改進(jìn)代茶飲保健作用實(shí)驗(yàn)研究

王昕 陳星宇 劉繼平

【摘要】目的：對(duì)改進(jìn)代茶飲的保健作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法：觀察改進(jìn)代茶飲對(duì)小鼠耐缺氧、抗疲勞、睡眠時(shí)間的影響，以及對(duì)小鼠記憶功能、免疫、抗氧化等方面的改善作用。結(jié)果：耐缺氧、抗疲勞及睡眠試驗(yàn)研究結(jié)果表明，改進(jìn)代茶飲組與對(duì)照組相比存活時(shí)間延長（P<0.05），游泳時(shí)間明顯提高（P<0.01），睡眠時(shí)間無較大差異；改進(jìn)代茶飲能明顯降低小鼠體重（P<0.01），升高小鼠脾臟臟器指數(shù)（P<0.05），而對(duì)胸腺臟器指數(shù)無顯著影響；改進(jìn)代茶飲能升高小鼠血清SOD及GSH-βx活性（P<0.05），提高M(jìn)DA的水平（P<0.01）；跳臺(tái)試驗(yàn)學(xué)習(xí)和記憶測試中，改進(jìn)代茶飲的反應(yīng)時(shí)間顯著較長（P<0.01）；錯(cuò)誤次數(shù)明顯較少（P<0.05）；水迷宮實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練中，改進(jìn)代茶飲可明顯縮短小鼠尋找平臺(tái)的潛伏期和游泳距離（P<0.05）；水迷宮試驗(yàn)測試中，改進(jìn)代茶飲可明顯延長小鼠設(shè)定目標(biāo)象限的游泳距離（P<0.01），穿越平臺(tái)次數(shù)增多。結(jié)論：改進(jìn)代茶飲有一定保健作用。

【關(guān)鍵詞】改進(jìn)代茶飲；保健作用；實(shí)驗(yàn)研究

亞健康通俗來說就是似病非病，它給人們帶來種種不適，但卻沒有顯著的病理指標(biāo)改變。可能表現(xiàn)為失眠，有氣無力，精神差等等狀態(tài)低下的癥狀。當(dāng)今社會(huì)，絕大多數(shù)人從小就背負(fù)了巨大的學(xué)習(xí)壓力，成年后復(fù)雜多變的人際交往，工作中面臨各方壓力都是可能導(dǎo)致亞健康的。亞健康的人需要及時(shí)的治療，因其身體機(jī)能已經(jīng)有所下降，所以不盡早干預(yù)治療，則有很大可能將亞健康的狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛疾〉臓顟B(tài)，畢竟亞健康的病人其免疫力已經(jīng)顯著降低。如此說來，用傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)來解決亞健康的問題，是具有開創(chuàng)性和現(xiàn)實(shí)意義的。針對(duì)保健市場魚龍混雜的局面，根據(jù)我們傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)“治未病”的思想和“藥食同源”的理念，結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)來開發(fā)中藥代茶飲，可為亞健康狀態(tài)人群的保健提供新的科學(xué)方法。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性SD小鼠80只，SPF級(jí)，體重20～22g，空軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心供應(yīng)，許可證號(hào)：SCXK（軍）2012-0007。

1.2 試劑

改進(jìn)代茶飲水提液，制備：取干燥改進(jìn)代茶飲，加蒸餾水，煮沸2次；每次50min，合并濾液，置冰箱中備用。用時(shí)采用蒸餾水溶解配置成濃度1g/mL的液體。超氧化物歧化酶（SOD）測試盒（A001-3）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）測試盒（A005）、丙二醛（MDA）測試盒（A003-1），以上試劑來源均為南京建成生物工程有限公司。

1.3 主要儀器

低速離心機(jī)（江蘇省金壇市正基儀器有限公司，型號(hào)KA-1000）。酶標(biāo)儀（美國BioTek公司，型號(hào)ELX8080IU）。跳臺(tái)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站，型號(hào)YLS-3T）。Morris水迷宮（上海吉量）。電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)BSA-224S）。

2 方法

2.1 耐缺氧實(shí)驗(yàn)

2.1.1 實(shí)驗(yàn)

取雄性小鼠，體重20±2g，自由攝食攝水，動(dòng)物室內(nèi)只在白天光照12小時(shí)，動(dòng)物室溫度維持在22-25℃。把15g消除二氧化碳和水的鈉石灰放到250毫升的廣口瓶中。再取20只測量過體重的小鼠隨機(jī)均分為兩組。一組給予改進(jìn)代茶飲適量灌胃（根據(jù)人日用量計(jì)算小鼠等效量），另一組給予等量生理鹽水。給茶30min時(shí)，把2組小鼠一并放置于密封廣口瓶內(nèi)。隨即開始計(jì)時(shí)，留心小鼠的狀態(tài)，于小鼠死亡時(shí)，得出實(shí)驗(yàn)中小鼠所存活的時(shí)間。綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，求得改進(jìn)代茶飲組小鼠平均存活時(shí)間，并與對(duì)照組相比，求得存活時(shí)間延長的百分率。

2.1.2 計(jì)算方法

存活時(shí)間延長百分率=（受試茶組平均存活時(shí)間-對(duì)照組平均存活時(shí)間）/對(duì)照組平均存活時(shí)間×100%。

2.2 抗疲勞實(shí)驗(yàn)

取20只測量過體重的小鼠隨機(jī)均分成兩組。一組給予改進(jìn)代茶飲適量灌胃（根據(jù)人日用量計(jì)算小鼠等效量），另一組給予等量生理鹽水。給茶后30分鐘把小鼠（每次1只）投入玻璃缸進(jìn)行游泳試驗(yàn)，水深25cm，水溫設(shè)置為300C，用秒表記錄小鼠鼻孔沉下水面所用時(shí)間，統(tǒng)計(jì)比較。

2.3 改進(jìn)代茶飲對(duì)小鼠睡眠時(shí)間的影響

取20只測量過體重的小鼠隨機(jī)均分成兩組。一組給予改進(jìn)代茶飲適量灌胃（根據(jù)人日用量計(jì)算小鼠等效量），另一組給予等量生理鹽水。給茶30分鐘后，小鼠腹腔注射0.15%戊巴比妥鈉，觀察記錄睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間，統(tǒng)計(jì)比較。

2.4 改進(jìn)代茶飲對(duì)小鼠記憶功能、免疫、杭氧化作用的研究

2.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥

取20只測量過體重的小鼠隨機(jī)均分成兩組。一組給予改進(jìn)代茶飲適量灌胃（根據(jù)人日用量計(jì)算小鼠等效量），另一組給予等量生理鹽水。連續(xù)給茶15d。

2.4.2 指標(biāo)測定

2.4.2.1 行為學(xué)

（1）跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)。每組小鼠喂對(duì)應(yīng)茶液15d時(shí)，把小鼠放到跳臺(tái)儀中，3min后。再將最底層銅柵通上36V交流電，記錄小鼠受到電擊后跳上跳臺(tái)的反應(yīng)時(shí)間以及小鼠5min內(nèi)受電擊的次數(shù)（出錯(cuò)次數(shù)），作為小鼠的學(xué)習(xí)成績。24h后把小鼠放置到跳臺(tái)儀中順應(yīng)環(huán)境變化3min，然后將其放置到跳臺(tái)上，記錄小鼠第1次跳下平臺(tái)的潛伏期及3min內(nèi)受電擊的次數(shù)（出錯(cuò)次數(shù)），作為小鼠的記憶成績。

（2）Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)在各組小鼠喂對(duì)應(yīng)茶液15d后開始。迷宮站臺(tái)半徑20.0cm，半徑240cm，水池高50cm，4個(gè)入水點(diǎn)分別為A、B、C、D，且把水迷宮等分為4個(gè)象限。迷宮的上面是一個(gè)由電腦所控制，能記錄小鼠活動(dòng)的攝像機(jī)，能監(jiān)測小鼠的所有活動(dòng)。小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力用小鼠找到站臺(tái)所需時(shí)間的長短來表示。實(shí)驗(yàn)室須絕對(duì)安靜，水溫保持的范圍為22±0.5℃。在開始實(shí)驗(yàn)前，小鼠須早晚訓(xùn)練2min，每次從不同入水點(diǎn)把試驗(yàn)小鼠置于水迷宮中，若小鼠 2min未找到站臺(tái)，則把小鼠拿到站臺(tái)上并讓小鼠在站臺(tái)上等待20s。第3天的水迷宮測試隨機(jī)選一下水點(diǎn)進(jìn)行。

2.4.2.2 血清SOD、MDA、GSH-Px測定

最后一次喂對(duì)應(yīng)茶液后24h，把小鼠眼球摘除取血，然后采用常規(guī)辦法分離血清。按照試劑盒方法測定血清SOD、MDA、GSH-Px值。

2.4.2.3 臟器指數(shù)

小鼠殺死后趕快取出胸腺、脾臟。吸去器官上的血液，并去除附著在器官上的脂肪、系膜，同時(shí)用電子天平稱取其濕質(zhì)量。最后根據(jù)小鼠體質(zhì)量計(jì)算胸腺和脾臟指數(shù)。

胸腺、脾臟指數(shù)計(jì)算公式：臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量（mg/g）。

3 結(jié)果

3.1 改進(jìn)代茶飲對(duì)小鼠耐缺氧、抗疲勞、睡眠時(shí)間的影響實(shí)驗(yàn)

比之于空白組，改進(jìn)代茶飲組存活時(shí)間明顯延長（P<0.05）；游泳時(shí)間提升（P<0.01）；而睡眠時(shí)間與空白組無差異，見表1。

3.2 改進(jìn)代茶飲水提液對(duì)小鼠體重及臟器指數(shù)的影響

比之于空白組，改進(jìn)代茶飲組的體重明顯降低（P<0.01），胸腺臟器指數(shù)與空白組無明顯差異；脾臟臟器指數(shù)升高（P<0.05，表2）。

3.3 改進(jìn)代茶飲水提液對(duì)小鼠抗氧化指標(biāo)的影響

比之于空白組，改進(jìn)代茶飲組小鼠血清SOD活力明顯升高（P<0.05）；MDA水平顯著下降（P<0.01）；活力顯著升高（P<0.05，表3）。

3.4 改進(jìn)代茶飲水提液對(duì)小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的影響

比之于空白組，學(xué)習(xí)期間，改進(jìn)代茶飲組的反應(yīng)時(shí)間明顯較長（P<0.01）；錯(cuò)誤次數(shù)明顯較少（P<0.05）；記憶時(shí)期，改進(jìn)代茶飲組的潛伏期較長（P<0.01）；錯(cuò)誤次數(shù)較少（P<0.05，表4）。

3.5 改進(jìn)代茶飲水提液對(duì)小鼠水迷宮試驗(yàn)潛伏期的影響

訓(xùn)練期間，比之于空白組，改進(jìn)代茶飲組小鼠游泳潛伏期越來越短（表5）。

3.6 改進(jìn)代茶飲水提液對(duì)小鼠水迷宮試驗(yàn)總路程的影響

訓(xùn)練期間，比之于空白組，改進(jìn)代茶飲組在整個(gè)水迷宮象限內(nèi)總路程越來越短（表6）。

3.7 小鼠水迷宮試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)象限時(shí)間和穿越次數(shù)的影響

測試期間，比之于空白組，改進(jìn)代茶飲組在目標(biāo)象限路程明顯較長（P<0.01，表7，圖1）；穿越平臺(tái)的次數(shù)增多。

4 討論

如前文所述，亞健康通俗來說就是似病非病，它給人們帶來個(gè)種種不適，但卻不是醫(yī)學(xué)中的疾病。本論文的研究對(duì)象即為針對(duì)亞健康狀態(tài)所設(shè)的改進(jìn)代茶飲，其組成為黃芪，黨參，熟地，玫瑰花，綠萼梅，麥冬。改進(jìn)代茶飲的組成里黃芪能益氣升陽，益衛(wèi)固表；黨參補(bǔ)中益氣，生津養(yǎng)血；熟地能峻補(bǔ)血?dú)猓钏?；玫瑰花行氣散結(jié)，活血祛瘀；綠萼梅條達(dá)肝氣；麥冬生津潤肺。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黨參能增強(qiáng)人體抗應(yīng)激能力及免疫力；可抗?jié)?，增?qiáng)腸胃蠕動(dòng)等作用。黃芪能提高免疫力。熟地能延緩衰老，益智，同時(shí)能提高免疫力，增強(qiáng)造血功能。玫瑰花可擴(kuò)張血管，能預(yù)防心肌梗死，亦能抗部分病毒及病菌，如白血病病毒，傷寒桿菌等。麥冬可提高免疫力，有抗心肌缺血，抗心律失常，耐缺氧抗疲勞及降血糖等作用。

本研究所做實(shí)驗(yàn)中，耐缺氧實(shí)驗(yàn)顯示改進(jìn)代茶飲能使小鼠在缺氧環(huán)境中存活時(shí)間延長；抗疲勞實(shí)驗(yàn)顯示改進(jìn)代茶飲可使小鼠耐力提高；睡眠時(shí)間影響實(shí)驗(yàn)表明改進(jìn)代茶飲改善了小鼠的睡眠情況。在對(duì)改進(jìn)代茶飲對(duì)小鼠記憶功能、免疫、抗氧化作用的研究中也顯示小鼠的記憶功能有所增強(qiáng)，免疫力增強(qiáng)，抗氧化能力增強(qiáng)。由此可見，改進(jìn)代茶飲確有保健作用，可長期服用。

本研究旨在通過對(duì)改進(jìn)代茶飲的研究，來分析改進(jìn)代茶飲的保健效果，以尋求合適的產(chǎn)品來改善人們亞健康的狀態(tài)。目前來看，改進(jìn)代茶飲不失為改善亞健康的良好產(chǎn)品，值得推廣。

參考文獻(xiàn)

[1]任漢陽，張瑜，劉紅雨等.潤下藥火麻仁對(duì)便秘小鼠杭氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究[C].中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥基礎(chǔ)理論分會(huì)首屆臨床中藥學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集，2008，5（01）：158-162.

[2]張卓睿，毛迪瑞，高晗等.藍(lán)毒花青素對(duì)小鼠抗疲勞及體內(nèi)抗氧化作用[J].食品科學(xué)，2016，11（14）.

[3]劉繼平，程玥，關(guān)建建等.七福飲對(duì)糖尿病腦病模型大鼠認(rèn)知障礙及神經(jīng)病理改變的影響[J].中藥藥理與臨床，2015，31（05）：15-19.

[4]胡太超，劉玉敏，陶榮珊等.鹿茸多膚的抗疲勞作用機(jī)制研究[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，37（04）：469-475.

[5]王菌，劉淑集，蘇永昌.天然蝦青素的抗疲勞及杭氧化作用研究[J].西南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，37（09）.

[6]王丹，高永欣，馮小雨等.山藥對(duì)小鼠體力疲勞緩解及抗氧化作用的研究[J].河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2016，37（01）.

[7]馮偉偉，吳美媛等.靈芝酸棗仁膠囊改善睡眠的功能研究[J].生物技術(shù)進(jìn)展，2017，7（04）：327-330.

[8]付悅?cè)?，鄭或，王明陽?北五味子聯(lián)用甜葉菊代茶飲研究與開發(fā)[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，19（05）.

[9]曹寅，胡園，趙海霞等.開心散對(duì)缺氧和力竭運(yùn)動(dòng)小鼠的抗氧化及杭疲勞作用研究[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27（04）.

[10]常柄權(quán)，黃山，李斌等.復(fù)方瑪咖黑蒜顆?？蛊谂c耐缺氧作用研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2017，23（13）.