α-紅沒藥醇對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響

閆海斌，徐如祥解放軍總醫(yī)院，北京 100853；陸軍總醫(yī)院附屬八一腦科醫(yī)院，北京 10008

膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤，具有發(fā)病率高、生長迅速、復(fù)發(fā)率高、預(yù)后差、死亡率高等特點(diǎn)[1]，尤其是膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，惡性程度高，呈侵襲性生長，手術(shù)難以徹底切除，綜合現(xiàn)有的手術(shù)及放化療手段，中位生存期僅為1年[2]。膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展與多種癌基因相關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)多種酪氨酸激酶受體(receptor tyrosine kinases，RTKs)基因的過表達(dá)在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，c-Met基因是其中重要的一個(gè)[3-5]。c-Met是一種由c-Met原癌基因編碼的肝細(xì)胞生長因子受體，具有酪氨酸激酶活性，參與廣泛的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，涉及細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)、遷移和侵襲等。c-Met信號(hào)失調(diào)是許多惡性腫瘤的驅(qū)動(dòng)因素，并促進(jìn)腫瘤生長、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成[6]。李宏武和單吉[7]研究發(fā)現(xiàn)c-Met在大腸癌中顯著過表達(dá)并參與肝轉(zhuǎn)移，蔡博文等[8]發(fā)現(xiàn)c-Met表達(dá)水平與人腦膠質(zhì)瘤惡性表型及侵襲性密切相關(guān)。以c-Met作為靶點(diǎn)成為治療膠質(zhì)瘤的重要途徑之一[9-13]?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)是降解細(xì)胞外基質(zhì)的重要酶類，在劃痕愈合、骨吸收和血管生成等生理活動(dòng)和信號(hào)傳遞過程中起重要作用。MMPs在許多腫瘤中過度表達(dá)，與腫瘤的遷移和侵襲密切相關(guān)[14-18]。MMP-2、MMP-9都屬于MMPs家族中的明膠酶，能降解明膠、Ⅳ型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，在腫瘤的遷移和侵襲中起重要作用[14]。有文獻(xiàn)報(bào)道，c-Met可調(diào)節(jié)MMPs表達(dá)，從而影響腫瘤的遷移和侵襲[19-21]。α-紅沒藥醇(α-Bisabolol)是一種脂溶性倍半萜類化合物，廣泛存在于洋甘菊、春黃菊等植物精油中[22-23]。前期研究顯示其具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗寄生蟲等作用，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞也具有抑制作用。Seki等[24]和Darra等[25]研究發(fā)現(xiàn)α-紅沒藥醇能誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡，Chen等[26]研究發(fā)現(xiàn)α-紅沒藥醇能誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡，Cavalieri等[27]研究發(fā)現(xiàn)α-紅沒藥醇能誘導(dǎo)人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡。α-紅沒藥醇可調(diào)節(jié)Fas、P53、NF-кB、P13K/Akt等多種信號(hào)通路，引起腫瘤細(xì)胞凋亡等生物學(xué)效應(yīng)，但其是否通過調(diào)節(jié)c-Met影響膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移和侵襲尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過研究α-紅沒藥醇對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U251、U87遷移和侵襲的作用及其分子機(jī)制，為臨床膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療提供一種新的思路。

材料和方法

1 主要試劑 α-紅沒藥醇(純度≥95%，美國Sigma公司)，DMEM高糖培養(yǎng)基(美國Gibco公司)，胎牛血清(美國Gibco公司)，0.25%胰蛋白酶(美國Gibco公司)，青、鏈雙抗(美國Hyclone公司)，CCK8檢測(cè)試劑盒(日本同仁化學(xué)研究所)，8μm孔徑Transwell小室(美國Corning公司)，Matrigel膠(美國Corning公司)，結(jié)晶紫(北京雷根生物科技有限公司)，兔抗人c-Met多克隆抗體、兔抗人MMP-2多克隆抗體(美國Cell Signaling Technology公司)、兔抗人MMP-9多克隆抗體(美國Abcam公司)，鼠抗人GAPDH單克隆抗體(北京中杉金橋生物科技有限公司)，山羊抗兔、山羊抗小鼠IgG二抗(北京中杉金橋生物科技有限公司)，c-Met過表達(dá)質(zhì)粒及空載質(zhì)粒(南京巴奧得生物科技有限公司)，無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)，Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑(美國Thermo Fisher Scientific公司)。

2 細(xì)胞培養(yǎng) 人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U251、U87購自協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心。細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)于5%CO2、飽和濕度、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中，0.25%胰蛋白酶常規(guī)消化傳代，每2 ～ 3 d傳代1次。α-紅沒藥醇用無水乙醇配置為1 mmol/L的母液，儲(chǔ)存于-20℃，使用時(shí)用新鮮培養(yǎng)基稀釋為工作濃度。由于α-紅沒藥醇不溶于水，溶液中有效溶解濃度僅為加入藥物總量的2.5%[27]，如無特殊說明，后面實(shí)驗(yàn)中所指濃度均為有效溶解濃度。

3 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞常規(guī)消化后計(jì)數(shù)，用10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基重懸為4×104/ml，接種入96孔板。實(shí)驗(yàn)分6組，每組設(shè)3個(gè)平行孔，1 ～ 5組每孔100μl細(xì)胞懸液，6組只加入培養(yǎng)基，邊緣孔用無菌PBS填充。培養(yǎng)8 h，待細(xì)胞完全貼壁后，小心吸去培養(yǎng)基，1 ～ 5組分別加入含0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/Lα-紅沒藥醇的培養(yǎng)基，放培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，每孔加入CCK8試劑10μl，再培養(yǎng)1 ～ 4 h，多功能酶標(biāo)儀于450 nm處測(cè)吸光度值(OD值)，以0μmol/L組為陰性對(duì)照，以只含培養(yǎng)基組為空白對(duì)照，計(jì)算各組細(xì)胞存活率。公式：細(xì)胞存活率=(OD實(shí)驗(yàn)組-OD空白對(duì)照組)/(OD陰性對(duì)照組-OD空白對(duì)照組)×100%。

4 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)分3組，每組3個(gè)平行孔。取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞常規(guī)消化后計(jì)數(shù)，重懸為4×105/ml，接種入6孔板，每孔2 ml。待細(xì)胞處于對(duì)數(shù)期且貼壁約90%時(shí)，用20μl槍頭在培養(yǎng)皿底部中線附近劃2條平行直線，盡量保持劃痕均勻。無菌PBS洗滌3次，去掉脫落及未貼牢細(xì)胞。按分組分別加入含0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/Lα-紅沒藥醇的1%胎牛血清培養(yǎng)基，放高倍鏡下拍照，作為原始對(duì)照。繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，高倍鏡下觀察拍照。劃痕愈合百分比=(1-24 h劃痕面積/0 h劃痕面積)×100%。

5 Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn) 每個(gè)Transwell小室加入100μl Matrigel膠。取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，常規(guī)消化計(jì)數(shù)后用含1%胎牛血清DMEM高糖培養(yǎng)基重懸為5×104/ml。實(shí)驗(yàn)分3組，每組3個(gè)平行孔。上室加入200μl細(xì)胞懸液，下室按分組加入600μl含不同濃度α-紅沒藥醇(0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L)的20%胎牛血清DMEM高糖培養(yǎng)基。37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，用棉簽小心擦去上室細(xì)胞及基質(zhì)膠，室溫下甲醇固定10 min，倒置風(fēng)干，0.1%結(jié)晶紫溶液染色30 min后PBS沖洗，倒置風(fēng)干后，每個(gè)小室隨機(jī)選取3個(gè)視野拍照并計(jì)數(shù)穿梭到下室的細(xì)胞。

6 Western blotting檢測(cè)蛋白表達(dá) 取對(duì)數(shù)生長期U87、U251細(xì)胞，常規(guī)消化傳代后，接種于培養(yǎng)皿中，8 h后吸去培養(yǎng)基，加入含0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/Lα-紅沒藥醇的10%胎牛血清DMEM高糖培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。裂解細(xì)胞提取總蛋白，BCA法測(cè)蛋白濃度，根據(jù)測(cè)定濃度每孔上樣40μg，行聚丙烯酰胺凝膠電泳。按照待測(cè)分子量切取凝膠，280 mA，70 min轉(zhuǎn)到PVDF膜上。5% BSA(1×TBST稀釋)封閉1 h后放入雜交袋中，加入相應(yīng)兔抗人c-Met、MMP-2、MMP-9，鼠抗人GAPDH一抗，4℃孵育過夜。1×TBST洗膜3次，每次5 min。分別加入山羊抗兔、山羊抗小鼠IgG二抗，室溫孵育1 h，1×TBST洗膜3次，每次5 min。滴加ECL化學(xué)發(fā)光試劑，于凝膠成像系統(tǒng)曝光成像。用Image lab分析條帶灰度值。

7 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn) 將U251細(xì)胞分為空載質(zhì)粒組(A組)、空載質(zhì)粒加藥組(B組)，c-Met過表達(dá)組(C組)、c-Met過表達(dá)加藥組(D組)。常規(guī)消化計(jì)數(shù)U251細(xì)胞，重懸為1×105/ml，接種于6孔板，每孔2 ml，培養(yǎng)24 h后Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染細(xì)胞。A、B組轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒，C、D組轉(zhuǎn)染c-Met過表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染后24 h，A、C組換新鮮培養(yǎng)基，B、D組加入2.5μmol/Lα-紅沒藥醇。劃痕實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)細(xì)胞遷移能力，Transwell實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)細(xì)胞侵襲能力，Western blotting檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)變化，方法同上。

8 統(tǒng)計(jì)與分析 每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次以上，所有數(shù)據(jù)均采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以-x±s表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 α-紅沒藥醇對(duì)U251、U87細(xì)胞增殖的影響0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L組U251細(xì)胞存活率分別為100%±0.00%、96.89±7.30%、61.22%±5.08%、29.48%±4.84%，U87細(xì)胞存活率分別為100%±0.00%、97.86%±5.41%、95.31%±5.42%、55.72%±8.17%、19.66%±4.82%。0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L組 細(xì)胞存活率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨濃度升高5μmol/L及10μmol/L組細(xì)胞存活率呈逐漸下降趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(U251：F=322.938，P=0.00；U87：F=331.451，P=0.00)。見圖 1。

圖1 CCK8比色法檢測(cè)不同濃度α-紅沒藥醇對(duì)U87、U251增殖的影響(aP＜0.05, vs 0 ～ 2.5 μmol/L)Fig. 1 Effects of different concentrations of α-bisabolol on proliferation of U251 and U87 cells (aP＜0.05, vs 0-2.5 μmol/L)

2 α-紅沒藥醇對(duì)U251、U87細(xì)胞遷移的影響0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/Lα-紅 沒 藥 醇作用于U251細(xì)胞24 h后，劃痕愈合百分比分別為49.36%±5.44%、35.08%±3.79%、23.89%±4.51%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且隨藥物濃度增加細(xì)胞存活率逐漸下降。0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L α-紅沒藥醇作用于U87細(xì)胞24 h后，劃痕愈合百分比分別為46.64%±4.83%、33.42%±3.10%、22.35%±3.62%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，且隨藥物濃度增加細(xì)胞存活率逐漸下降。見圖2。

3 α-紅沒藥醇對(duì)U251、U87細(xì)胞侵襲的影響0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/Lα-紅沒藥醇作用于U251細(xì)胞24 h后，Transwell穿梭到下室的細(xì)胞數(shù)分別為248.67±14.94、171.11±17.91、87.11±15.49，各組間兩兩相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，且隨藥物濃度增加，穿梭到下室的細(xì)胞數(shù)逐漸下降。0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/Lα-紅沒藥醇作用于U87細(xì)胞24 h后，Transwell穿梭到下室的細(xì)胞數(shù)分別為202.44±16.98、145.44±11.91、71.98±9.32，各組間兩兩相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，且隨藥物濃度增加，穿梭到下室的細(xì)胞數(shù)逐漸下降。見圖3。

4 α-紅沒藥醇對(duì)U251、U87細(xì)胞MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的影響 0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L α-紅沒藥醇作用于U251細(xì)胞24 h后，以GAPDH為內(nèi)參，以0μmol/L組為對(duì)照，MMP-2表達(dá)量分別為 1.00±0.00、0.70±0.08、0.32±0.10，MMP-9表 達(dá) 量 分 別 為 1.00±0.00、0.69±0.09、0.24±0.07。各組間兩兩相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且隨藥物濃度增加，兩種蛋白表達(dá)量都逐漸下降。0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L α-紅沒藥醇作用于U87細(xì)胞24 h后，MMP-2表達(dá)量分別為 1.00±0.00、0.71±0.10、0.29±0.04，MMP-9表 達(dá) 量 分 別 為 1.00±0.00、0.72±0.08、0.23±0.04。各組間兩兩相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，且隨藥物濃度增加，兩種蛋白表達(dá)量都逐漸下降。見圖4。

5 α-紅沒藥醇對(duì)U251、U87細(xì)胞c-Met蛋白表達(dá)的影響 0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/Lα-紅沒藥醇作用于U251細(xì)胞24 h后，以GAPDH為內(nèi)參，以0μmol/L組為對(duì)照，c-Met表達(dá)量分別為1.00±0.00、0.70±0.09、0.33±0.08，各組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，且隨濃度升高，c-Met表達(dá)量逐漸下降。0μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/Lα-紅沒藥醇作用于U87細(xì)胞24 h后，c-Met表達(dá)量分別為1.00±0.00、0.71±0.08、0.27±0.08，各組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，且隨濃度升高，c-Met表達(dá)量逐漸下降。見圖5。

6 轉(zhuǎn)染c-Met過表達(dá)質(zhì)粒后部分逆轉(zhuǎn)α-紅沒藥醇對(duì)U251細(xì)胞遷移的抑制作用 空載質(zhì)粒組(A組)、空載質(zhì)粒+2.5μmol/Lα-紅沒藥醇組(B組)、c-Met過表達(dá)質(zhì)粒組(C組)、c-Met過表達(dá)質(zhì)粒+2.5μmol/Lα-紅沒藥醇組(D組)劃痕愈合百分比分別為48.07%±4.13%、13.11%±2.99%、65.45%±5.25%、35.61%±4.70%。各組之間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，且D組較B組劃痕愈合百分率明顯升高。提示過表達(dá)c-Met后部分逆轉(zhuǎn)了α-紅沒藥醇對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移的抑制作用。見圖6。

7 轉(zhuǎn)染c-Met過表達(dá)質(zhì)粒后部分逆轉(zhuǎn)α-紅沒藥醇對(duì)U251細(xì)胞侵襲的抑制作用 空載質(zhì)粒組(A組)、空載質(zhì)粒+2.5μmol/Lα-紅沒藥醇組(B組)、c-Met過表達(dá)質(zhì)粒組(C組)、c-Met過表達(dá)質(zhì)粒+2.5μmol/Lα-紅沒藥醇組(D組)穿梭到下室的細(xì)胞數(shù)分別為254.33±15.72、91.33±14.46、367.00±25.78、209.44±18.13。各組之間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，且D組較B組穿梭到下室的細(xì)胞數(shù)明顯增加。提示過表達(dá)c-Met后逆轉(zhuǎn)了α-紅沒藥醇對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤侵襲的抑制作用。見圖7。

8 轉(zhuǎn)染c-Met過表達(dá)質(zhì)粒后部分逆轉(zhuǎn)α-紅沒藥醇對(duì)U251細(xì)胞MMP-2和MMP-9表達(dá)的抑制作用 Western blotting檢測(cè)c-Met、MMP-2、MMP-9表達(dá)量的變化，以GAPDH為內(nèi)參，以空載質(zhì)粒組(A組)為對(duì)照，空載質(zhì)粒+2.5μmol/Lα-紅沒藥醇組(B組)、c-Met過表達(dá)質(zhì)粒組(C組)、c-Met過表達(dá)質(zhì)粒+2.5μmol/Lα-紅沒醇組(D組)，c-Met表達(dá)量分別為 100.00±0.00、0.39±0.04、1.56±0.06、0.60±0.04，各組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。MMP-2表達(dá)量分別為1.00±0.00、0.49±0.08、1.46±0.12、0.71±0.10，各組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。MMP-9表 達(dá) 量 分 別 為 1.00±0.00、0.45±0.07、1.41±0.11、0.73±0.11，各組間兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。D組各蛋白表達(dá)量較B組均顯著升高，提示過表達(dá)c-Met后，逆轉(zhuǎn)了α-紅沒藥醇對(duì)c-Met的抑制作用，進(jìn)而部分逆轉(zhuǎn)了α-紅沒藥醇對(duì)MMP-2及MMP-9的抑制作用。見圖8。

圖2 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示α-紅沒藥醇對(duì)U251、 U87細(xì)胞遷移的影響(×400) (aP＜0.05, vs 0μmol/L)Fig. 2 Cell scratch test shows the effects of 0 μmol/L, 1.25 μmol/L, 2.5 μmol/L of α-bisabolol on migration of U251 and U87 cells (×400) (aP＜0.05, vs 0μmol/L)

圖3 不同濃度α-紅沒藥醇對(duì)U251、U87細(xì)胞侵襲能力的影響(×400) (aP＜0.05, vs 0μmol/L)Fig. 3 Effects of 0 μmol/L, 1.25 μmol/L, 2.5 μmol/L of α-bisabolol on the invasive ability of U251 and U87 cells (×400) (aP＜0.05, vs 0μmol/L)

圖4 不同濃度α-紅沒藥醇作用于U251、U87細(xì)胞24 h后Western blotting檢測(cè)MMP-2、MMP-9表達(dá)量的變化 (aP＜0.05, vs 0μmol/L)Fig. 4 After being treated with 0 μmol/L, 1.25 μmol/L, 2.5 μmol/L α-bisabolol, western blotting was used to detect the expression level of MMP-2, MMP-9 protein in U251 and U87 cells (aP＜0.05, vs 0μmol/L)

討 論

本實(shí)驗(yàn)首先用CCK8比色法檢測(cè)了α-紅沒藥醇對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U251、U87的增殖抑制作用，探索藥物作用的合適濃度。通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了α-紅沒藥醇對(duì)U251、U87細(xì)胞遷移和侵襲的抑制作用，Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與腫瘤遷移和侵襲密切相關(guān)的金屬基質(zhì)蛋白酶MMP-2及MMP-9表達(dá)下調(diào)，同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)α-紅沒藥醇也引起了c-Met表達(dá)的下調(diào)，于是建立了c-Met是MMP-2、MMP-9的上游調(diào)節(jié)蛋白的假設(shè)。為進(jìn)一步驗(yàn)證猜想，我們?cè)赨251細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了過表達(dá)c-Met的質(zhì)粒，繼續(xù)用α-紅沒藥醇作用于腫瘤細(xì)胞，通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過表達(dá)c-Met后部分逆轉(zhuǎn)了α-紅沒藥醇對(duì)U251細(xì)胞遷移和侵襲的抑制作用。Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)c-Met后MMP-2、MMP-9的表達(dá)也同時(shí)上調(diào)，進(jìn)一步證實(shí)了我們的假設(shè)。由此我們得出α-紅沒藥醇通過下調(diào)c-Met進(jìn)而抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移和侵襲的結(jié)論。

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是最常見的顱內(nèi)惡性腫瘤，由于其侵襲性生長的特性，侵犯周圍血管神經(jīng)，導(dǎo)致手術(shù)難以切除干凈，原位復(fù)發(fā)率高，預(yù)后極差，嚴(yán)重威脅患者生命健康，是神經(jīng)外科重要的一類疾病。且由于血腦屏障的存在，普通化療藥物難以通過，不能在腫瘤局部達(dá)到有效作用濃度，普通化療藥物的應(yīng)用受到極大限制，目前推薦的一線化療藥物僅有替莫唑胺等少數(shù)藥物[28]。因此找到一種既能順利透過血腦屏障又能高效殺滅膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的藥物成為臨床治療的焦點(diǎn)和難點(diǎn)。隨著科學(xué)研究的深入，我們發(fā)現(xiàn)植物中存在很多天然生物活性分子，從中篩選有效的抗腫瘤藥物成為目前重要的研究方向。

α-紅沒藥醇是來自洋甘菊、春黃菊等植物頭狀花序精油中的脂溶性生物活性分子，應(yīng)用于化妝品行業(yè)已經(jīng)有上百年歷史，具有良好的皮膚穿透性。既往研究表明，α-紅沒藥醇能誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡[24,26,29-31]，對(duì)體外膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞也具有高效殺滅作用，而同樣濃度下對(duì)正常組織細(xì)胞幾乎沒有影響。但α-紅沒藥醇對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移和侵襲作用的影響卻鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過研究發(fā)現(xiàn)，α-紅沒藥醇不僅能有效抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U251、U87增殖，還能通過阻斷c-Met，進(jìn)而下調(diào)金屬基質(zhì)蛋白酶MMP-2和MMP-9的表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)α-紅沒藥醇能在體外抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，并初步探索了其作用機(jī)制，為α-紅沒藥醇在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的進(jìn)一步研究初步奠定了基礎(chǔ)。