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      抗-HCV-IgG抗體及血清HCVRNA在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值

      2018-09-08 05:57:54李夏
      浙江醫(yī)學(xué) 2018年16期
      關(guān)鍵詞:丙型肝炎載量陽(yáng)性率

      李夏

      314200 平湖市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

      丙型肝炎病毒(HCV)是造成丙型肝炎的重要原因,1989年美國(guó)首次發(fā)現(xiàn)HCV,1991年國(guó)際病毒命名委員會(huì)將其歸為黃病毒科HCV屬。HCV檢測(cè)技術(shù)一直處于發(fā)展階段,其實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方案也日趨完善[1]。HCV是一種單鏈正股RNV病毒,主要在肝臟中復(fù)制,通常感染HCV后1~2周,血清檢測(cè)可見(jiàn)HCV-RNA,3~4周可見(jiàn)抗-HCV-IgG抗體[2-3]。而臨床中常通過(guò)檢測(cè)抗-HCV判斷是否感染HCV,但抗-HCV-IgG產(chǎn)生后長(zhǎng)期存在[4],對(duì)療效的評(píng)價(jià)意義不大。因此,本研究旨在分析抗-HCV-IgG抗體以及血清HCV-RNA在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

      1 對(duì)象和方法

      1.1 對(duì)象 選取2015年4月至2016年5月我院就診的丙型肝炎患者312例,男224例,女88例,年齡12~69(39.58±5.02)歲,患者主要來(lái)自肝病科、婦產(chǎn)科、血液科、人工腎及心內(nèi)科。選取同期我院體檢健康人群300 例,男 215 例,女 85 例,年齡 15~70(40.12±5.85)歲。兩組間性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P >0.05)。

      1.2 方法 受試者入院晨起后用真空采血管采集靜脈血標(biāo)本3ml,置于室溫環(huán)境中20min,自然凝固,以1500r/min充分離心10min后,采用無(wú)菌及無(wú)RNA水解酶帶濾芯微量移液器緩慢吸取上層清液,將其轉(zhuǎn)移至1ml無(wú)RNA水解酶滅菌離心管中檢測(cè)HCV-RNA,剩余血清標(biāo)本用于檢測(cè)抗-HCV-IgG抗體及肝功能指標(biāo)(ALT、AST)。全部標(biāo)本經(jīng)編號(hào)后立即用于檢測(cè)或置于-20℃環(huán)境中待檢,對(duì)于冰凍保存的血清標(biāo)本在檢測(cè)前應(yīng)先在室溫匯總?cè)诨?,并搖勻???HCV-IgG抗體檢測(cè)采用ELISA,試劑盒購(gòu)自廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司,在微孔板條預(yù)備包被基因表達(dá)HCV抗原,和血清抗-HCV-IgG抗體進(jìn)行反應(yīng),然后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗人抗IgG酶標(biāo)記抗體,與之結(jié)合,采用3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺顯色。HCV-RNA 檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng),試劑盒購(gòu)自廈門(mén)安普利生物工程有限公司,根據(jù)體外基因擴(kuò)增原理檢測(cè),并采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù),擴(kuò)增目標(biāo)基因5′非結(jié)構(gòu)區(qū)基因,擴(kuò)增產(chǎn)物294bp,且對(duì)HCV具有特異性,敏感度為5.0×102U/ml,標(biāo)準(zhǔn)品線性范圍在1.0×103~1.0×108U/ml。嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)操作。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)陽(yáng)性模板標(biāo)準(zhǔn)曲線以Ct為縱坐標(biāo),起始模板數(shù)值為橫坐標(biāo),得到實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)陽(yáng)性模板標(biāo)準(zhǔn)曲線。計(jì)算樣本吸光度OD值與臨界值cut-off值的比值(S/CO)。

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布的計(jì)量資料以表示,組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)及配對(duì)χ2檢驗(yàn);相關(guān)性分析采用Perason相關(guān)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 兩組間抗-HCV-IgG抗體及血清HCV-RNA檢測(cè)結(jié)果比較 丙型肝炎組中,抗-HCV-IgG陽(yáng)性率高達(dá)81.41%,HCV-RNA陽(yáng)性率高達(dá)90.71%;而健康對(duì)照組中抗-HCV-IgG陽(yáng)性率僅3.67%,HCV-RNA陽(yáng)性檢出率為0,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表1。

      表1 兩組間抗-H C V-Ig G抗體及血清H C V-RNA檢測(cè)結(jié)果比較[例(%)]

      2.2 丙型肝炎患者抗-HCV-IgG抗體及血清HCVRNA檢測(cè)結(jié)果分析 抗-HCV-IgG抗體檢測(cè)丙型肝炎患者的陽(yáng)性率為81.41%(254/312),血清HCV-RNA檢測(cè)陽(yáng)性率為90.71%(283/312),兩種檢測(cè)方法陽(yáng)性檢出率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。兩種方法聯(lián)合檢測(cè)均為陽(yáng)性者227例,占72.76%。詳見(jiàn)表2。

      表2 丙型肝炎患者抗-H C V-Ig G抗體及血清H C V-RNA檢測(cè)結(jié)果分析(例)

      2.3 血清HCV-RNA載量各區(qū)間抗-HCV-IgG陽(yáng)性情況分析 將 HCV-RNA 載量分為<500、102~104、104~106、106~108、>108U/ml,抗-HCV-IgG 陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為:CO值≥1,結(jié)果可見(jiàn),254例抗HCV-IgG陽(yáng)性丙型肝炎患者,HCV-RNA載量在104~106區(qū)間時(shí)抗-HCVIgG陽(yáng)性檢出率最高,詳見(jiàn)表3。

      2.4 抗-HCV-IgG抗體及HCV-RNA均陽(yáng)性者HCVRNA載量與抗-HCV-IgG抗體S/CO值相關(guān)性分析抗-HCV-IgG抗體及HCV-RNA均陽(yáng)性227例丙型肝炎患者,HCV-RNA載量與抗-HCV-IgG抗體S/CO值經(jīng)數(shù)據(jù)W檢驗(yàn)符合正態(tài)分布,繪制散點(diǎn)圖及趨勢(shì)線,抗-HCV-IgG抗體及HCV-RNA均陽(yáng)性者HCV-RNA載量與抗-HCV-IgG抗體S/CO值呈正相關(guān)(r=0.579,P<0.05),詳見(jiàn)圖 1。

      表3 254例抗H C V-Ig G陽(yáng)性丙型肝炎患者,血清H C V-RNA載量各區(qū)間抗-H C V-Ig G陽(yáng)性檢出情況分析(例)

      圖1 227例丙型肝炎患者H C V-RNA載量與抗-H C V-Ig G抗體S/C O值的散點(diǎn)圖

      2.5 不同結(jié)果類型患者肝功能指標(biāo)異常率對(duì)比分析結(jié)果顯示,抗-HCV-IgG抗體及HCV-RNA均陽(yáng)性與抗-HCV-IgG抗體陽(yáng)性或HCV-RNA陽(yáng)性兩種不同結(jié)果患者ALT、AST異常率比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P>0.05)。詳見(jiàn)表 4。

      表4 不同結(jié)果類型患者肝功能指標(biāo)異常率分析[例(%)]

      2.6 不同結(jié)果類型患者血清HCV-RNA載量與ALT水平間相關(guān)性分析 HCV-RNA及抗-HCV-IgG抗體均陽(yáng)性的227例丙型肝炎患者中,繪制HCV-RNA載量和ALT 水平呈正相關(guān)(r=0.583,P<0.05)(見(jiàn)圖 2)。而HCV-RNA陽(yáng)性且抗-HCV-IgG抗體陰性的56例丙型肝炎患者患者中,HCV-RNA載量與ALT無(wú)相關(guān)性(r=-0.068,P>0.05)。HCV-RNA 陰性且抗-HCV-IgG抗體陽(yáng)性者27例患者中HCV-RNA載量與ALT無(wú)相關(guān)性(r=0.102,P >0.05)。

      圖2 H C V-RNA及抗-H C V-Ig G抗體均陽(yáng)性者血清H C V-RNA載量與AL T水平的散點(diǎn)圖

      3 討論

      丙型肝炎是HCV感染導(dǎo)致的病毒性肝炎,其主要通過(guò)輸血、針刺等途徑傳播。HCV感染初期常為亞臨床感染的表現(xiàn),大多患者臨床特征不典型,因此極易造成誤診[5-6]。且隨著疾病進(jìn)針易導(dǎo)致肝硬化,甚至肝癌,病死率極高,所有選擇有效的高靈敏度檢測(cè)方案,對(duì)于丙型肝炎常規(guī)檢測(cè)至關(guān)重要[7]。

      目前臨床采用抗-HCV-IgG抗體判斷是否感染HCV,但由于抗-HCV抗體產(chǎn)生后長(zhǎng)時(shí)間存在,出現(xiàn)的時(shí)間較晚,一般在HCV感染后的70d至數(shù)月才可檢測(cè)出抗-HCV-IgG抗體,鑒于其受人體免疫應(yīng)答時(shí)效及產(chǎn)生窗口期長(zhǎng)的影響,難以診斷早期丙型肝炎,無(wú)法及時(shí)有效控制丙型肝炎傳播[8]。HCV-RNA是診斷HCV金標(biāo)準(zhǔn),其主要反映的是HCV復(fù)制和傳染性[9]。HCV-RNA雖然早期檢測(cè)靈敏度及特異度較高,但其不僅需要精密儀器,操作技巧要求也較高外,試劑昂貴,并且極易發(fā)生交叉感染,從而導(dǎo)致誤診[10]。理論上講,針對(duì)同一群體同時(shí)進(jìn)行HCV-RNA及抗-HCV-IgG檢測(cè),HCV-RNA陽(yáng)性檢出率略較抗-HCV-IgG抗體高,國(guó)外Filippo等[11]也支持了這一觀點(diǎn)。在本次研究中,也證實(shí)了這一點(diǎn)。檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)HCV-RNA及抗-HCV-IgG抗體均陽(yáng)性這一類型患者,血清ALT水平的變化和HCV載量變化呈一定正相關(guān),可見(jiàn)ALT水平的下降可作為抗病毒治療過(guò)程中出現(xiàn)應(yīng)答的重要跡象,且觀察ALT水平還可反映肝臟病變的程度,其高水平表達(dá)也對(duì)HCV-RNA載量變化有重要的預(yù)警意義[12]。同時(shí)在對(duì)該類患者進(jìn)行HCV-RNA載量的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)也可適時(shí)考慮追蹤ALT水平[13]。

      本研究中,丙型肝炎患者抗-HCV-IgG陽(yáng)性率及HCV-RNA陽(yáng)性率均顯著高于健康對(duì)照組,因此可將抗-HCV-IgG抗體及HCV-RNA檢測(cè)作為丙型肝炎感染診斷。從本次研究結(jié)果可見(jiàn),HCV-RNA檢測(cè)陽(yáng)性率較抗-HCV-IgG陽(yáng)性率略高,若能將兩者聯(lián)合應(yīng)用,則可有效避免假陽(yáng)性率。結(jié)果中有56例患者HCV-RNA陽(yáng)性,而抗-HCV陰性,這種結(jié)果可能由于:機(jī)體免疫功能低下,HCV感染后不能產(chǎn)生足夠的抗-HCV抗體;或檢測(cè)抗-HCV抗體反應(yīng)系統(tǒng)不穩(wěn)定,或者敏感度不夠;此外,感染后抗-HCV生成滯后,因此在某一時(shí)期血清抗體陰性,此時(shí)無(wú)法檢測(cè)抗-HCV,但實(shí)際上已經(jīng)在該時(shí)期HCV開(kāi)始復(fù)制,并且具有較強(qiáng)傳染性[14]。也就是說(shuō)若患者抗-HCV檢測(cè)陽(yáng)性,很少出現(xiàn)漏診情況[15]???HCV-IgG抗體及HCV-RNA均陽(yáng)性與抗-HCVIgG抗體陽(yáng)性或HCV-RNA陽(yáng)性兩種不同結(jié)果患者ALT、AST異常表達(dá)率比較,均未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。HCVRNA及抗-HCV-IgG抗體均陽(yáng)性者HCV-RNA載量和ALT水平存在一定相關(guān)性,即血清ALT水平增加時(shí),HCV-RNA表達(dá)量也增加,此時(shí)可能HCV在肝臟內(nèi)大量復(fù)制,且存在持續(xù)性肝臟損傷的危險(xiǎn),所以丙型肝炎患者血清中ALT水平可間接反映HCV在機(jī)體的狀態(tài),HCV-RNA表達(dá)情況可反映肝細(xì)胞炎性損傷程度。因此這也是將ALT作為丙型肝炎患者肝臟損傷程度重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)的關(guān)鍵原因。此外,HCV-RNA載量在104~106區(qū)間時(shí)抗-HCV-IgG陽(yáng)性檢出率最高(40.71%),因此可將在該區(qū)間的HCV-RNA與抗-HCV-IgG抗體檢測(cè)聯(lián)合可提高丙型肝炎診斷率。

      綜上所述,單一抗-HCV-IgG抗體或單一血清HCV-RNA檢測(cè)用于丙型肝炎診斷存在一定局限性,尋找抗-HCV-IgG陽(yáng)性檢出率最高的HCV-RNA載量區(qū)間,將兩者聯(lián)合檢測(cè),可有效避免誤診,提高確診率,但對(duì)于不同結(jié)果類型患者,HCV-RNA載量和ALT水平相關(guān)性并不一致。

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