塞曼背景校正法測(cè)定全血中的鉛

趙軍峰 李曉暉

(鄭州市職業(yè)病防治院，河南 鄭州 450053)

鉛(Pb)是多系統(tǒng)、多親和性的重金屬元素，具有蓄積性，達(dá)到一定濃度，還會(huì)對(duì)人身體造成不可修復(fù)的傷害。血鉛常作為人體鉛暴露水平的重要指標(biāo)[1]。測(cè)定全血中的鉛通常采用石墨爐原子吸收法[2]，但由于血液基體成分復(fù)雜，產(chǎn)生嚴(yán)重的基體干擾，常用的基體改進(jìn)劑有磷酸二氫銨、氯化鈀、硝酸鈀、硝酸鎂、曲拉通X-100、抗壞血酸等[3-6]。本實(shí)驗(yàn)參照WS/T174-1999血鉛的酸脫蛋白-石墨爐原子吸收光譜法，用1%硝酸和0.1%TritonX-100為血樣稀釋液，設(shè)置石墨爐分三步干燥兩步灰化程序升溫，采用塞曼背景校正橫向加熱平臺(tái)石墨爐，有效地消除了石墨爐原子吸收法直接測(cè)定全血鉛時(shí)的基體干擾。對(duì)血鉛成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定分析，結(jié)果滿意。樣品的回收率為95.8%～105.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=3.31%。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

1.1.1儀器 ZEEnit700原子吸收儀，鉛空心吸收燈，平臺(tái)石墨管，肝素鈉真空采血管。

1.1.2試劑 硝酸(優(yōu)級(jí)純)，TritonX-100，小牛全血，1%硝酸-0.1%TritonX-100為血液稀釋劑。血鉛標(biāo)溶液： 取中國(guó)計(jì)量科學(xué)院化學(xué)所的GBW(E)080129(100 μg/ml)鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液，用1%硝酸稀釋至10.0 μg/ml，取1.00 ml 10.0 μg/ml的鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液置于100.00 ml的容量瓶中，用1%硝酸-0.1%TritonX-100混合液定容至刻度，即為100.0 μg/L的鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。

1.2 儀器工作條件

儀器參數(shù)與升溫程序見表1。

表1 儀器參數(shù)與升溫程序

1.3 樣品采集與保存

對(duì)采集靜脈血的皮膚處依次用0.2% 硝酸、純水、1%碘伏、75%醫(yī)用酒精擦洗，用同一批次的肝素鈉真空采血管采集靜脈血2 ml，輕搖均勻，置于4℃ 冰箱保存，盡快測(cè)定。取2 ml 1% 硝酸置于同一批次的肝素鈉真空采血管內(nèi)作為采血空白樣。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

取6支5.00 ml容量瓶，分別加入0.00、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50 ml的100 μg/L的鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，依次加入0.50 ml新鮮的小牛全血和0.50 ml的1%硝酸，用1%硝酸-0.1%TritonX-100混合液定容至刻度，搖勻備用。

1.5 樣品測(cè)定

取0.50 ml血樣于5.00 ml容量瓶中，加入0.50 ml 1%硝酸，用1%硝酸-0.1%TritonX-100混合液定容至刻度，搖勻，取樣進(jìn)行自動(dòng)分析。

2 結(jié) 果

2.1 試劑空白本底檢測(cè)

對(duì)本實(shí)驗(yàn)用到的1%硝酸和0.1%TritonX-100進(jìn)行空白檢測(cè)數(shù)據(jù)見表2，結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)用到的試劑符合血鉛檢測(cè)要求。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以峰面積值對(duì)血鉛濃度做吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：y=2.549×10-3X+0.008109，相關(guān)系數(shù)r=0.9991。

2.3 檢測(cè)限

連續(xù)5天對(duì)空白樣本進(jìn)行10次測(cè)量，計(jì)算得3倍標(biāo)準(zhǔn)差得到方法的檢出限為0.4 μg/L，符合血鉛測(cè)定方法的檢測(cè)限不得大于6 μg/L的技術(shù)要求。

2.4 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

表3為兩種不同濃度的血鉛成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果。

表3 血鉛成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果(μg/L)

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

分別對(duì)高中低三種濃度的血樣進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，結(jié)果見表4。

表4 三種濃度血樣重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果((n=6，μg/L)

3 討 論

石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定全血中的鉛，大多采用加入基體改進(jìn)劑來(lái)消除血樣成分復(fù)雜帶來(lái)的干擾。經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TritonX-100濃度增大背景吸收較高，濃度降低樣品穩(wěn)定時(shí)間較短，本研究采用1%硝酸-0.1%TritonX-100稀釋血樣獲得較滿意效果。

鑒于血樣成分復(fù)雜，本研究降低升溫速率，分別在70℃、90℃、110℃時(shí)干燥，避免樣品干燥時(shí)飛濺。本研究通過(guò)測(cè)繪吸光度隨灰化溫度的變化曲線確定了最佳灰化溫度，分別在350℃、500℃兩步灰化，比較完全地清除了血樣基體帶進(jìn)的干擾物。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)，室溫保持在26℃以下，血樣經(jīng)處理后能穩(wěn)定2 h，室溫超過(guò)26℃，處理后的樣品不穩(wěn)定。

本研究用1%硝酸-0.1%TritonX-100混合液稀釋全血樣品。采用橫向加熱技術(shù)，分三步低升溫速率升溫干燥，兩步灰化，灰化比較完全，無(wú)殘?jiān)鼩埩?，通過(guò)塞曼背景校正，扣除背景干擾，提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確度和精密度。根據(jù)文獻(xiàn)[3-6]報(bào)道，我們分別用氯化鈀、硝酸鈀、抗壞血酸、磷酸氫二銨等作基體改進(jìn)劑，發(fā)現(xiàn)與不加基體改進(jìn)劑相比鉛的吸收峰的峰形和面積變化不大，在測(cè)定過(guò)程中盡量少加試劑，因此采用不加基體改進(jìn)劑，直接進(jìn)樣測(cè)定。