更大的保守性有關(guān)。

    關(guān)鍵詞:Grayia spinosa,ITS 序列變異,二級(jí)結(jié)構(gòu),藜科

    中圖分類號(hào):Q949.745.1

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1000-3142(2018)05-0617-09

    Abstract:Grayia spinosa,a species endemic to the Western United States,is mainly distributed in arid and saline areas and has important ecological value. ITS sequence of G. spinosa collected from Utah State of the United States was sequenced,and aligned with other sequences from GenBank of this species by Blast. The relationship among G. spinosa from the West United States were analyzed based on ITS sequences and four related species of Grayia were selected as outgroup. ITS sequence variation of G. spinosa and its RNA secondary structure was analyzed in different regions of the United States. The results showed that the length of ITS sequences ranged from 611 bp to 623 bp and the GC contents was 60.35%-61.0%. There were 22 variants sites and five parsimony informative sites in the ITS sequences of G. spinosa from different regions in the United States. Genetic distance ranged from 0.001 8 to 0.008 9 between samples,the correlation was not significant between genetic distances and geographical distances of different samples. The phylogenetic tree constructed by Neighbor-joining method indicated that all samples of G. spinosa were clustered together,forming a distinct branch with the outer group. In addition,the RNA secondary structure of G. spinosa ITS sequence was predicted by RNA fold online software. The RNA secondary structure of G. spinosa samples were roughly divided into four types according to the configuration differences,which were named type A,B,C and D. Unlike the primary structure analysis of G. spinosa ITS sequences,RNA secondary structure did not reflect the more related phylogenetic relationships between GSNE1 and GSWA8. GSUT3,GSUT4,GSCA5,GSCA6 and GSCO7 indicated closer phylogenetic relationships in the primary structure analysis of ITS sequences,but their RNA secondary structures were significantly different,which was related to the higher conservation of RNA secondary structure.

    Key words:Grayia spinosa,ITS sequence variation,secondary structure,Chenopodiaceae

    藜科植物是被子植物的大科之一,是干旱、荒漠生態(tài)環(huán)境中的主要植物類群,全球共有130 屬,約1 500種。我國(guó)的藜科植物資源相當(dāng)豐富,尤其是在以干旱、鹽堿土為主的西北部大面積生態(tài)脆弱區(qū),藜科植物成為其植被的最重要構(gòu)成部分之一,具有十分重要的生態(tài)維持與建設(shè)價(jià)值。參考中國(guó)植物志英文版發(fā)現(xiàn),豬毛菜屬、鹽爪爪屬、堿蓬屬等為我國(guó)西北地區(qū)的主要藜科植物,這些類群大多為草本,植株低矮、葉片較小,花很小無(wú)觀賞性,生長(zhǎng)于農(nóng)田周?chē)虺鞘芯G化區(qū)域,而且多以雜草對(duì)待。Grayia spinosa為藜科中少有的灌木,植物體較大,壽命長(zhǎng),花被紅色、大而鮮艷,不同于大多數(shù)藜科植物,具有一定的觀賞價(jià)值。此外,G. spinosa耐干旱、鹽堿及貧瘠的能力極強(qiáng),是植被恢復(fù)重建的極好材料,但僅分布于北美,美國(guó)西部是它最重要的分布區(qū)。

    近年來(lái),隨著分子標(biāo)記技術(shù)的迅速發(fā)展,DNA序列分析被廣泛應(yīng)用于植物系統(tǒng)發(fā)育分析和遺傳多樣性研究。與此同時(shí),由這些分子標(biāo)記所揭示的DNA等生物大分子的變異式樣及特征成為了研究了解一個(gè)物種的最為基本和重要的環(huán)節(jié),并為進(jìn)一步的科學(xué)研究提供基礎(chǔ)。核DNA ITS序列是介于18S至26S之間的非編碼內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū),包含一個(gè)5.8S編碼區(qū),由于ITS序列在進(jìn)化過(guò)程中受到的選擇壓力小且進(jìn)化速率較快等特點(diǎn),被廣泛用于屬及種水平等較低分類階元親緣關(guān)系和系統(tǒng)進(jìn)化研究(Jaehav & Shama,2014;Liang & Wu,2017;Guo et al,2016)。近年來(lái),ITS序列也開(kāi)始應(yīng)用于種內(nèi)系統(tǒng)關(guān)系的研究和藥用植物真?zhèn)纹疯b定等方面(蔣玲艷和郭志剛,2009;Chen et al,2010;Khan et al,2014)。同時(shí),ITS序列雖然在部分區(qū)域出現(xiàn)較高的突變率,卻可能會(huì)通過(guò)堿基補(bǔ)償替換等方式抵消這些位點(diǎn)的突變對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的干擾,使得在進(jìn)化過(guò)程中其RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)體現(xiàn)出更大的保守性。因此,本研究通過(guò)對(duì)美國(guó)西部不同地區(qū)G. spinosa的ITS序列一級(jí)結(jié)構(gòu)及其RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的分析,以期了解以下問(wèn)題:(1)不同G. spinosa樣品 ITS序列的變異規(guī)律。(2)G. spinosa ITS一級(jí)結(jié)構(gòu)與其RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化是否一致?

    1 材料

    鑒于該研究的主要目的是探討G. spinosa分布范圍內(nèi)不同區(qū)域ITS序列的變異樣式,取樣地點(diǎn)的選擇以涵蓋其主要分布區(qū)為準(zhǔn),并且在每個(gè)地區(qū)盡可能取2~3個(gè)不同地點(diǎn)的材料,凡NCBI已有記錄的樣點(diǎn)不再另行采樣而直接下載其序列的相關(guān)信息(包括分布在科羅拉多、加利福尼亞、內(nèi)華達(dá)、華盛頓和猶他州等G. spinosa主要分布區(qū)的所有G. spinosa ITS序列共7個(gè)樣品)。樣品GSUT4由朱格麟教授采自猶他州一野外居群,葉片干燥后測(cè)序。另外,選擇與G. spinosa親緣關(guān)系較近的G. brandegeei、Holmbergia tweedii、Atriplex joaquinana和Chenopodium fremontii為外類群,它們的來(lái)源、產(chǎn)地和序列登錄號(hào)見(jiàn)表1。

    2 方法

    2.1 基因組DNA的提取

    對(duì)采自猶他州的G. spinosa樣品用變色硅膠干燥儲(chǔ)藏,帶回實(shí)驗(yàn)室后采用改良的CTAB法(Doyle,1987)提取基因組總DNA。

    2.2 ITS序列的PCR擴(kuò)增

    采用ITS通用引物,即ITS1(5′AGA AGT CGT AAC AAG GTT TCC GTA GC 3′)和 ITS4(5′TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC 3′)。PCR反應(yīng)總體系為20 μL,其中PCR Mix(寶生物公司)10 μL,上下游引物(20 μmol·L-1)及DNA模板各1μL,加ddH2O 至 20 μL 。擴(kuò)增程序:(1)70 ℃預(yù)變性4 min;(2)94 ℃變性1 min,退火溫度52 ℃,退火1 min;(3)72 ℃延伸1 min,循環(huán)35次;(4)保持72 ℃ 4 min;(5)4 ℃保存PCR產(chǎn)物。

    2.3 PCR產(chǎn)物檢測(cè)與測(cè)序

    PCR產(chǎn)物在經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳、EB(溴化乙錠)染色、在紫外燈檢測(cè)后,送蘇州金唯智公司進(jìn)行測(cè)序(為雙向測(cè)序,結(jié)果進(jìn)行互相驗(yàn)證)。

    2.4 數(shù)據(jù)處理

    利用NCBI中的Blast進(jìn)行序列比對(duì),并選擇與G. spinosa親緣關(guān)系近的四個(gè)種作為外類群。用DNAstar軟件包中的EditSeq計(jì)算ITS序列長(zhǎng)度與GC含量,用DNAman計(jì)算遺傳距離,R軟件包vegan做Mantel檢驗(yàn)。用Mage6.0計(jì)算變異位點(diǎn)、簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)并用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(利用1 000次重復(fù)的自展分析檢驗(yàn)各分支的置信度)。利用RNAfold(RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)在線預(yù)測(cè)軟件,http://rna.tbi.univie.ac.at/cgi-bin/RNAfold.cgi)預(yù)測(cè)G. spinosa的 ITS序列的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu),該軟件采用最小自由能原理,參數(shù)設(shè)為默認(rèn)值。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果

    利用1.5%的瓊脂糖電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物,結(jié)果見(jiàn)圖1。ITS序列條帶清晰,與DL2000 bp的DNA Marker比對(duì)后長(zhǎng)度在500~750 bp,符合ITS序列的長(zhǎng)度范圍。

    3.2 不同樣品ITS序列比較

    對(duì)8個(gè)G. spinosa樣品進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),除GSCA6的ITS序列不完整(575 bp)外,其余來(lái)自不同地區(qū)的7個(gè)G. spinosa 樣品ITS區(qū)(包括ITS1、5.8S和ITS2序列)長(zhǎng)度范圍為 611~623 bp,長(zhǎng)度變化12 bp。其中各樣品ITS1區(qū)長(zhǎng)度除GSNE1為223 bp外其他均為222 bp,長(zhǎng)度變化不大。多數(shù)樣品5.8S區(qū)的長(zhǎng)度為164 bp,僅GSWA8出現(xiàn)了3個(gè)堿基的缺失。美國(guó)西部不同地區(qū)G. spinosa ITS2區(qū)的變化范圍在225~237 bp之間,但GSCA6的ITS2區(qū)長(zhǎng)度僅為189 bp。ITS序列的GC含量為60.35%~61.0%,ITS1與ITS2的GC量相近且較5.8S高(表 2)。ITS區(qū)全序列排列后長(zhǎng)度為623 bp,共22個(gè)變異位點(diǎn),5個(gè)簡(jiǎn)約信息位點(diǎn),其中ITS1區(qū)含5個(gè)變異位點(diǎn),位點(diǎn)79、103、113為簡(jiǎn)約信息位點(diǎn),位點(diǎn)88為堿基G顛換為堿基T,且包含有一個(gè)簡(jiǎn)并堿基,位點(diǎn)111為堿基C轉(zhuǎn)換為堿基T。 5.8S區(qū)含3個(gè)變異位點(diǎn),無(wú)簡(jiǎn)約信息位點(diǎn),其中位點(diǎn)223、248為堿基C轉(zhuǎn)換為T(mén),位點(diǎn)266為堿基G轉(zhuǎn)換為堿基C。ITS2區(qū)有14個(gè)變異位點(diǎn),其中除位點(diǎn)425、616為簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)外,其余均為變異位點(diǎn),其中位點(diǎn)563、590、601、614、615為堿基G-C之間的轉(zhuǎn)換,位點(diǎn)613為堿基T顛換為堿基G,448為堿基C顛換為堿基T,位點(diǎn)600出現(xiàn)了堿基G-C間的轉(zhuǎn)換以及堿基G-T間的顛換。位點(diǎn)542、622為堿基G-A間的顛換,位點(diǎn)617為堿基A顛換為堿基C,位點(diǎn)621為堿基C顛換為堿基A。表3結(jié)果表明,各樣品間的長(zhǎng)度變化主要出現(xiàn)在ITS2區(qū)。GC含量ITS2區(qū)較高,ITS1區(qū)次之,5.8S區(qū)較低。此外,簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)ITS1區(qū)較ITS2區(qū)多一個(gè),而就變異位點(diǎn)而言,ITS2區(qū)變異位點(diǎn)較ITS1區(qū)多,5.8S區(qū)除個(gè)別樣品可能存在有變異位點(diǎn)外,其他位點(diǎn)均未出現(xiàn)變異。因此,ITS序列的主要變異也出現(xiàn)在ITS2區(qū)。G. spinosa的ITS序列堿基的主要變化是堿基的缺失,堿基的轉(zhuǎn)換主要出現(xiàn)在G-C間,堿基的顛換主要出現(xiàn)在G-T間,而與分布區(qū)間并沒(méi)有表現(xiàn)出相關(guān)聯(lián)系。整個(gè)ITS區(qū)變異位點(diǎn)與簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)分別占總位點(diǎn)的3.53%和0.80%。

    3.3 樣品間遺傳距離分析

    G.spinosa各樣品間的遺傳距離在0.0 018~0.008 9之間(表4),其中GSNE1與GSWA8、GSNE2與GSUT4、GSUT3與GSUT4、GSUT4與GSCA5、GSUT4與GSCA6間的遺傳距離最小均為0.001 8。GSCO7與GSWA8 間的遺傳距離最大,為0.008 9。外類群與G. spinosa各樣品間的遺傳距離均較G. spinosa各樣品間的遺傳距離大,在0.010 7~0.081 5之間。GSNE1與GBCO9間的遺傳距離相對(duì)較小,為0.010 7,GSWA8與CFCA12間的遺傳距離最大為0.081 5。對(duì)不同產(chǎn)地G. spinosa地理距離和遺傳距離的Mantel檢驗(yàn)表明,來(lái)自不同地區(qū)G. spinosa各樣品間的遺傳距離與地理距離的相關(guān)性不顯著(R2=0.325,P=0.359)。

    3.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析

    鄰接法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)見(jiàn)圖2,各分支的支持率均達(dá)到50以上。8個(gè)G. spinosa樣品聚為一支,支持率為93,并與同屬的GBCO9為姊妹群關(guān)系。其中,GSUT3,GSUT4,GSCA5,GSCA6,GSCO7與GSNE2聚為一支,GSNE1與GSWA8聚為一支,但均分布于內(nèi)華達(dá)地區(qū)的GSNE1與GSNE2卻分屬于這兩支。由此可見(jiàn),分布在同一地區(qū)的G. spinosa并未表現(xiàn)出更近的親緣關(guān)系。

    由于GSCA6未提交完整ITS2序列,且GSCO7與GSWA8(GSCO7和GSWA8的5.8S區(qū)出現(xiàn)了堿基的缺失與轉(zhuǎn)換)可能存在假基因,因此我們僅以ITS1區(qū)序列重新構(gòu)建了鄰接樹(shù)(圖3)。結(jié)果與基于ITS全序列構(gòu)建的鄰接樹(shù)的分支結(jié)構(gòu)相同,不同僅表現(xiàn)在支持率較低、分支長(zhǎng)度較短。

    3.5 ITS序列RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

    利用在線軟件RNAfold對(duì)美國(guó)西部不同分布區(qū)G. spinosa ITS的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè)(圖4)。ITS1區(qū)與ITS2區(qū)均含有封閉的環(huán)狀結(jié)構(gòu),8個(gè)G. spinosa ITS序列的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)依它們的相似狀況大體上可以分為四類,分別記為type A,B,C和D。GSNE1、GSNE2與GSUT3三者的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的構(gòu)象相似記為type A。

    RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象相似的GSUT4和GSCA6記為type B,他們?cè)?.8S區(qū)與ITS2區(qū)均出現(xiàn)了差異,且GSCA6的最小自由能更低,推測(cè)與GSCA6 ITS序列的缺失有關(guān)。GSCA5與GSWA8(type C)的構(gòu)象相似,主要差異出現(xiàn)在ITS1區(qū),由于GSWA8的最小自由能較GSCA5的高,因此推測(cè)GSCA5較GSWA8的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。GSCO7(type D)在ITS1區(qū)出現(xiàn)了兩個(gè)封閉的環(huán),其RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)均不同于以上三類構(gòu)象,在ITS1區(qū)出現(xiàn)了兩個(gè)封閉的環(huán)??傮w而言,G. spinosa ITS序列RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)在ITS1,ITS2區(qū)以及5.8S區(qū)均出現(xiàn)了差異。雖然8個(gè)G. spinosa ITS樣品彼此間RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的相似性狀況與一級(jí)結(jié)構(gòu)的并不相同,但同樣與其地理分布區(qū)間沒(méi)有體現(xiàn)出一定的相關(guān)性。

    4 討論

    ITS序列是近年來(lái)用于探討植物近緣屬間、種間系統(tǒng)關(guān)系和種內(nèi)變異的重要分子標(biāo)記。被子植物的ITS區(qū)長(zhǎng)度比較穩(wěn)定,包括5.8S rDNA在內(nèi),總長(zhǎng)度為600~700 bp。該研究序列分析結(jié)果顯示,8個(gè)G. spinosa ITS序列的長(zhǎng)度僅GSNE1為623 bp,其余均為622 bp,符合被子植物ITS序列長(zhǎng)度的變化范圍。G. spinosa ITS1區(qū)序列長(zhǎng)度保守,除GSNE1為223 bp外,其余均為222 bp,ITS序列長(zhǎng)度的主要變化出現(xiàn)在ITS2區(qū),多數(shù)樣品5.8S區(qū)長(zhǎng)度為164 bp,但是GSWA8為161 bp。Baldwin(1992)最早對(duì)被子植物ITS序列假基因的研究表明:被子植物5.8 S序列一般長(zhǎng)度都在163~164 bp之間,若出現(xiàn)了插入或缺失就有可能形成假基因(人們把含有不具編碼功能5.8S區(qū)ITS序列定義為ITS假基因)。G. spinosa ITS序列包括22個(gè)變異位點(diǎn),說(shuō)明ITS序列在G. spinosa系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析中能夠提供足夠的證據(jù)。5.8S區(qū)最為保守,無(wú)簡(jiǎn)約信息位點(diǎn),變異位點(diǎn)少。從ITS序列的變異位點(diǎn)來(lái)看,G. spinosa共有22個(gè)變異位點(diǎn),這些變異位點(diǎn)主要存在于ITS2區(qū),包含14個(gè)變異位點(diǎn),占總變異位點(diǎn)數(shù)的63.63%,ITS1區(qū)僅有5個(gè)變異位點(diǎn),5.8S區(qū)最為保守,含3個(gè)變異位點(diǎn),無(wú)簡(jiǎn)約信息位點(diǎn),因此僅以ITS1區(qū)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)并不能提供足夠信息量。屈良鵠和陳月琴(1999)通過(guò)對(duì)不同生物類群的ITS序列的比較得出:被子植物大多數(shù)科屬I(mǎi)TS序列的種間差異值為1.2%~10.2%,曾明等(2003)和車(chē)建等(2007)在利用ITS序列分別對(duì)葛根和西紅花正偽品的鑒定中均認(rèn)為ITS序列種內(nèi)差異值小于1%。該研究測(cè)得5個(gè)地區(qū)的8個(gè)G. spinosa樣品在ITS區(qū)的堿基差異為3.53 %,表現(xiàn)出較大的遺傳分化。同樣,在對(duì)同一地區(qū)的G. spinosa樣品系統(tǒng)發(fā)育分析中得出分布在內(nèi)華達(dá)的GSNE1與GSNE2、猶他州的GSUT3與GSUT4以及分布在加利福利亞的GSCA5與GSCA6,相互間的遺傳距離除GSUT3與GSUT4外,其余并非最小,采用鄰接法構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),顯示出同一地區(qū)的GSNE1與GSNE2也未聚在一起。這與地理距離與遺傳距離Mantel檢驗(yàn)的結(jié)果相吻合。

    由于RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)比一級(jí)結(jié)構(gòu)更具保守性,因此可以通過(guò)二級(jí)結(jié)構(gòu)反映一級(jí)結(jié)構(gòu)所反映不出的生物信息。該研究對(duì)8個(gè)G. spinosa樣品的ITS序列RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn)主要差異出現(xiàn)在ITS1區(qū)和ITS2區(qū),這與ITS序列一級(jí)結(jié)構(gòu)分析中其主要的變異位于ITS1區(qū)和ITS2區(qū)的結(jié)論相一致。

    但是,有研究表明多數(shù)真核生物中ITS1區(qū)的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)具有較高保守性(Musters et al,1990),并且3′端無(wú)論是在ITS序列一級(jí)結(jié)構(gòu)還是其RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)中都比5′端更保守。而在我們的研究中對(duì)8個(gè)G. spinosa樣品的ITS序列RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的比較中發(fā)現(xiàn)僅GSUT4與GSCA6的ITS2區(qū)的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)與其他6個(gè)樣品較大的不同,較ITS1區(qū)RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)更為保守,這與ITS2區(qū)在進(jìn)化中所受的選擇壓力較高有關(guān)。該研究對(duì)ITS序列一級(jí)結(jié)構(gòu)與其RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的分析還發(fā)現(xiàn),在ITS序列一級(jí)結(jié)構(gòu)系統(tǒng)發(fā)育分析中GSNE1與GSWA8體現(xiàn)出更近的親緣關(guān)系,但是二者的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)差異明顯,分屬于2個(gè)不同的類型中,同時(shí)GSNE2,GSUT3,GSUT4,GSCA5,GSCA6,GSCO7在ITS序列一級(jí)結(jié)構(gòu)分析中也體現(xiàn)了較近的親緣關(guān)系,但是在它們的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)分析中發(fā)現(xiàn),GSNE2卻與在一級(jí)結(jié)構(gòu)分析中處在另一分支上的GSNE1的RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)基本一致,相似的情況也出現(xiàn)在GSWA8與GSCA5之間。研究發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)若位于莖區(qū),則有可能使二級(jí)結(jié)構(gòu)改變,若突變發(fā)生在環(huán)上或自由基則對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響不大,這可能與環(huán)狀結(jié)構(gòu)與維持RNA的功能有關(guān)。比較該研究中 8個(gè)G. spinosa樣品ITS一級(jí)結(jié)構(gòu)的突變位點(diǎn)僅ITS1區(qū)的位點(diǎn)88、103、111,ITS2區(qū)的位點(diǎn)621、622位于莖區(qū),其余均位于環(huán)上,則對(duì)其二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響不大??傊?,G. spinosa樣品ITS一級(jí)結(jié)構(gòu)與其RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化并未表現(xiàn)出完美的一一對(duì)應(yīng)關(guān)系,RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)體現(xiàn)出了更高的保守性。

    參考文獻(xiàn):

    BARAKET G,SADDOUD O,CHATTI K,2009. Sequence analysis of the internal transcribed spacers (ITSs) region of the nuclear ribosomal DNA (nrDNA) in fig cultivars (Ficus carica L.) [J]. Sci Hortic,120(1):34-40.

    BALDWIN BG,1992. Phylogenetic utility of the internal transcribed spacers of nuclear ribosomal DNA in plants:an example from the compositae [J]. Mol Phylogenet Evol,1(1): 3.

    CHEN LH,YU Z,JIN HP,2010. Comparison of ribosomal DNA ITS regions among Hippophae rhamnoides from different geographic areas in China [J]. Plant Mol Biol Rep,28(4):635-645.

    CHE J,TANG L,LIU YJ,et al,2007. Identification of Crocus sativus L. and its mixable Chinese medicinal materials by ITS sequence [J]. Chin J Chin Mat Med,32(8):668-671. [車(chē)建,唐琳,劉彥君,等, 2007. ITS序列鑒定西紅花與其易混中藥材 [J]. 中國(guó)中藥雜志,32(8):668-671.]

    DOYLE JA,1987. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue [J]. Phytochem Bull,19(1):11-15.

    GALSTONA W,1973. Flora of North America [J]. America:Bot Gaz:3(7):64-64.

    GIUDICELLIGC,MADER G,SILVAARIAS GA,et al,2017. Secondary structure of nrDNA Internal transcribed spacers as a useful tool to align highly divergent species in phylogenetic studies [J]. Genet Mol Biol,40(1 Suppl. 1):191-199.

    GUO GY,CHEN F,SHI XD,et al,2016. Genetic variation and phylogenetic relationship analysis of Jatropha curcas L. inferred from nrDNA ITS sequences [J]. CR Biol,339:9-10.

    HE YH,2012. Bioinformatic analysis of the Elaeagnaeae nrDNA ITS sequences [D]. Lanzhou:Northwest Normal University:21-65. [何懿菡,2012. 胡頹子科nrDNA ITS序列的生物信息學(xué)分析 [D]. 蘭州:西北師范大學(xué):21-65.]

    JADHAV MS,SHAMA TR,2014. Molecular authentication of Hippophae species and subspecies and their phylogenetic analysis based on nuclear ITS sequences from north western Himalayan region of India [J]. Res J Biotechnol,9(10):62-68.

    JIANG LY,GUO ZG ,WANG C,et al,2009. ITS Sequence analysis of Gynostemma pentaphyllum from different habitats in China [J]. Chin Trad Herb Drugs,7(7):1123-1127. [蔣玲艷,郭志剛,王翀,等,2009. 中國(guó)不同地區(qū)絞股藍(lán)ITS序列分析 [J]. 中草藥,7(7):1123-1127.]

    KANG Y,ZHANG M L,CHEN Z D,2003. A preliminary phylogenetic study of the subgenus Pogonophace (Astragalus) in China based on ITS sequence data [J]. Acta Bot Sin,(45):140-145.

    KHAN G,ZHANG F,GAO Q,et al,2014. Molecular phylogeography and intraspecific divergence of Spiraea alpina (Rosaceae) distributed in the Qinghai-Tibetan Plateau and adjacent regions inferred from nrDNA [J]. Biochem Syst Ecol,57:278-286.

    LI N,JIANG YF,SU X,et al,2016. Genetic diversity and genetic structure of northern margin populations of Hippophae neurocarpa [J]. Guihaia,36(5):557-563. [李霓,蔣嚴(yán)妃,蘇雪,等,2016. 肋果沙棘北緣居群的遺傳多樣性與遺傳結(jié)構(gòu) [J]. 廣西植物,36(5):557-563.]

    LIANG XH,WU YX,2017. Identification of Kalidium species (Chenopodiaceae) by DNA barcoding [J]. Sci Cold Arid Reg,9(1):89-96.

    MUSTERS W,BOON K,SANDE CAVD,et al,1990. Functional analysis of transcribed spacers of yeast ribosomal DNA [J]. Embo J,9(12):3989.

    QU LH,CHEN YQ,1999. Principle and method in the classification key of Biological molecular [J]. J Sun Yat-sen Univ (Nat Sci Ed),(1):1-6. [屈良鵠,陳月琴,1999. 生物分子分類檢索表—原理與方法 [J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),(1):1-6.]

    TAKAMIVA T,WONGSWAD P,TAJIMA N,et al,2011. Identification of dendrobium species used for herbal medicines based on ribosomal DNA internal transcribed spacer sequence [J]. Biol Pharm Bull,34(5):779.

    WANG J,YANG X,YANG ZL,et al,2013. NrDNA ITS sequences analysis and genetic relationship identification of Magnolia officinalis from different geographical region [J]. Guihaia,33(1):35-41. [ 王潔,楊旭,楊志玲,等,2013. 不同產(chǎn)區(qū)厚樸nrDNA ITS序列分析及親緣關(guān)系鑒定 [J]. 廣西植物,33(1):35-41].

    YANG P,SHU JF,CAI SS,et al,2017. NrDNA ITS sequence analysis and genetic relationship of Allium macrostemon from different geographical regions in Guizhou [J]. Plant Sci J,35(2):171-176. [楊鵬,舒建鋒,蔡莎莎,等,2017. 貴州不同產(chǎn)地薤白nrDNA ITS序列分析及親緣關(guān)系研究 [J]. 植物科學(xué)學(xué)報(bào),35(2):171-176.]

    YANO O,HOSHINO T,2007. Phylogenetic relationships and chromosomal evolution of Japanese Fimbristylis (Cyperaceae) using nrDNA ITS and ETS sequence data [J]. Apg Acta Phytotax Geobot ,57(3):205-217.

    ZACHARIAS EH,BALDWIN BG,2010. A molecular phylogeny of North American Atripliceae (Chenopodiaceae),with implications for floral and photosynthetic pathway evolution [J]. Syst Bot,35(4):32-34.

    ZENG M,MA YJ,ZHEN SQ,et al,2003. Studies on ribosomal DNA sequence analyses of Radix puerariae and its sibling species [J]. Chin Pharm J,38(3):173-175. [曾明,馬雅軍,鄭水慶,等,2003. 中藥葛根及其近緣種的rDNA-ITS序列分析 [J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志,38(3):173-175.]

    ZHANG LL,WANG J,WAN XB,et al,2017. Analysis of internal transcribed spacers (its) sequences and phylogenetics of main bast fiber crops [J]. Acta Agron Sin,43(6):862-874. [張力嵐,王俊,萬(wàn)雪貝,等,2017. 主要麻類作物的ITS序列分析與系統(tǒng)進(jìn)化 [J]. 作物學(xué)報(bào),43(6):862-874.]

    ZHU GL,MOSYAKIN SL,CLEMANTS SE,2003. Flora of China Chenopodiaceae [M]. Beijing:Science Press,5:351-414.

    ZHU GL,SANDERSON SC,2017. Genera and a new evolutionary system of world Chenopodiaceae [M]. Beijing:Science Press:56-96.

    ZHOU Y,DU XL,ZHENG X,et al,2017. ITS2 barcode for identifying the officinal rhubarb source plants from its adulterants [J]. Biochem Syst Ecol,70:177-185.

    ZHUO L,2010. A study of phytogeographic distribution and molecular systematics of the subfamily atriplicioideae in China [D]. Urumqi:Xinjiang Agricultural University:19-36. [卓立,2010.中國(guó)濱藜亞科的地理分布與分子系統(tǒng)學(xué)研究 [D]. 烏魯木齊:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué):19-36.]

    热re99久久精品国产66热6| 人妻少妇偷人精品九色| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 熟女av电影| 电影成人av| 成人毛片60女人毛片免费| 大香蕉久久成人网| 国产人伦9x9x在线观看 | 女人久久www免费人成看片| av在线观看视频网站免费| 欧美中文综合在线视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 成人二区视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 成人亚洲精品一区在线观看| 街头女战士在线观看网站| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲精品日本国产第一区| 中文字幕亚洲精品专区| 岛国毛片在线播放| 亚洲美女视频黄频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品在线美女| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品国产三级专区第一集| 色哟哟·www| 在现免费观看毛片| 成年动漫av网址| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | av视频免费观看在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 男女高潮啪啪啪动态图| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲av日韩在线播放| 1024香蕉在线观看| 青草久久国产| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲av综合色区一区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久精品亚洲av国产电影网| 精品第一国产精品| 在线观看www视频免费| 18+在线观看网站| 精品福利永久在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 制服丝袜香蕉在线| 97在线视频观看| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美黄色片欧美黄色片| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久 成人 亚洲| 18禁动态无遮挡网站| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品一国产av| 日本爱情动作片www.在线观看| 成人二区视频| 国产男女超爽视频在线观看| 久久这里只有精品19| 91精品国产国语对白视频| 三上悠亚av全集在线观看| 看免费成人av毛片| 少妇人妻久久综合中文| 老司机亚洲免费影院| 午夜影院在线不卡| 亚洲精品自拍成人| 午夜免费鲁丝| 欧美 日韩 精品 国产| 91精品三级在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 校园人妻丝袜中文字幕| 美女视频免费永久观看网站| 久久久久国产网址| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 99久国产av精品国产电影| 日本欧美视频一区| 超色免费av| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲三区欧美一区| 岛国毛片在线播放| 大码成人一级视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久亚洲国产成人精品v| 街头女战士在线观看网站| 免费观看性生交大片5| 中文字幕制服av| 久久精品人人爽人人爽视色| 777米奇影视久久| 亚洲国产色片| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 人人妻人人澡人人看| 久久精品国产综合久久久| av在线app专区| 久久久久久久久久人人人人人人| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 免费观看无遮挡的男女| 日本欧美视频一区| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品一区在线观看国产| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久久国产精品麻豆| 精品久久久久久电影网| 美女国产高潮福利片在线看| 热99久久久久精品小说推荐| 国产极品粉嫩免费观看在线| www日本在线高清视频| 久久狼人影院| 男人操女人黄网站| 在线观看免费高清a一片| av在线app专区| 满18在线观看网站| 亚洲精品久久午夜乱码| tube8黄色片| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 精品少妇久久久久久888优播| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲av福利一区| 少妇 在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 各种免费的搞黄视频| 9热在线视频观看99| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产成人91sexporn| 中文字幕精品免费在线观看视频| 18+在线观看网站| 观看av在线不卡| 好男人视频免费观看在线| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产在线免费精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 热99国产精品久久久久久7| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 男女无遮挡免费网站观看| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品蜜桃在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲精品一二三| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲精品日本国产第一区| 少妇的逼水好多| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久久久久久精品精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 男女啪啪激烈高潮av片| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 丰满少妇做爰视频| 久久久欧美国产精品| 91aial.com中文字幕在线观看| 精品一区在线观看国产| 久久人人爽人人片av| 免费在线观看完整版高清| 亚洲精品aⅴ在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 成人毛片a级毛片在线播放| 制服人妻中文乱码| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲精品视频女| av国产精品久久久久影院| 99久久人妻综合| 人成视频在线观看免费观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 免费少妇av软件| 国产黄色免费在线视频| 一本久久精品| 欧美人与善性xxx| 性少妇av在线| 妹子高潮喷水视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产精品 欧美亚洲| 欧美成人午夜精品| videosex国产| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久久精品区二区三区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产片内射在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 丰满乱子伦码专区| 老女人水多毛片| 午夜日本视频在线| 一本大道久久a久久精品| 亚洲第一青青草原| 午夜激情久久久久久久| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产黄频视频在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久av网站| 亚洲av.av天堂| 亚洲精品第二区| 国产高清不卡午夜福利| 综合色丁香网| 人妻 亚洲 视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 秋霞在线观看毛片| 制服丝袜香蕉在线| 嫩草影院入口| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 在线观看三级黄色| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 春色校园在线视频观看| 伦理电影大哥的女人| 一级毛片电影观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产黄色免费在线视频| 一本久久精品| 国产精品.久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美成人午夜免费资源| 国产 一区精品| 亚洲一区中文字幕在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 91精品国产国语对白视频| 考比视频在线观看| 大码成人一级视频| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美日韩一级在线毛片| 国产乱来视频区| 精品国产乱码久久久久久男人| 人人澡人人妻人| 在线观看一区二区三区激情| 观看av在线不卡| 水蜜桃什么品种好| 国产免费福利视频在线观看| 好男人视频免费观看在线| 熟女av电影| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲av免费高清在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 9色porny在线观看| tube8黄色片| 美女主播在线视频| 性色av一级| 国产免费福利视频在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久av网站| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 三上悠亚av全集在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 一级毛片我不卡| 亚洲久久久国产精品| 一边亲一边摸免费视频| 97在线人人人人妻| 视频区图区小说| 最近2019中文字幕mv第一页| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久韩国三级中文字幕| 日本黄色日本黄色录像| 国产成人av激情在线播放| 国产淫语在线视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 亚洲少妇的诱惑av| 成人国产麻豆网| 国产精品国产三级国产专区5o| 永久网站在线| av电影中文网址| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 一级毛片电影观看| 在线观看免费视频网站a站| av片东京热男人的天堂| 久久久久久人妻| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 99久国产av精品国产电影| 90打野战视频偷拍视频| av在线播放精品| 18禁国产床啪视频网站| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久a久久爽久久v久久| 最新中文字幕久久久久| 晚上一个人看的免费电影| 国产黄色免费在线视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99久久精品国产国产毛片| 国产精品.久久久| 久久综合国产亚洲精品| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久热在线av| 日韩欧美一区视频在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久久久久久久久人人人人人人| 观看美女的网站| 欧美变态另类bdsm刘玥| 夫妻午夜视频| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 久久久久久久久久久免费av| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 尾随美女入室| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 一区二区av电影网| 免费黄网站久久成人精品| 男人操女人黄网站| 国产成人欧美| 免费观看a级毛片全部| 一级黄片播放器| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久久久久久久久人人人人人人| videossex国产| 国产一区二区三区综合在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 十八禁网站网址无遮挡| 高清av免费在线| tube8黄色片| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产淫语在线视频| 国产麻豆69| 女性被躁到高潮视频| 国产高清不卡午夜福利| 一级毛片我不卡| 久久女婷五月综合色啪小说| 一区二区三区四区激情视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲男人天堂网一区| 国产高清国产精品国产三级| 国产又色又爽无遮挡免| 国产片内射在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 欧美另类一区| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 午夜精品国产一区二区电影| 最黄视频免费看| 黄色 视频免费看| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲一区中文字幕在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品免费视频内射| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲三区欧美一区| 香蕉国产在线看| 性色av一级| 亚洲精品,欧美精品| 久久人人爽人人片av| 亚洲精品视频女| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久99精品国语久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 亚洲av国产av综合av卡| 一区二区三区激情视频| 波多野结衣一区麻豆| 美女视频免费永久观看网站| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲伊人色综图| 国产麻豆69| 亚洲国产精品国产精品| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品视频人人做人人爽| 国产片内射在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日本av手机在线免费观看| 国产探花极品一区二区| 午夜福利视频精品| 国产有黄有色有爽视频| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 下体分泌物呈黄色| 国产极品天堂在线| 丝袜在线中文字幕| 少妇人妻 视频| www.自偷自拍.com| 七月丁香在线播放| 国产xxxxx性猛交| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 秋霞伦理黄片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产又色又爽无遮挡免| 2018国产大陆天天弄谢| 欧美变态另类bdsm刘玥| 综合色丁香网| 久久久久久久久久久免费av| 高清欧美精品videossex| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 最新的欧美精品一区二区| 一级a爱视频在线免费观看| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲av综合色区一区| 中文字幕人妻熟女乱码| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲内射少妇av| 另类亚洲欧美激情| 久久久精品94久久精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 精品国产一区二区久久| 日本91视频免费播放| 日韩中字成人| 婷婷色av中文字幕| 男人操女人黄网站| 国产乱人偷精品视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲人成网站在线观看播放| 黄片播放在线免费| av有码第一页| 2021少妇久久久久久久久久久| 天天操日日干夜夜撸| 免费黄色在线免费观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 欧美激情极品国产一区二区三区| 99九九在线精品视频| 香蕉丝袜av| 免费日韩欧美在线观看| 男女边摸边吃奶| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日本色播在线视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产精品免费大片| 欧美+日韩+精品| 中文字幕av电影在线播放| 久久国产精品大桥未久av| 国产精品熟女久久久久浪| 日韩一本色道免费dvd| 在线观看www视频免费| 26uuu在线亚洲综合色| 日日啪夜夜爽| 亚洲欧洲日产国产| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 丝袜美足系列| 天天操日日干夜夜撸| 青春草国产在线视频| 欧美bdsm另类| 国产一区有黄有色的免费视频| 午夜久久久在线观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 精品国产一区二区三区四区第35| 成人漫画全彩无遮挡| 久热这里只有精品99| 天堂8中文在线网| 精品酒店卫生间| 一级毛片我不卡| 中文天堂在线官网| 欧美亚洲日本最大视频资源| 女人精品久久久久毛片| 考比视频在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 日韩中字成人| 亚洲第一av免费看| 青春草亚洲视频在线观看| 大香蕉久久网| 亚洲精品日本国产第一区| 免费人妻精品一区二区三区视频| av线在线观看网站| 欧美中文综合在线视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲欧美一区二区三区久久| 日韩av不卡免费在线播放| 超碰97精品在线观看| 亚洲国产av新网站| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 最近中文字幕2019免费版| 午夜激情av网站| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产乱人偷精品视频| 天美传媒精品一区二区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 99热全是精品| 国产一区二区在线观看av| 成年女人在线观看亚洲视频| 黄色怎么调成土黄色| 黑丝袜美女国产一区| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲天堂av无毛| 久久久a久久爽久久v久久| 国产亚洲最大av| 国产精品.久久久| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲天堂av无毛| 韩国精品一区二区三区| 夫妻午夜视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 老司机亚洲免费影院| 中文欧美无线码| 国产野战对白在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 国产男女超爽视频在线观看| 免费黄色在线免费观看| 久久这里只有精品19| 午夜免费观看性视频| 国精品久久久久久国模美| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产精品一二三区在线看| 极品人妻少妇av视频| h视频一区二区三区| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲成人av在线免费| 在线免费观看不下载黄p国产| 看非洲黑人一级黄片| 欧美97在线视频| 看免费av毛片| 满18在线观看网站| 欧美 日韩 精品 国产| 国产男人的电影天堂91| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品熟女久久久久浪| 香蕉国产在线看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 黄片播放在线免费| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久精品区二区三区| 各种免费的搞黄视频| 亚洲,欧美,日韩| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 街头女战士在线观看网站| 一个人免费看片子| 色视频在线一区二区三区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 另类精品久久| 日韩中文字幕视频在线看片| 日本黄色日本黄色录像| 曰老女人黄片| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩一区二区视频免费看| 国产成人免费无遮挡视频| 母亲3免费完整高清在线观看 | 久久99精品国语久久久| 免费黄频网站在线观看国产| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人精品久久久久久| 成人二区视频| 高清av免费在线| 性高湖久久久久久久久免费观看| 九色亚洲精品在线播放| 日本wwww免费看| 1024香蕉在线观看| 最近手机中文字幕大全| 香蕉国产在线看| 美女午夜性视频免费| 一二三四中文在线观看免费高清| 日韩一本色道免费dvd| 国产在线一区二区三区精| 久久ye,这里只有精品| 最近中文字幕2019免费版| 久久久精品区二区三区| 亚洲国产欧美在线一区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩制服骚丝袜av| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品嫩草影院av在线观看| 免费在线观看黄色视频的| 久久这里有精品视频免费| 亚洲国产欧美网| 大香蕉久久成人网| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲精品视频女| 丝袜喷水一区| 久久精品久久精品一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 观看美女的网站| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲精品一区蜜桃| 青青草视频在线视频观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品蜜桃在线观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美激情高清一区二区三区 | 亚洲国产日韩一区二区| 国产精品免费视频内射| 亚洲成国产人片在线观看| 久久久久国产网址| 少妇 在线观看| 久久久久视频综合| 五月开心婷婷网| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 在线天堂中文资源库| 少妇人妻精品综合一区二区| 少妇的丰满在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲精品第二区| 大码成人一级视频| 久久久国产精品麻豆| 啦啦啦啦在线视频资源| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 大陆偷拍与自拍| 飞空精品影院首页| 国产视频首页在线观看| 制服丝袜香蕉在线| av线在线观看网站| 天美传媒精品一区二区| 麻豆av在线久日|