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    華南地區(qū)規(guī)?;i場(chǎng)豬繁殖與呼吸綜合征病毒的免疫及流行情況調(diào)查

    2018-09-04 03:24:58郭建超許華釗樊福好
    豬業(yè)科學(xué) 2018年7期
    關(guān)鍵詞:活苗周齡豬只

    郭建超,李 亮,許華釗,樊福好

    (農(nóng)業(yè)部種豬質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心,廣東省畜牧技術(shù)推廣總站,廣東 廣州 510500)

    豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)所致的豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是一種嚴(yán)重影響全球養(yǎng)豬業(yè)的重要疾病,又稱“豬藍(lán)耳病”,以引起種豬群繁殖障礙,仔豬、生長(zhǎng)育肥豬群呼吸道問題為特點(diǎn),給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前,除澳大利亞、新西蘭、瑞士等少數(shù)國(guó)家無(wú)疫情而外,PRRS在許多國(guó)家和地區(qū)呈地方性流行[1]。病毒的易變異,易重組,疫苗株存在毒力返強(qiáng)等特點(diǎn),使防控難度加大,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。

    1 材料與方法

    1.1 樣品來源

    本調(diào)查的樣品來自華南地區(qū)26個(gè)規(guī)?;B(yǎng)殖場(chǎng)的保育豬,采樣場(chǎng)生產(chǎn)情況穩(wěn)定,用頸靜脈抽血的方法采集血液樣品,并用動(dòng)物血液保護(hù)液保存,第1次采樣豬只在48~80日齡,第2次采樣在首次采樣后混群飼養(yǎng)30 d。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法及材料

    采用PCR技術(shù)和ELISA技術(shù),PCR方法檢測(cè)豬藍(lán)耳病經(jīng)典株和變異株,PCR采用的儀器和試劑來自金瑞鴻捷(廈門)生物科技有限公司,POCKIT 智能型手提式核酸分析儀、Nublieic Acid Co-prep Kit(PRRSVNA)、Nublieic Acid Co-prep Kit(PRRSV-CN)。

    表1 PCR、ELISA檢測(cè)結(jié)果

    ELISA試劑盒由愛德仕(IDEXX)提供PR R SV抗體檢測(cè)試劑盒(IDEXX PRRS X3 Ab),該試劑盒是以核衣殼蛋白(N蛋白)作為包被抗原,使用Thermo Multiscan MK3酶標(biāo)儀。

    2 結(jié)果

    PCR、ELISA首次采樣檢測(cè)結(jié)果如表1,26個(gè)豬場(chǎng)的375頭保育豬,總體抗原陽(yáng)性率52.53%(197/375),抗體陽(yáng)性率 57.87%(217/375),PRRS抗體陽(yáng)性場(chǎng)率高達(dá)92.30%(24/26),僅有2個(gè)場(chǎng)抗原和抗體檢測(cè)為雙陰性,同時(shí)未進(jìn)行有關(guān)PRRS的免疫。

    不同疫苗的使用情況及對(duì)應(yīng)場(chǎng)的抗原抗體情況調(diào)查,如表2,其中統(tǒng)計(jì)有4個(gè)毒株的減毒苗在華南地區(qū)使用,13個(gè)場(chǎng)注射減毒苗,1個(gè)場(chǎng)注射滅活苗。其中減毒苗ATCCVR-2332株使用場(chǎng)數(shù)最多,抗體陽(yáng)性率達(dá)81.82%。1個(gè)場(chǎng)使用滅活苗,二次免疫后抗體陽(yáng)性率達(dá)72.50%,但同時(shí)存在抗原感染,陽(yáng)性率達(dá)65.00%。

    采用不同免疫方式豬場(chǎng)抗體和抗原的檢測(cè)情況,注射減毒苗的豬總體抗體陽(yáng)性率不如免疫過兩次滅活苗的豬,但其抗原陽(yáng)性率較低。使用滅活苗的豬群抗體陽(yáng)性率情況最好,但其S/P均值、S/P≥2.0比例、抗原陽(yáng)性率均最高,說明其群內(nèi)抗原活躍度最高。未免疫豬場(chǎng)總體抗體陽(yáng)性率最低,S/P均值也最低,說明最易受到野毒感染。從抗體離散度看,減毒苗和滅活苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體在豬群中均勻度都不好。如表3。

    不同周齡豬只(人工免疫)抗體陽(yáng)性率、抗體的S/P的均值和≥2.0比例變化的變化情況,如圖1,采用減毒苗和滅活苗免疫的豬只共234頭,總體陽(yáng)性率為66.67%(156/234),檢測(cè)抗體陽(yáng)性頭/總頭數(shù),8周齡25/55頭、9周齡68/104頭、10周齡39/47頭、11周齡24/28頭。將本次檢測(cè)的375頭豬只混群飼養(yǎng)30 d后,隨機(jī)采集85頭豬的血液樣品,采用同樣的方法和試劑,抗體陽(yáng)性率已達(dá)94.12%(80/85),S/P 值 1.86,抗原陽(yáng)性率 27.06%(23/85)。8周到11周S/P均值、S/P≥2.0比例都在升高,表明免疫后的豬群中PRRSV活躍逐漸升高,抗體離散度降低說明群體中抗體均勻度越來越整齊。

    不同周齡豬只(未免疫)抗原抗體陽(yáng)性的變化情況,抗原陽(yáng)性率逐漸降低,抗體陽(yáng)性率在9周齡時(shí)又升高,10周齡時(shí)又降低,總體呈下降態(tài)勢(shì)。檢測(cè)抗體/抗原/總頭數(shù),第7周10/9/14頭,第8周10/15/28頭,第9周29/29/65頭,第10周3/8/21頭,共128頭。

    不同品種豬只(未免疫)對(duì)PRRSV的感染狀況,如表4,杜洛克豬感染率最低。

    表2 不同疫苗的使用情況

    表3 不同免疫方式豬場(chǎng)抗體和抗原情況

    圖1 抗體陽(yáng)性率、S/P值均值及≥2.0比例變化情況

    3 結(jié)果討論

    我國(guó)在1996年分離到PRRSV[2],2006 年以后,我國(guó)暴發(fā)了豬高致病性藍(lán)耳病,給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3],時(shí)至今日人們?cè)谘芯糠乐蜳RRS領(lǐng)域仍未取得有效進(jìn)展,尤其是在疫苗的研究使用方面,該病一直是制約養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要因素之一。從本次調(diào)查的26個(gè)豬場(chǎng)的抗原抗體的情況,僅有兩個(gè)場(chǎng)抗原和抗體檢測(cè)為雙陰性,同時(shí)也未進(jìn)行有關(guān)PRRS的免疫,可見華南地區(qū)能保持雙陰性的種豬場(chǎng)屈指可數(shù)。在進(jìn)行免疫的豬場(chǎng),個(gè)別場(chǎng)抗體陽(yáng)性率低,同時(shí)場(chǎng)間抗體陽(yáng)性率差異較大,從12.50%~100%,免疫效果差次不齊。除陰性場(chǎng)外,其余豬場(chǎng)均存在PRRSV感染狀況,陽(yáng)性率18.75%~100%??傮w華南地區(qū)PRRS疫情復(fù)雜、防控形勢(shì)嚴(yán)峻、凈化困難。

    PRRSV變異和毒株重組頻繁,新毒株層出不窮,減毒活苗回復(fù)突變和毒力返強(qiáng)[4],同時(shí)交叉免疫效果差,單一毒株的疫苗不能抵抗或者只能抵抗部分其他毒株感染,不能阻止病毒在豬群中的傳播感染,只能夠抑制或減少臨床癥狀的發(fā)生[5]。本次調(diào)查數(shù)據(jù)看,對(duì)于進(jìn)行PRRS減毒苗免疫的豬群,抗體陽(yáng)性率高,抗原陽(yáng)性率低,免疫后效果最好,即可提供最大限度的免疫保護(hù),又可以降低疫苗毒在體內(nèi)的存在時(shí)間。本次統(tǒng)計(jì)華南地區(qū)有4個(gè)減毒株疫苗在使用,包括了經(jīng)典株和變異株,各個(gè)毒株的抗體陽(yáng)性率/抗原陽(yáng)性率,ATCCVR-2332 株 81.82%/57.58%,JXA1-R株 86.36%/72.73%,TJM-F92株 61.54%/61.54%,HuN4-F112株38.03%/40.85%,免疫后抗體陽(yáng)性率在80%以上的有ATCCVR-2332 株和JXA1-R株,但是ATCCVR-2332 株抗原陽(yáng)性率較低,因此減毒苗中ATCCVR-2332 株(經(jīng)典株)免疫效果最好。

    圖2 未免疫豬只抗原抗體變化情況

    表4 不同品種豬只(未免疫)對(duì)PRRSV的感染狀況

    豬群免疫后的理想效果是抗體檢測(cè)應(yīng)該全為陽(yáng)性,S/P值最好在1.6以下且大于2.0比例越低越好,但豬場(chǎng)很難達(dá)到這種水平,本次統(tǒng)計(jì)(表3)表明使用滅活苗的群體S/P均值高于減毒苗,且S/P值≥2.0的比例較高,這些特點(diǎn)表明使用滅活苗的豬群中PRRSV處于更加活躍,豬群潛在風(fēng)險(xiǎn)最高,雖滅活苗誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體的陽(yáng)性率較高,但其抵抗再次感染的能力一直備受質(zhì)疑,F(xiàn)ederico A報(bào)道滅活苗免疫,再次感染盡管可以誘導(dǎo)干擾素和中和抗體反應(yīng),但不能夠起到保護(hù)作用[6],Zuckermann FA也做過相應(yīng)報(bào)道[7]。本文較高的抗原陽(yáng)性率65%,也印證了這一點(diǎn)。但是滅活苗不存在減毒活苗回復(fù)突變和毒力返強(qiáng)等現(xiàn)象。

    免疫后的豬群按周齡分析(圖1),8周齡豬只抗體陽(yáng)性率最低,以后逐漸升高,可能在哺乳階段注射疫苗后,由于外界應(yīng)激較頻繁,如斷奶、混群、換料等,加之仔豬自身免疫系統(tǒng)未發(fā)育完善,對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答反應(yīng)弱等原因,抗體并沒有立刻達(dá)到理想的保護(hù)率(75%~80%以上),也可能與抗體在機(jī)體內(nèi)存在的時(shí)間規(guī)律有關(guān),哺乳階段接種后免疫抗體上升后逐漸下降,從8周齡又開始上升,Eric A對(duì)3日齡5頭仔豬接種病毒,利用IFA對(duì)病毒N蛋白抗體檢測(cè),N蛋白抗體在14、21、28、42日均為陽(yáng)性,58日齡變?yōu)殛幮裕?0、86、93、106、113、127、140日 齡 為陽(yáng)性[8],58日齡即為本文的第8周。隨著豬只的生長(zhǎng),免疫系統(tǒng)的完善,同時(shí)PRRSV在豬群中活躍度也呈逐漸增強(qiáng)狀態(tài),被感染豬只不斷增多,抗體陽(yáng)性率從第8周的45.45%到第11周達(dá)85.71%。375頭豬在混群前抗原陽(yáng)性率52.53%,抗體陽(yáng)性率57.86%,S/P值1.12,混群飼養(yǎng)30 d后,抗原陽(yáng)性率27.06%(23/85),抗體陽(yáng)性率已達(dá)94.12%,S/P值1.86,抗體陽(yáng)性率和S/P上升很快,可能與本次混群是不同來源場(chǎng)、不同免疫方式,不同減毒株免疫的豬,加劇了病毒傳播感染,被感染抗體陽(yáng)性率不斷升高,血清中抗原陽(yáng)性率降低。

    未免疫過疫苗的豬群總體抗原和抗體陽(yáng)性率分別為46.88%、40.63%,抗原抗體都隨著日齡增加而降低(圖2)。抗原陽(yáng)性率逐漸減低,可能隨著日齡的增加豬機(jī)體對(duì)病毒的清除能力增強(qiáng)及易感性降低,也可能超出PCR血清檢測(cè)的時(shí)限,病毒仍定植到其他位置,如扁桃體、淋巴結(jié)。利用RT-PCR對(duì)感染后血清檢出的時(shí)限在1~35 d,有報(bào)道稱時(shí)限更長(zhǎng),在實(shí)驗(yàn)條件下感染PRRSV后130~157 d時(shí)可以從扁桃體和口腔試子中分離病毒[9],因此血清檢測(cè)抗原呈陰性并非表示體內(nèi)無(wú)PRRSV感染,但可以說明豬只已經(jīng)擺脫了病毒血癥時(shí)期??贵w的陽(yáng)性率逐漸降低,與抗原的降低有關(guān),也可能與N蛋白抗體在體內(nèi)隨日齡的增加,而含量降低的變化規(guī)律有關(guān),Batisia發(fā)現(xiàn)即使淋巴結(jié)中有病原的存在,血清中N蛋白抗體也會(huì)減少[10]。調(diào)查結(jié)果顯示,未免疫豬場(chǎng)PRRS無(wú)明顯臨床癥狀且不做任何免疫的豬場(chǎng),抗原抗體的陽(yáng)性率都會(huì)降低,這是否說明,即使哺乳或保育階段初次檢測(cè)抗原抗體的陽(yáng)性率高,本文第7周測(cè)定抗體71.43%,抗原64.29%,也無(wú)需增加相關(guān)免疫程序,做好生物安全工作,持續(xù)保持優(yōu)良的管理,不引進(jìn)陽(yáng)性豬,即可保持豬群穩(wěn)定。但這些豬場(chǎng)仍需做好持續(xù)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),這種隱性感染是否對(duì)豬場(chǎng)生產(chǎn)成績(jī)有何影響,需要進(jìn)一步研究。

    本文同時(shí)對(duì)未注射疫苗的豬只,按不同品種分類,發(fā)現(xiàn)不論從抗原還是抗體陽(yáng)性率,杜洛克的感染率最低,這可能和其遺傳性狀有關(guān)。

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