血清 GP73、AFP、AFU 檢測對AFP低水平原發(fā)性肝癌的診斷價值

陳旭東 王倩倩 陳巧巧

315020 寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科（陳旭東，王倩倩，陳巧巧）

糖原發(fā)性肝癌（primary hepatocellular carcinoma，PHC）是指由肝細胞或肝內(nèi)膽管上皮細胞發(fā)生的惡性腫瘤，是我國常見惡性腫瘤之一，其病死率在惡性腫瘤中居第2位[1]，且呈逐年上升趨勢。目前，本病早期缺乏有效的監(jiān)測指標(biāo)，確診時大多數(shù)屬于中期甚至晚期，延誤了最佳治療時機。PHC的診斷方法除了病理學(xué)、影像學(xué)等檢查外，其血清標(biāo)志物檢測也為臨床早發(fā)現(xiàn)、早治療提供一條重要途徑[2]。血清甲胎蛋白（AFP）是診斷PHC特異性的標(biāo)志物，現(xiàn)已廣泛用于篩查、診斷、判斷、療效及預(yù)測復(fù)發(fā)。α-L-巖藻糖苷酶（AFU）也被認為是輔助診斷PHC的一項血清學(xué)指標(biāo)。高爾基體蛋白73（GP73）則有望成為繼AFP、AFU后早期診斷PHC及判斷預(yù)后的新標(biāo)志物[3]。筆者通過測定血清GP73、AFP、AFU水平，探討3者單獨及聯(lián)合檢測對AFP低水平PHC的輔助診斷價值。

1 對象和方法

1.1 對象 選擇2015年7月至2017年2月在我院住院的53例PHC患者（PHC組），其中男35例，女18例，年齡 41～70（57.3± 9.6）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者均經(jīng)B超、螺旋CT、肝活檢及病理檢查確診，符合中國抗癌協(xié)會制定的《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)》。（2）所有PHC患者血清AFP檢測濃度＜200ng/ml。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除PHC以外的其他惡性腫瘤患者。選擇同期良性肝病患者81例（良性組），其中男58例，女23例，年齡39～69（56.7±10.3）歲。其中肝硬化 35 例，慢性乙肝患者46例，均符合中華醫(yī)學(xué)會制定的《慢性乙型肝炎防治指南》[4]中肝炎和肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)。另選擇同期在本院行健康體檢者142例作為對照組，其中男90例，女52例，年齡 42～71（58.2±7.5）歲。經(jīng)檢測 AFP及各型肝炎病毒標(biāo)志物均為陰性，無肝、心、肺、腎功能異常。3組對象性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。本研究所有對象均知情同意。

1.2 試劑與儀器 AFU檢測試劑由安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司提供（批號：20160928，60ml/瓶）。使用貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的AU5831全自動生化分析儀。AFP檢測試劑由貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司提供（批號：622454）；使用貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的DXI 800。GP73檢測試劑由北京熱景生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)（批號：20160502）。使用北京拓普分析儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)的DEM－3洗板機、TECAN酶標(biāo)儀。

1.3 標(biāo)本采集 所有研究對象均空腹12h后，于次日清晨抽取空腹靜脈血5ml，室溫下靜置20min后以3 000r/min離心10min，取血清置于－20℃冰箱備用。

1.4 檢測方法

1.4.1 制備檢測GP73的標(biāo)準(zhǔn)曲線 利用試劑盒提供的系列 GP73 標(biāo)準(zhǔn)液 0、45、90、200、450ng/ml，以獲取的吸光度為橫坐標(biāo)，以GP73標(biāo)準(zhǔn)濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1。進行直線回歸得到方程式：y=233.87x+13.338，決定系數(shù) r2=0.9952。

1.4.2 GP73、AFP、AFU 檢測 GP73、AFP、AFU 均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作，采用ELISA法測定血清GP73水平，采用微粒子酶聯(lián)免疫法檢測AFP，采用化學(xué)比色速率法檢測AFU。參考范圍：AFP＜20 ng/ml，AFU 11.3～40.0U/L，GP73＜150ng/ml。

圖1 ELISA法檢測G P73所使用的標(biāo)準(zhǔn)曲線

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，正態(tài)分布的計量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK－q方法；計數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。靈敏度=真陽性數(shù)（/真陽性數(shù)+假陰性數(shù)）×100%；特異度=真陰性數(shù)（/真陰性數(shù)+假陽性數(shù)）×100%。

2 結(jié)果

2.1 3組對象血清GP73、AFP、AFU水平的比較 各組間血清GP73、AFP水平比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），均為PHC＞良性組＞對照組；PHC組和良性組間血清AFU水平比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），但均高于對照組（均 P＜0.05），見表 1。

表1 3組對象血清G P73、A F P、A F U水平的比較

2.2 GP73、AFP、AFU單獨檢測和聯(lián)合檢測對AFP低水平PHC的診斷效能比較 單獨使用GP73、AFP、AFU對低水平PHC組進行輔助診斷的靈敏度依次為：62.3%、43.4%、22.6%，特異度依次為：72.6%、70.0%、66.8%，3者聯(lián)合檢測的靈敏度和特異度分別為88.7%、40.8%?？梢奊P73聯(lián)合AFP、AFU測定診斷PHC的靈敏度高于單一指標(biāo)，特異度有所降低，見表2。

3 討論

血清AFP作為臨床上輔助診斷肝癌常用的血清標(biāo)志物，其靈敏度較低，只有40%～65%[5]，因此臨床有30%以上的PHC患者血清AFP并不升高，即所謂AFP陰性PHC，易漏診、誤診。對早期肝癌，AFP的漏診率可達40%以上，進展期肝癌漏診率達15%～20%。單獨使用血清AFP診斷肝癌，其低值甚至陰性表達，易導(dǎo)致臨床醫(yī)生的忽視，在一定程度上影響了該指標(biāo)的使用。而AFP在肝癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、膽道腫瘤及睪丸腫瘤等多種臨床疾病的患者血清中也會升高。因此尋求新的更加敏感或特異的血清標(biāo)志物或血清診斷模式顯得越來越有必要[6]。

表2 3項指標(biāo)單獨檢測和聯(lián)合檢測對A F P低水平P H C的診斷效能比較（%）

GP73是一種較新的血清學(xué)指標(biāo)，該蛋白編碼基因位于人染色體的9q21.33，它可調(diào)節(jié)蛋白酶從多肽鏈的N端水解堿性氨基酸[7]。當(dāng)肝臟發(fā)生癌變后，肝臟細胞中GP73的表達上調(diào)，從而使血清GP73水平的增高，推測其可能是由于GP73蛋白擴散進入血液循環(huán)導(dǎo)致[8]。GP73現(xiàn)已被證實為臨床上用于肝癌篩查的一種新的血清標(biāo)志物。許多研究表明GP73的表達與PHC的發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)，其靈敏度和特異度均超過了AFP[9－10]，本研究亦證實了該觀點。

AFU是一種溶酶體酸性水解酶，廣泛存在于哺乳動物的細胞和體液中，特別是在肝、腎組織中的含量最高[11]。近年研究發(fā)現(xiàn)PHC患者血清中AFU亦明顯升高，可作為PHC的預(yù)測指標(biāo)[12－13]，對AFP檢測結(jié)果陰性和小細胞肝癌患者的診斷價值較大，可作為血清AFP未增高時早期篩查PHC的一個輔助指標(biāo)。

本研究發(fā)現(xiàn)各組對象血清GP73水平比較有統(tǒng)計學(xué)差異，其升高水平PHC組高于良性組，而良性組有高于對照組；血清AFP檢測指標(biāo)不同組間和GP73也有類似的分布；而對于血清AFU檢測指標(biāo)，PHC組和良性組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但均高于對照組（P＜0.05）；單獨使用GP73、AFP、AFU對PHC組進行輔助診斷的靈敏度依次為：GP73＞AFP＞AFU，特異度依次為：GP73＞AFP＞AFU，3者聯(lián)合輔助診斷低水平PHC的靈敏度最高，有助于PHC的早期診斷。與臨床上常用的AFP相比，GP73有更高的靈敏度，在血清AFP檢測結(jié)果為陰性的患者臨床意義尤為顯著，故GP73和AFP有較好的互補性。本研究證實血清GP73檢測指標(biāo)可獨立用于AFP低水平PHC的輔助診斷，但3者聯(lián)合檢測能獲得最佳的診斷靈敏度，該研究成果值得廣大臨床實驗室推廣使用，以減少臨床對AFP低水平PHC患者的漏檢率。

綜上所述，GP73水平的測定可以作為AFP低水平PHC臨床診斷分子標(biāo)志物。GP73、AFP及AFU 3者聯(lián)合檢測有助于提高低濃度AFP肝癌的診斷率，為肝癌的早期診斷提供可靠依據(jù)。本研究與其他文獻稍有差異[14]，可能與本實驗測量誤差及研究例數(shù)不足有關(guān)，有待于完善實驗方法進一步研究。