外周血T細(xì)胞亞群 IL-32及IL-6水平在肺結(jié)核患者中的表達(dá)

(江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212001)

肺結(jié)核為嚴(yán)重危害人類生命健康的傳染病之一。其病原菌結(jié)核桿菌入侵人體后，可刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫與體液免疫。其中細(xì)胞免疫主要由T細(xì)胞介導(dǎo)，T細(xì)胞根據(jù)其表達(dá)因子的不同可分為CD4+和CD8+細(xì)胞，其中CD4+細(xì)胞又可以分為Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞，Th1細(xì)胞可分泌IL-12等細(xì)胞因子，主要在抗胞內(nèi)病原體感染中發(fā)揮作用，Th2細(xì)胞可分泌IL-10、IL-6等細(xì)胞因子，主要為輔助體液免疫應(yīng)答；而CD8+細(xì)胞主要功能為特異性殺傷靶細(xì)胞。在正常情況下兩者可維持動(dòng)態(tài)的平衡，保護(hù)機(jī)體免受疾病的侵害。但當(dāng)CD4+/CD8+比值下降時(shí)，則往往表示疾病較嚴(yán)重或預(yù)后不良。IL-6是一種具有多種生物功能的細(xì)胞因子，由淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生，具有刺激細(xì)胞生長，促進(jìn)細(xì)胞分化，調(diào)節(jié)造血，調(diào)節(jié)神經(jīng)及免疫反應(yīng)等多種生物功能，是最早發(fā)現(xiàn)的異常表達(dá)與疾病有關(guān)的因子，與多種呼吸系統(tǒng)疾病具有密切的聯(lián)系[1]。IL-32則是近來新發(fā)現(xiàn)的一種炎癥細(xì)胞因子，具有促炎癥因子的特性，可通過激活P38MAPK等途徑產(chǎn)生諸如TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子。有國外報(bào)道，若IL-32功能消失，病人更容易得結(jié)核病。因此，當(dāng)結(jié)核桿菌感染時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致T細(xì)胞分化失衡，IL-32與IL-6生成增多。本研究旨在分析肺結(jié)核患者外周血T細(xì)胞亞群、IL-6及IL-32的水平變化及相關(guān)性，為進(jìn)一步研究肺結(jié)核發(fā)生機(jī)制與進(jìn)展提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 肺結(jié)核組：選擇2016年12月～2017年12月本院收治的肺結(jié)核患者40例，其中，男23例，女17例；年齡18～70歲；所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)制定的《肺結(jié)核診斷和治療指南》，診斷為浸潤性肺結(jié)核，且排除其他臟器病變及免疫系統(tǒng)疾病。所有入選患者均未使用過激素和免疫抑制劑。對照組：來源于本院招收的健康志愿者40例，無煙酒嗜好及其它不良習(xí)慣，PPD試驗(yàn)檢測均為陰性，其中男25例，女15例；年齡18～70歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究上報(bào)醫(yī)院倫理委員會(huì)并獲得批準(zhǔn)，所有入組患者均簽署知情同意書。

1.2方法 肺結(jié)核組患者于入院后的第2天和化療4周后分別空腹抽取靜脈血，健康對照者則于同日的早晨空腹時(shí)抽取靜脈血，均抽取10 ml并用肝素抗凝，0.5 h內(nèi)以3000 r/min離心，取血清存放冰箱待檢(-70℃)。IL-6、IL-32的檢測采用ELISA法(標(biāo)準(zhǔn)試劑盒均由深圳欣博盛科技公司生產(chǎn))，操作時(shí)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)試劑盒的說明書進(jìn)行。T細(xì)胞亞群則采用德國PAS公司生產(chǎn)的14-01-1OOOAr-HBO-69型流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。采用CellQuest軟件分析測定免疫細(xì)胞的CD4+和CD8+水平并觀察其變化情況。

2 結(jié)果

2.1兩組IL6及IL32濃度的比較 肺結(jié)核組化療后IL6及IL32濃度均有大幅下降，但仍高于對照組(P<0.01)。見表1。

分 組nIL6IL32對照組 402.39±0.6356.83±13.10肺結(jié)核組40 化療前48.30±12.19△198.65±39.27△ 化療后6.49±3.29*△83.69±11.39*△

注：△與對照組比較P<0.01；＊與化療前比較P<0.01

2.2兩組外周血T細(xì)胞亞群比較 兩組CD8+、CD4+及CD4+/CD8+比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肺結(jié)核組CD8+高于對照組，CD4+及CD4+/CD8+低于對照組。見表2。

表2 兩組外周血T細(xì)胞亞群比較

3 討論

肺結(jié)核的免疫機(jī)制較為復(fù)雜，肺結(jié)核合并感染及單純肺結(jié)核患者均存在一定的炎癥反應(yīng)，多種免疫細(xì)胞、免疫因子和炎性因子參與其發(fā)病過程[2]。有研究認(rèn)為，其最主要的免疫機(jī)制為細(xì)胞免疫[3]，而體液免疫的作用并不是很明顯[4]。當(dāng)結(jié)核桿菌侵入人體后，巨噬細(xì)胞首先做出反應(yīng)，分泌大量IL-1、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子促使單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞聚集到結(jié)核桿菌侵入部位，漸漸形成肉芽腫，限制結(jié)核桿菌擴(kuò)散并最終殺死結(jié)核桿菌。在此過程中，T淋巴細(xì)胞只能表達(dá)成CD4+細(xì)胞或CD8+細(xì)胞，而CD4+細(xì)胞在淋巴因子的促進(jìn)下可以分化為 Th1 和 Th2細(xì)胞，Th1細(xì)胞具有增強(qiáng)巨噬細(xì)胞抗細(xì)胞內(nèi)寄生菌的能力；T細(xì)胞與巨噬細(xì)胞相互作用和協(xié)調(diào)，共同完善結(jié)核病的免疫保護(hù)作用。IL-6是由179-181氨基酸殘基組成的精蛋白，是一種致炎因子，它可增加炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生并提高炎癥的反應(yīng)強(qiáng)度，誘導(dǎo)保護(hù)性T細(xì)胞的產(chǎn)生，激活T細(xì)胞分泌IFN-α，并促使粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖。IL-32是一種分泌型蛋白質(zhì)，質(zhì)量大約為27 kD，其主要作用為誘導(dǎo)單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化，調(diào)節(jié)NK細(xì)胞正常功能，促進(jìn)炎癥介質(zhì)釋放等。有研究證明，IL-32可能作為一種促炎因子參與肺結(jié)核的炎癥反應(yīng)，但其機(jī)制尚不完全明確，因此IL-6與IL-32可以作為肺結(jié)核炎性狀態(tài)的靈敏指標(biāo)[5]。

外周血T細(xì)胞的數(shù)量、各亞群構(gòu)成比、功能的變化和促炎細(xì)胞因子和抑炎細(xì)胞因子反應(yīng)平衡，在結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中起著重要作用。本研究表明，肺結(jié)核組患者周圍血中CD4+細(xì)胞減少，而CD8+細(xì)胞明顯增加，CD4+/CD8+降低，與對照組比較有顯著差異，說明肺結(jié)核患者免疫功能明顯下降。這可能與機(jī)體感染結(jié)核桿菌后誘導(dǎo)T細(xì)胞活化為致敏的T淋巴細(xì)胞，從而產(chǎn)生各種細(xì)胞因子，殺滅結(jié)核桿菌，避免機(jī)體發(fā)病有關(guān)。肺結(jié)核組患者化療前IL-6和 IL-32表達(dá)水平顯著升高，化療結(jié)束后IL-6和IL-32表達(dá)水平顯著下降，但是仍高于對照組，其機(jī)制可能為：機(jī)體在遭受結(jié)核桿菌的侵襲時(shí)，其機(jī)體的炎癥反應(yīng)較強(qiáng)，產(chǎn)生大量IL-6、IL-32 等促炎細(xì)胞因子，血清中促炎細(xì)胞因子的急劇升高可造成結(jié)核中毒癥狀和呼吸道癥狀，尤其是肺部的病灶炎癥表現(xiàn)劇烈。但當(dāng)肺結(jié)核經(jīng)過化療后，結(jié)核菌被抗癆藥物清除，炎癥應(yīng)激原減少，炎癥反應(yīng)減輕，促炎因子IL-6與IL-32隨之下降。因此，檢測IL-6與IL-32水平可以間接評(píng)價(jià)結(jié)核桿菌對藥物的敏感性[6]。

綜上所述，檢測外周血T細(xì)胞亞群、IL-6和 IL-32表達(dá)水平可初步了解肺結(jié)核患者免疫狀態(tài)和促炎、抑炎反應(yīng)水平，為進(jìn)一步研究肺結(jié)核的嚴(yán)重程度及判斷治療預(yù)后水平開辟了新的方法和思路。