首薈通便膠囊對慢傳輸型便秘模型大鼠腸道推進(jìn)率和結(jié)腸黏液分泌的影響

李冰冰　譚玉軍　姚景春　程國良　黃志艷　張貴民

摘要 目的：觀察首薈通便膠囊對慢傳輸型便秘模型動物腸道推進(jìn)率和結(jié)腸黏液分泌的影響，探討首薈通便膠囊對慢傳輸型便秘的療效及相關(guān)機(jī)制。方法：灌胃給予復(fù)方地芬諾酯片并限水導(dǎo)致大鼠慢傳輸型便秘模型，模型大鼠隨機(jī)分為模型組、首薈通便膠囊高、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊低劑量組、芪蓉潤腸口服液組。觀察首薈通便膠囊對復(fù)方地芬諾酯（DC）便秘模型大鼠小腸碳墨推進(jìn)率、首次黑便排出時間和12 h排便顆粒數(shù)的影響。結(jié)扎分離取出的盲結(jié)腸段隨即固定，制作石蠟切片，AB-PAS染色，供組織學(xué)觀察。結(jié)果：首薈通便膠囊中、高劑量組可明顯縮短大鼠首次排便時間（P<0.05），增加12 h排便顆粒數(shù)（P<0.05），并且能增加小腸碳墨推進(jìn)率（P<0.05）。首薈通便膠囊中、高劑量組大鼠結(jié)腸黏膜黏液細(xì)胞數(shù)明顯增多，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：首薈通便膠囊能夠通過提高腸道動力，增加結(jié)腸黏液的分泌，有效改善便秘癥狀，提高患者的生命質(zhì)量。

關(guān)鍵詞 首薈通便膠囊；慢傳輸型便秘；推進(jìn)率；結(jié)腸黏液分泌

Abstract Objective：To investigate the effects of Shouhui Tongbian Capsule on intestine pushing rate and colonic mucus secretion in slow transit constipation model animals，and to explore the correlating mechanism of Shouhui Tongbian Capsule on slow transit constipation.Methods：The rat model of slow transit constipation was established by intragastric administration with compound diphenoxylate tablet and water restriction.The model rats were randomly divided into control group，Shouhui Tongbian Capsule high，middle，low dose groups and Qirong Runchang Oral Liquid.The pushing rate of intestine，the time of first black stool discharge and the number of fecal particles in 12 h in compound difenolate （DC） constipation model rats were observed.Cecocolon sections removed by ligation were fixed and paraffin sections were prepared and stained with AB-PAS for histological observation.Results：Compared with the control group，Shouhui Tongbian Capsule significantly reduced the time of first black stool discharge，increased the intestine pushing rate （P<0.05）.Meanwhile，the black stool points in 12 h increased （P<0.05） in the constipation model rats which were induced by compound diphenoxylate tablets.The number of mucous cells in the colonic mucosa of rats in medium and high dose Shouhui Tongbian Capsule groups increased significantly，and compared with the model group，the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion：Shouhui Tongbian Capsule can improve intestinal motility，increasing mucus secretion of colon to effectively improve constipation symptoms and improve the quality of life of patients.

Key Words Shouhui Tongbian Capsule； Slow transit constipation； Intestine pushing rate； Colonic mucus secretion

中圖分類號：R932，R574.4文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.09.042

便秘是臨床常見疾病，發(fā)病率高，各年齡段人群均會發(fā)生，其中女性多于男性，老年多于青壯年[1]。很多中老年人隨著腸道微循環(huán)障礙的逐步增加，胃腸道機(jī)能下降，便秘發(fā)生的可能性逐年增加。便秘能夠影響身體機(jī)能和胃腸功能，同時便秘又是一些心腦血管疾病危險患者心肌梗死和腦卒中的重要誘發(fā)因素。因此注重便秘的及時治療，盡早解除便秘成為很多疾病預(yù)防和病情轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[2]。

慢性便秘是一種常見疾病，我國流行病學(xué)調(diào)查表明，成人慢性便秘患病率為4%～6%，并隨年齡增長而升高，60歲以上人群慢性便秘的患病率可高達(dá)22%[3]。骨科臥床患者的便秘發(fā)生率一般為50%～70%，精神類藥物使用時便秘發(fā)生率為30%～40%，而肛腸疾病患者圍手術(shù)期出現(xiàn)不同程度的便秘發(fā)生率達(dá)90%以上，明顯影響患者生命質(zhì)量和病情預(yù)后[4]。慢傳輸型便秘（Slow Transit Constipation，STC）涉及全胃腸道動力和黏液分泌紊亂，致大便排出困難。其臨床癥狀主要為排便次數(shù)減少、糞便量減少、糞便干結(jié)、排便費力等，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為[5]，屬于“脾約”“便秘”“氣秘”“腹痛”等范疇。首薈通便膠囊依據(jù)便秘的中醫(yī)辨證論治，養(yǎng)陰益氣，補(bǔ)瀉兼施。為了驗證首薈通便膠囊對慢傳輸型便秘的療效，以及探究其相關(guān)作用機(jī)制，本研究以大鼠為試驗對象，通過建立復(fù)方地芬諾酯（DC）便秘模型[5]，觀察首薈通便膠囊對大鼠排便以及腸道黏膜功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SD大鼠，SPF級，體重180～220 g，120只，雌雄各半，購自濟(jì)南朋悅實驗動物繁育有限公司提供，動物合格證號：37009200006204。實驗動物分籠常規(guī)實驗室環(huán)境飼養(yǎng)。

1.1.2 藥物 首薈通便膠囊（魯南厚普制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20150041）。芪蓉潤腸口服液（北京北衛(wèi)藥業(yè)有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號：160133）。復(fù)方地芬諾酯片（常州康普藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：20160912）。

1.1.3 試劑與儀器 AB-PAS染色液（廈門邁威生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：161230）。倒置熒光顯微鏡（日本Olmyplus，型號CKX41）、像采集卡（佳能中國，CanonUtilities系統(tǒng)）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將60只大鼠按體重隨機(jī)分成6組，分別為正常組、模型組、芪蓉潤腸口服液組、首薈通便膠囊低、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊高劑量組，每組10只，雌雄各半。末次給藥結(jié)束，各實驗組大鼠禁食不禁水16 h，陰性對照組給予蒸餾水和淀粉的混懸液10 mg/kg，其余每組給予復(fù)方地芬諾酯片10 mg/kg灌胃。30 min后造成便秘模型。

1.2.2 給藥方法 正常組給予10 mL/kg純水，模型組、芪蓉潤腸口服液組給予芪蓉潤腸口服液10 mL/kg，芪蓉潤腸口服液按原液的1.67倍稀釋。連續(xù)給藥7 d，期間自由飲食。首薈通便膠囊低、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊高劑量組的給藥濃度分別為0.07 g/kg、0.21 g/kg和0.63 g/kg。

1.2.3 首薈通便膠囊對便秘大鼠排便的影響 末次造模30 min后，各實驗組給予含相應(yīng)受試物的墨汁灌胃，模型組和陰性對照組給予相應(yīng)體積的墨汁灌胃，灌胃體積為20 mL/kg體重。給藥后立即將大鼠單獨放入干凈的鼠籠內(nèi)，并正常提供飼料和飲水，同時開始準(zhǔn)確計時。觀察記錄每只大鼠首次排出黑便的時間，并連續(xù)觀察12 h，記錄12 h內(nèi)大鼠排黑便粒數(shù)、干重及性狀。

1.2.4 首薈通便膠囊對便秘大鼠腸蠕動的影響 末次給藥后，各實驗組大鼠禁食不禁水16 h，除正常組給予10 mg/kg純水外，其余各實驗組給予復(fù)方地芬諾酯片10 mg/kg。造模30 min后，各給藥組給予含相應(yīng)受試物的墨汁，模型組和正常組給予相應(yīng)體積墨汁，灌胃體積為20 mL/kg體重。給予墨汁25 min后，脫頸處死大鼠，打開腹腔分離腸系膜，立刻剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，平鋪于玻璃板上，輕輕將小腸拉成直線進(jìn)行測量。腸管長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長度”。墨汁推進(jìn)率=[墨汁推進(jìn)長度（cm）/小腸總長度（cm）]×100%。

1.2.5 首薈通便膠囊對結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞中黏液細(xì)胞的影響 將60只大鼠按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、芪蓉潤腸口服液組、首薈通便膠囊低、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊高劑量組，每組10只，雌雄各半。每天上午9時，除正常對照組外各組均灌胃復(fù)方地芬諾酯10 mg/kg，正常組給予等體積純水。觀察組動物在下午15：00灌胃給予相應(yīng)等體積藥物，首薈通便膠囊低、首薈通便膠囊中、首薈通便膠囊高劑量組的給藥濃度分別為0.09 g/kg、0.27 g/kg和0.71 g/kg。模型組灌純化水10 mL/kg，正常組自由飲水，其他組不給水，連續(xù)造模給藥7 d。實驗結(jié)束后麻醉下取盲、結(jié)腸段，隨即固定梯度乙醇脫水制作石蠟切片，AB-PAS染色，供組織學(xué)觀察。顯微鏡下觀察結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞中陽性染色細(xì)胞即黏液細(xì)胞數(shù)目，隨機(jī)計數(shù)十個視野，取其平均值。計數(shù)以每100個上皮細(xì)胞中黏液細(xì)胞數(shù)表示[2]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)（±s）表示，采用t檢驗。大鼠的首次排黑便時間、12 h排黑便數(shù)、墨汁推進(jìn)率以及結(jié)腸黏液情況是在便秘模型建立成功的條件下（P<0.05），先將模型組和陰性對照組組間進(jìn)行t檢驗，再用給藥組、模型組和陽性對照組組間進(jìn)行t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 首薈通便膠囊對復(fù)方地芬諾酯便秘模型大鼠

排便及腸蠕動的影響 與正常組比較，模型組首粒排便時間明顯延長；與模型組比較，各給藥組首粒排便時間均明顯縮短，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）；與正常組比較，模型組糞便數(shù)量明顯減少；與模型組比較，各給藥組糞便數(shù)量均明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）；與正常組比較，模型組糞便重量明顯降低；與模型組比較，各給藥組糞便重量均明顯上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。與正常組比較，模型組腸道推進(jìn)率明顯降低；與模型組比較，各給藥組有明顯促進(jìn)便秘模型大鼠小腸蠕動的作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。見表1。

2.2 首薈通便膠囊對復(fù)方地芬諾酯便秘模型大鼠腸黏液的影響 正常組大鼠腸道腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生豐富含硫黏蛋白的酸性黏液素，末梢黏膜表面履蓋酸性黏液素層；便秘模型組大鼠腸道腺上皮細(xì)胞形態(tài)瘦小，含酸性黏液素很少，黏膜表面酸性黏液素層薄，與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），給予芪蓉潤腸口服液組黏膜表面黏液層較模型組增加，杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏液含量有所增加；首薈通便膠囊低劑量組黏液少量增加，杯狀細(xì)胞數(shù)量及黏液含量有所增加；首薈通便膠囊中劑量組黏液層厚度明顯增加，黏膜層杯狀細(xì)胞排列較為整齊，數(shù)量明顯增多，黏液含量明顯增加，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；首薈通便膠囊高劑量組黏液層厚度明顯增加，黏膜層杯狀細(xì)胞排列較為整齊，數(shù)量明顯增多，黏液含量明顯增加，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖1、表2。

120只動物，分2次實驗（每次60只），一次是觀察排便和腸蠕動，另一次是觀察黏液厚度和黏液含量。

3 討論

慢性便秘通常屬中醫(yī)“虛秘”的范疇，一般病程較長，反復(fù)發(fā)作，遷延不愈，給患者的工作生活帶來了較大的困擾。西藥治療便秘遠(yuǎn)期療效差，復(fù)發(fā)率高，作用環(huán)節(jié)單一，具有不良反應(yīng)，因此中醫(yī)中藥治療便秘受到重視[6]。

多數(shù)中醫(yī)學(xué)家在治療慢性便秘時贊同“因虛致秘”的病因病機(jī)理論，認(rèn)為本病癥多責(zé)之于臟腑氣血陰陽之不足，證屬本虛標(biāo)實。首薈通便膠囊養(yǎng)陰益氣，補(bǔ)瀉兼施，標(biāo)本兼治。處方中何首烏和蘆薈為君藥，以益精養(yǎng)血，清肝瀉熱，潤腸通便；決明子、枸杞子及阿膠為臣藥，以清肝明目，滋補(bǔ)肝腎，補(bǔ)血止血，滋陰潤燥通便；佐以人參和白術(shù)補(bǔ)氣健脾，使瀉不傷正；以枳實破氣消積，引經(jīng)入藥。首薈通便膠囊配伍嚴(yán)謹(jǐn)，標(biāo)本兼顧，切中病機(jī)。君臣佐使俱全，藥物之間七情相合，共奏潤腸通便、瀉濁排毒、養(yǎng)陰益氣之功。同時現(xiàn)代藥理研究表明，蘆薈提取物可以通過影響鈉離子的主動轉(zhuǎn)運來干擾腸道內(nèi)的水分分泌與吸收平衡，從而達(dá)到潤腸通便的效果[7-8]；同時組方中其他中藥對便秘也有不同的藥理作用[9-12]。

復(fù)方地芬諾酯片致大鼠便秘結(jié)果顯示，大鼠排便數(shù)量減少，糞便重量降低，腸道推進(jìn)率下降，結(jié)腸黏液量明顯減少，杯狀細(xì)胞萎縮，分泌黏液能力下降甚至喪失，結(jié)果表明此模型與臨床上便秘患者的腸道病理改變吻合度較高，是研究便秘藥物的較好模型。杯狀細(xì)胞是腸道的正常細(xì)胞，具有分泌黏液、潤滑和保護(hù)腸道黏膜的作用，其分泌功能下降可能是慢傳輸型便秘的根本原因，而腸道的微循環(huán)供養(yǎng)能力決定了杯狀細(xì)胞的活力。本研究發(fā)現(xiàn)，首薈通便膠囊中、高劑量組可明顯縮短大鼠首次排便時間（P<0.05），增加12 h排便顆粒數(shù)（P<0.05），并且能增加小腸碳墨推進(jìn)率（P<0.05）。首薈通便膠囊中、高劑量組大鼠結(jié)腸黏膜黏液細(xì)胞數(shù)明顯增多，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。做為臨床常用的首薈通便膠囊中劑量，總體效果優(yōu)于高劑量和低劑量，表明首薈通便膠囊中劑量在治療便秘時達(dá)到了補(bǔ)瀉平衡，劑量最佳。

綜上所述，首薈通便膠囊能夠有效地改善便秘癥狀，提高患者的生命質(zhì)量，其作用機(jī)制可能與提高腸道動力，增加結(jié)腸黏液的分泌有關(guān)，更深層次的機(jī)理還需要進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]祝飛美，李俊龍，倪小清，等.芷歸片對復(fù)方地芬諾酯便秘模型小鼠的治療作用研究[J].四川生理科學(xué)雜志，2015，37（1）：8-10.

[2]姚景春，馮芹，孫寶存.己酮可可堿對慢傳輸型便秘模型大鼠的結(jié)腸黏液分泌和結(jié)腸肌電活動的影響[J].中國藥理學(xué)通報，2011，27（12）：1749-1752.

[3]中國醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會胃腸動力組.中國慢性便秘診治指南（2013，武漢）[J].中華消化雜志，2013，33（5）：605-612.

[4]郭榮.慢性功能性便秘中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)的量化研究[D].南京中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

[5]常東，馮春霞，唐純志，等.自擬加味枳術(shù)四磨湯加減治療慢性功能性便秘療效觀察[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2011，19（5）：320-322.

[6]鄭倩，徐華.便秘動物模型的研究進(jìn)展[J].臨床消化病雜志，2012，24（3）：189-191.

[7]姚一博，陸金根，曹永清，等.中醫(yī)藥治療慢性功能性便秘研究進(jìn)展[C].沈陽：中華中醫(yī)藥學(xué)會肛腸分會換屆會議暨便秘專題研討會論文，2007.

[8]Angelo A Izzo，Lidia Sautebin，F(xiàn)rancesca Borrelli，et al.The role of nitric oxide in aloe-induced diarrhoea in the rat[J].European Journal of Pharmacology，1999，368：43-48.

[9]Ishii Y，Tanizawa H，Takino Y.Studies of aloe：III.Mechanism of cathartic effect[J].Chemical & Pharmaceutical Bulletin，1990，38：197-200.

[10]梅雪，余劉勤，陳小云，等.何首烏化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].藥物評價研究，2016，39（1）：122-131.

[11]劉旭，杜愛林，姜洪波，等.決明子對便秘小鼠結(jié)腸肌電和水通道蛋白3表達(dá)的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2015，35（8）：2145-2147.

[12]王文革，次苗苗，張俊紅，等.不同劑量生白術(shù)對慢傳輸型便秘大鼠胃腸道傳輸功能及Cajal間質(zhì)細(xì)胞的影響[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2016，32（1）：18-21.

[13]HE Mei-juan，YANG Jin-xiang，WEI Yue，et al.Effects of Fructus Aurantii Immaturus volatile oil on slow transit constipation in rats[J].China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy，2013，28（5）：1487-1491.

（2018-06-06收稿 責(zé)任編輯：張雄杰）