豬鏈球菌病及其自家滅活疫苗的制備

摘 要：豬鏈球菌病是由多種致病性豬鏈球菌感染引起的一種人畜共患病，該病臨床上常表現(xiàn)為敗血癥、腦膜炎、淋巴膿腫、關(guān)節(jié)炎等癥狀。由于鏈球菌血清型較多，較有效的預防方法是分離本場豬鏈球菌，制備成自家滅活苗進行免疫。

關(guān)鍵詞：豬鏈球菌病 疫苗制備 自家滅活苗

一、豬鏈球菌病的特點

（一）病原特點

豬鏈球菌是一種革蘭氏陽性球菌，呈鏈狀排列，無鞭毛，不運動，不形成芽胞，但有莢膜。為兼性厭氧菌，但在無氧時溶血明顯，培養(yǎng)最適溫度為37℃。菌落細小，直徑1～2mm，透明、發(fā)亮、光滑、圓形、邊緣整齊，在液體培養(yǎng)基中呈鏈狀。到目前為止，共有35個血清型（1～34，1/2型），最常見的致病血清型為2型。

（二）致病性

豬鏈球菌的主要毒力因子包括莢膜多糖、溶菌酶釋放蛋白、細胞外因子以及溶血素等。我國科研工作者研究比較多的是溶菌酶釋放蛋白（MRP）和細胞外蛋白 因子（EF），二者均為陽性的菌株，一般具有較高的毒力，它們是評價豬鏈球菌2型毒力的重要指標。CPS是抵抗巨噬細胞吞噬的重要物質(zhì)，是豬鏈球菌進行分型的標志，是目前唯一被確認的毒力因子。

（三）流行特點

1 病原廣泛存在

豬鏈球菌常污染環(huán)境，可在糞、灰塵及水中存活較長時間。該病四季均可發(fā)生，但在炎熱，潮濕季節(jié)多發(fā)。豬鏈球菌經(jīng)呼吸道、消化道、傷口及黏膜感染，也可垂直傳播，昆蟲媒介在該病的傳播中也起著重要作用。豬的鏈球菌是條件性致病菌，只有在它適宜的環(huán)境中，豬只抵抗力低下的情況下才能發(fā)病，多呈散發(fā)和地方性流行，偶有暴發(fā)。新疫區(qū)可呈暴發(fā)流行，發(fā)病率和死亡率較高。各種品種，各種年齡的豬均易感染。

2 仔豬發(fā)病死亡率高

仔豬多發(fā)生于1，2月齡，此時的母源抗體水平相對較低，本身抵抗力差，在應激，其他病原的侵襲等誘因下多發(fā)生；同時可通過小豬咬架的傷口，帶菌者的唾液及血液傳播，因此仔豬的發(fā)病率和死亡率較其他生長階段要高。臨床上仔豬多見于敗血型和腦膜腦炎型。

二、自家滅活苗的制備

（一）病料采集

挑選有典型腦神經(jīng)炎癥狀及有關(guān)節(jié)炎癥狀的產(chǎn)房仔豬及保育仔豬多頭，要求為發(fā)病初期未使用任何抗生素治療，且體溫升高在41℃以上的病豬。剖檢發(fā)現(xiàn)病豬的腦軟膜、肺、肝、淋巴結(jié)有不同程度的出血點，心包、腹腔有纖維素性滲出物。關(guān)節(jié)腔內(nèi)充滿黃色膠樣液體，有的形成干酪樣物附著在關(guān)節(jié)面。無菌采取病豬的關(guān)節(jié)病變部位的關(guān)節(jié)液，進行細菌的分離和鑒定。

（二）病原分離與鑒定

1 細菌的分離培養(yǎng)

病料采集，主要采集病豬的關(guān)節(jié)液。將采集的關(guān)節(jié)液分別接種到血液瓊脂平板培養(yǎng)基上和腦心湯液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)12—24 h。該菌培養(yǎng)結(jié)果為有針頭或針尖大小的灰白色、濕潤、黏稠、周圍隆起的半透明菌落，在血液瓊脂平板上菌落周圍有β溶血。革蘭染色鏡檢，鏡下可見單個或成對排列的圓形或橢圓形革蘭陽性小球菌。在培養(yǎng)基上很少形成鏈狀，而在肉湯中可形成長鏈狀。

2細菌的鑒定

對上述分離到的革蘭陽性球菌進一步做生化反應鑒定，該菌能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、水楊苷、海藻糖和菊糖，產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣，過氧化氫觸酶反應陰性。

3動物接種

將經(jīng)分離鑒定挑選出的鏈球菌培養(yǎng)液分別給4只家兔腹腔注射，2 mL/只，接種后12—36 h內(nèi)觀察家兔是否死亡，如死亡則從死亡家兔的心、肝、脾等器官分離細菌。接種后12—36 h內(nèi)家兔全部死亡。從死亡家兔的心、肝、脾等器官中能分離到純化的致病性鏈球菌，可確定該病豬的關(guān)節(jié)炎主要由鏈球菌感染所致。（三）疫苗制備過程

將上述分離純化的鏈球菌在無菌操作條件下接種腦心湯培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)6—12 h，然后把每支試管培養(yǎng)物接種到3000 mL的腦心湯培養(yǎng)液中，37℃增菌培養(yǎng)18—24 h。菌液離心后，用滅菌的生理鹽水將菌體沉淀稀釋一定倍數(shù)，用0.3%體積的福爾馬林將菌液滅活，福爾馬林要逐滴加入，并且要一邊加入一邊振蕩，然后放入培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)48 h。取滅活的培養(yǎng)物在血液瓊脂、沙氏培養(yǎng)基、肝湯液體培養(yǎng)基中37℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察有無菌落生長。經(jīng)檢驗無菌生長后，與氫氧化鋁佐劑進行混勻及分裝。

（四）雜菌檢驗和安全檢驗

雜菌檢驗取滅活的鏈球菌培養(yǎng)物在血液瓊脂、沙氏培養(yǎng)基、肝湯液體培養(yǎng)基中37℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察沒有菌落生長，說明鏈球菌培養(yǎng)物滅活完全，沒有鏈球菌及其他細菌生長。

安全性檢驗疫苗制好后，選5頭仔豬，每頭豬分別注射5 ml自家苗，30 min內(nèi)沒有出現(xiàn)嘔吐等異常癥狀，說明該批疫苗可以使用，若30 min內(nèi)出現(xiàn)嘔吐等異常癥狀者，該批疫苗不能使用。

三、其他

豬鏈球菌病對于我國養(yǎng)豬業(yè)來說并不是一個陌生的傳染病，從1949年到現(xiàn)在臨診上一直有病例出現(xiàn)。之所以舊病新發(fā)并且來勢兇猛，造成巨大的經(jīng)濟損失，甚至嚴重地威脅到人類的生命，筆者認為主要原因是人們對豬鏈球菌病的預防不夠全面。豬鏈球菌是一種條件致病菌，所以外界環(huán)境的刺激是導致發(fā)病的一個重要的原因。事實上，幾乎所有的動物疾病都有一個共同的發(fā)病原因，就是沒有做好飼養(yǎng)管理工作。這包括飼料質(zhì)量不佳，如飼料中存在黃曲霉毒素，會對肝臟造成嚴重的損害，動物免疫力也就下降。還有環(huán)境消毒不徹底，畜舍擁擠，通風不良，夏季溫度過高等也會導致發(fā)病率增加。免疫失敗的原因主要有豬藍耳病、豬圓環(huán)病、偽狂犬病等豬的免疫抑制病存在。豬在接種疫苗之前就患病，也是導致免疫失敗的重要原因。因此，只有綜合解決上述的非疫苗因素的問題，再配合自家疫苗的免疫，才能減少或控制豬場鏈球菌病的發(fā)病率。

參考文獻

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作者簡介：劉晨晨 ，1995年-，女，籍貫： 河南省商丘市，河南農(nóng)業(yè)大學，牧醫(yī)工程學院2015級動植物檢疫（動物檢疫）專業(yè)在讀本科生。