正常妊娠女性血細(xì)胞分析生物參考區(qū)間的建立

賀江，郭永燦，劉育欣，邱厚兵，鐘毓?jié)?，王春，馬彥納

(1.瀘州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科；2.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 瀘州 646000)

血細(xì)胞分析對篩查血液性疾病，了解機(jī)體感染、貧血狀況及常規(guī)止血功能，尤其是對評估孕婦的健康水平及監(jiān)測胎兒的生長發(fā)育有著不可替代的作用。然而，目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室血細(xì)胞分析都是引用儀器廠家或《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》的生物參考區(qū)間，這類參考區(qū)間都是以正常成年人為研究對象確立的，由于妊娠期女性血液分布發(fā)生了明顯的變化，若采用一般人群的生物參考區(qū)間去判斷妊娠女性的血細(xì)胞分析結(jié)果往往容易導(dǎo)致誤判。本研究依據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)文件C28-A3《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室參考區(qū)間的定義、建立和確認(rèn)》以及我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 402-2012《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間制定》[1]，對不同孕期婦女的血細(xì)胞分析結(jié)果進(jìn)行分析，旨在建立正常妊娠女性血細(xì)胞分析的參考區(qū)間，為臨床診斷和評估提供可靠的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

為減小個體差異，本研究采用縱向序貫研究的方法[2]，選擇2016年6月至2016年12月到本院定期進(jìn)行產(chǎn)前檢查并順利分娩的589例孕婦為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：無內(nèi)、外科和婦科疾病，無妊娠并發(fā)癥，追蹤其整個妊娠結(jié)局，剔除439例不符合本次研究范圍的檢測對象，最終篩選出150例正常孕婦作為本次最終研究對象，年齡18～37歲，平均(26.9±4.1)歲，孕期其它實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)均正常，未使用過藥物，孕期順利，無明顯的貧血癥狀，無明顯的內(nèi)科感染指征。按照孕周不同將其分為孕早期(≦12周)和孕晚期(≧28周)兩個實(shí)驗(yàn)組，對上述最終確定的150名正常孕婦，分別在孕早期、孕晚期各采一次靜脈血進(jìn)行血細(xì)胞分析，同時隨機(jī)選取150例同期到本院進(jìn)行健康體檢的非孕健康育齡婦女作為對照組，入圍對照組人群無內(nèi)、外科和婦科疾病病史，且在非月經(jīng)期內(nèi)，年齡19～39歲，平均(27.3±4.2)歲，年齡與妊娠女性組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有受試對象均簽署知情同意書，將兩個實(shí)驗(yàn)組和對照組的所有血細(xì)胞分析數(shù)據(jù)雙人核對錄入Excel 2007，以備導(dǎo)入SPSS 19.0軟件統(tǒng)計(jì)使用。

1.2 主要試劑與儀器

使用 Sysmex XS-1000i 全自動血液分析儀及原裝配套試劑，使用美國伯樂公司生產(chǎn)的質(zhì)控品，采血所用的乙二胺四乙酸二鉀(K2 EDTA)真空采血管，由江蘇康健醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢測方法

儀器按規(guī)定由廠家每6個月進(jìn)行1次校準(zhǔn)，使用的儀器和檢測項(xiàng)目操作均按本室制定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)文件執(zhí)行，檢測系統(tǒng)參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)評合格，室內(nèi)質(zhì)控各評價指標(biāo)的變異系數(shù)均在允許范圍內(nèi)，同時對本實(shí)驗(yàn)室不同的血細(xì)胞分析儀進(jìn)行定期的比對試驗(yàn)，使不同儀器間的結(jié)果具有可比性。每日開機(jī)后，使用雙水平全血質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)控檢測，測定的質(zhì)控結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)才開始檢測臨床標(biāo)本。采用K2 EDTA抗凝真空采血管空腹采集靜脈血2 mL，立即充分混勻，置室溫(25 ℃左右)保存，2 h內(nèi)完成測定。檢測項(xiàng)目包括：白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(NEU%)、淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(LY%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(EOS%)、嗜堿性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(BASO%)、單核細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(MO%)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞比容(Hct)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞分布寬度標(biāo)準(zhǔn)差(RDW-SD)、紅細(xì)胞分布寬度變異系數(shù)(RDW-CV)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、平均血小板體積(MPV)、血小板比容(PCT)、血小板體積分布寬度(PDW)、大血小板比率(P-LCR)等19項(xiàng)參數(shù)。

1.4 參考區(qū)間的驗(yàn)證

根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)C28-A2 文件，隨機(jī)選取20名正常孕婦的孕早期及孕晚期血細(xì)胞分析結(jié)果驗(yàn)證兩組生物參考區(qū)間，若各項(xiàng)檢測結(jié)果不超過2個數(shù)值(10%)落在新建參考區(qū)間以外，則表明驗(yàn)證有效，接受所建立的參考區(qū)間[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 正態(tài)性檢驗(yàn)

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，對照組的LY%、RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MCHC、PLT、MPV、PCT；孕早期組的NEU%、LY%、PLT、MPV；孕晚期組的NEU%、LY%、RBC、Hb、Hct、MCV、MCH、MPV、P-LCR數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，其它數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布。WBC、NEU%、LY%、EOS%、RBC、Hb、Hct、MCHC、RDW-SD、MPV、P-LCR3組之間兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；BASO% 、MCV、PCT、PDW孕早期組與對照組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；BASO%、MO%、MCH、RDW-CV、PCT孕晚期組與對照組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；MO%、MCH、RDW-CV、PDW孕早期組與孕晚期組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 150例正常孕婦不同孕期血細(xì)胞分析檢測結(jié)果[正態(tài)分布數(shù)據(jù)非正態(tài)分布數(shù)據(jù)(P2.5～P97.5)]

*：數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布；P1：孕早期組與對照組比較；P2：孕晚期組與對照組比較；P3：孕早期組與孕晚期組比較。

2.2 各參數(shù)參考區(qū)間的確定方法

表2 孕早期、孕晚期組19項(xiàng)血細(xì)胞分析參數(shù)參考區(qū)間

2.3 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

本研究建立的正常孕婦孕早期、孕晚期組血細(xì)胞分析19項(xiàng)參數(shù)參考區(qū)間均通過驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果見表3、表4。

表3 孕早期組血細(xì)胞分析參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

表4 孕晚期組血細(xì)胞分析參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

妊娠期母體血液系統(tǒng)會發(fā)生一系列生理變化以適應(yīng)胎兒生長發(fā)育，血液總?cè)萘吭黾硬⒂幸欢ǔ潭鹊难合♂?。本研究結(jié)果顯示，RBC、Hb、Hct逐漸降低，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與張雪琳[5]報(bào)道的結(jié)果相同，很好的印證了妊娠女性這一生理變化過程。

近年來，血紅蛋白、紅細(xì)胞比容、甲狀腺功能等因素對妊娠結(jié)局及胎兒的影響越來越受到關(guān)注，血細(xì)胞分析等檢測項(xiàng)目已成為常規(guī)產(chǎn)前檢查內(nèi)容。婦女在妊娠期間，母體體重和血液容量會增加，相對稀釋了血液，會出現(xiàn)生理性貧血[6]，但不會造成不良的妊娠結(jié)局[7]。孫德華等[8]研究發(fā)現(xiàn)，妊娠婦女當(dāng)中，孕早期Hb<100 g/L的比例為7.14%，孕中期為25.10%，孕晚期時則達(dá)到了45.36%。本研究結(jié)果顯示，正常孕婦孕晚期的Hb參考區(qū)間為92.8～131.2 g/L，而目前我國臨床仍普遍采用Hb<100 g/L[9]作為診斷妊娠期貧血的標(biāo)準(zhǔn)，忽視了妊娠期生理性貧血的存在，就會把一部分處于生理性貧血的孕婦歸于貧血組，容易造成誤診和不必要的治療。同時，妊娠期高濃度Hb也會對妊娠結(jié)局有不利影響，一些學(xué)者以 Hb>130 g/L作為妊娠期高濃度Hb的判斷標(biāo)準(zhǔn)[10]，高濃度Hb常常被誤認(rèn)為機(jī)體處于良好的血鐵狀況而沒有得到足夠重視，Little等[11]對妊娠婦女進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，高濃度Hb與圍生期死亡率、早期新生兒死亡率和死產(chǎn)有關(guān)。另外，Hct增高對孕婦妊娠并發(fā)癥的發(fā)生也有重要關(guān)系，羅雪娟等[12]研究發(fā)現(xiàn)，孕晚期Hct≥35% 提示存在明顯的易栓癥趨勢，從而增加深靜脈血栓形成、肺栓塞的發(fā)生風(fēng)險。吳曼禎等[13]報(bào)道，孕晚期Hct≥35%，發(fā)生妊娠高血壓綜合征的幾率將大大增加。此外，俞琳等[14]研究發(fā)現(xiàn)，妊娠期糖尿病(GDM)的發(fā)生率也隨著RBC、Hb、Hct水平的增高而增加，利用血細(xì)胞參數(shù)對GDM進(jìn)行早期預(yù)測和篩選，可以早發(fā)現(xiàn)早治療，是減少不良妊娠結(jié)局發(fā)生的有效手段。由此可見，建立妊娠女性紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間，對于篩查妊娠貧血患者，預(yù)測妊娠并發(fā)癥、監(jiān)測胎兒的生長發(fā)育有非常重要的作用。

利用地貧的初篩標(biāo)準(zhǔn)：MCV<82 fL和/或MCH<27 pg[15]，可有效地篩查出妊娠期地貧攜帶者[16]，但應(yīng)考慮妊娠期生理性貧血因素的存在，否則會將部分正常孕婦納入地貧組，造成誤診和不必要的治療。同時關(guān)注MCV、MCH變化幅度，可以發(fā)現(xiàn)妊娠期間的β地貧女性MCV、MCH較正常妊娠及缺鐵性貧血女性均有明顯變化，如果聯(lián)合網(wǎng)織紅細(xì)胞(Ret)監(jiān)測，還能夠明顯地提高鑒別診斷β地貧妊娠和缺鐵性貧血妊娠的能力[15]。因此，建立妊娠女性紅細(xì)胞相關(guān)參數(shù)參考區(qū)間，對于鑒別貧血類型、及時采取相應(yīng)的治療措施、促進(jìn)胎兒的生長發(fā)育有非常重要的作用。

外周血WBC對于感染、炎癥、白血病等診斷和療效評估有一定的臨床價值，妊娠女性WBC從懷孕7～8周開始增加，30周達(dá)高峰，有時可達(dá)15.0×109/L，主要為NEU %增多[17]。WBC在孕期的增高機(jī)制目前尚不清楚，但有研究表明孕期外周血WBC 升高的現(xiàn)象，可能與邊緣池的WBC釋放相關(guān)[18]。本次研究結(jié)果顯示，從孕早期到孕晚期，孕婦WBC、NEU %逐漸升高，LY%相對降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，因此，建立正常妊娠婦女WBC相關(guān)參數(shù)的參考區(qū)間能有效的區(qū)分生理性和病理性增高，幫助臨床醫(yī)生作出及時有效的判斷及處理。

本研究發(fā)現(xiàn)，對照組、孕早期組與孕晚期組PLT結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，整個妊娠過程PLT變化不明顯，而孫德華等[8]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，妊娠期間，PLT水平升高；石艷艷等[19]研究顯示，隨著孕期的增長，PLT水平逐漸下降。有文獻(xiàn)報(bào)道，孕婦機(jī)體處于生理保護(hù)性高凝狀態(tài)會導(dǎo)致PLT升高，而血液稀釋性減少以及妊娠期雌激素水平升高增加肝臟對血小板吞噬和破壞作用，會導(dǎo)致PLT降低[8]。孕婦PLT水平受多因素調(diào)節(jié)處于動態(tài)平衡，維持孕期凝血狀態(tài)。本次PLT研究結(jié)果與其他學(xué)者報(bào)道不完全一致，目前已有的研究報(bào)道多為橫斷面研究[8,19]，即不同孕期的研究對象為不同的孕婦，受個體差異影響較大，而本研究采用縱向序貫研究方法，可以消除因個體差異帶來的誤差。但由于受樣本量與單一實(shí)驗(yàn)室的局限，且影響PLT檢測因素較多，研究不同孕期PLT的變化規(guī)律還需要多中心多樣本不同檢測系統(tǒng)檢測數(shù)據(jù)予以驗(yàn)證。

本研究建立的正常妊娠女性孕早期和孕晚期血細(xì)胞分析生物參考區(qū)間，更符合孕期的生理變化特點(diǎn)，有利于臨床更好的評估正常妊娠婦女的健康水平，可作為正常孕婦的血細(xì)胞分析生物參考區(qū)間。