子宮頸鱗狀細(xì)胞癌及鱗狀上皮內(nèi)病變中RGC32的表達(dá)及臨床意義

田杰 周東華 平靜 秦艷 劉小燕 陳瑩 范菊花

佛山市婦幼保健院病理科（廣東佛山 528000）

宮頸癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌，近些年來(lái)呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著女性的身體健康［1-2］。RGC?32是一種新發(fā)現(xiàn)的補(bǔ)體激活基因，參與了細(xì)胞的周期調(diào)控、細(xì)胞增殖、組織細(xì)胞分化等多種生理作用［3］。研究發(fā)現(xiàn)RGC?32在腫瘤中的作用明顯，是腫瘤發(fā)生相關(guān)基因［4-5］。而RGC32在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況及作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用免疫組化的方法檢測(cè)RGC?32在正常宮頸、宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變及SCC中的表達(dá)，并且分析RGC32表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床特征的關(guān)系，并初步探討RGC?32在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料分別收集佛山市婦幼保健院病理科2015年1月至2016年12月手術(shù)切除或活檢的蠟塊標(biāo)本，正常宮頸、LSIL、HSIL各30例，SCC 40例，正常宮頸年齡25～78歲，中位年齡47歲，宮頸LSIL年齡20～60歲，中位年齡32歲，宮頸HSIL年齡21～69歲，中位年齡38歲，宮頸SCC年齡22～80歲，中位年齡50歲；宮頸癌根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（international federation of gynecology obstetrical，F(xiàn)IGO）臨床分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期21例、Ⅲ期6例、Ⅳ期3例，分化等級(jí)，高分化16例，中分化13例，低分化11例。所有標(biāo)本均由2位資深病理專(zhuān)家共同閱片確診，所有標(biāo)本均未行化療、放療及生物治療。

1.2 方法標(biāo)本經(jīng)過(guò)4%中性甲醛固定，石蠟包埋4μm切片，然后采用免疫組化S?P法檢測(cè)RGC32的表達(dá)，兔抗人RGC32多抗購(gòu)自Santa Cruz公司，設(shè)立RGC32強(qiáng)陽(yáng)性者為陽(yáng)性對(duì)照，PBS緩沖液為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判讀RGC32陽(yáng)性表現(xiàn)為細(xì)胞漿棕黃色染色物，染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：（1）按切片中細(xì)胞顯色有無(wú)及深淺評(píng)分：無(wú)顯色為0分；淺黃色為1分；黃色為2分；棕黃色為3分。（2）根據(jù)顯色癌細(xì)胞的比例記分：＜25%為1分；25%～50%為2分；＞50%為3分。每例腫瘤的陽(yáng)性強(qiáng)度=（1）×（2），＞ 2分則視為陽(yáng)性，否則判定為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)數(shù)資料采用率或百分比表示，率的比較采用Pearsonχ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 RGC32蛋白在不同宮頸組織中的表達(dá)RGC32蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞漿，呈棕黃色顆粒，RGC32蛋白在正常宮頸組織、LSIL、HSIL和SCC中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為16.7%、26.7%、66.7%、75.0%（圖1），通過(guò)Pearson χ2檢驗(yàn)，RGC32在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)病變及SCC組織中的陽(yáng)性率逐漸升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），宮頸SCC及HSIL中RGC32的陽(yáng)性率顯著高于LSIL及正常宮頸（P＜0.05），RGC32在SCC及HSIL中的表達(dá)差異無(wú)顯著性（P=0.492），LSIL及正常宮頸中的表達(dá)差異無(wú)顯著性（P=0.440）（表1）。

圖1 RGC32在不同宮頸組織中的表達(dá)情況（×40）Fig.1 Expression of RGC32 in different cervical tissues（× 40）

表1 RGC32蛋白在不同宮頸組織中的表達(dá)率Tab.1 Rateof expression in differentcervical tissues例（%）

2.2 RGC32表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系為探討RGC32表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的臨床病理特征，筆者將患者按年齡、腫瘤FIGO分期，組織學(xué)分級(jí)以及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行分組，通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)，RGC32在年齡＜50歲及年齡≥50歲兩組表達(dá)陽(yáng)性率分別為72.2%，77.3%，F(xiàn)IGOⅠ+Ⅱ期為77.4%，Ⅲ+Ⅳ期66.7%，組織學(xué)分級(jí)中高中分化組為82.8%，低分化為54.5%，RGC32蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高達(dá)88.0%，而無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組RGC32表達(dá)陽(yáng)性率僅為53.3%，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.014）。見(jiàn)表2。

表2 宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中RGC32的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Tab.2 The relationship between the expression of RGC32 and clinical characteristics in cervical squamous cell carcinoma

3 討論

RGC?32是由Badea在鼠的少突膠質(zhì)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種補(bǔ)體激活基因；人類(lèi)RGC?32基因定位于13q14.11，全長(zhǎng)1 126個(gè)bp，編碼137個(gè)氨基酸，有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子［5］。目前發(fā)現(xiàn)RGC?32在胎盤(pán)、骨骼肌，腎臟、胰腺、肝臟及大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞等正常組織細(xì)胞中表達(dá)，而在心臟、腦組織低表達(dá)，肺組織細(xì)胞未見(jiàn)表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)在正常情況下RGC?32在細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞增殖、組織細(xì)胞分化、補(bǔ)體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)、細(xì)胞修復(fù)及系統(tǒng)性硬化等過(guò)程中起著非常重要的作用［6-8］。

近年來(lái)，RGC32在腫瘤中的作用研究較多，筆者曾發(fā)現(xiàn)在結(jié)直腸癌細(xì)胞株中RGC32過(guò)表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲，可能與RGC32導(dǎo)致細(xì)胞骨架改變有關(guān)［9］，WANG 等［10］研究發(fā)現(xiàn)RGC32在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)并且與患者預(yù)后相關(guān)，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)RGC32高表達(dá)促進(jìn)結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲，并且發(fā)現(xiàn)其機(jī)制是通過(guò)激活Smad/sip1信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。XU等［11］研究發(fā)現(xiàn)RGC32在肺腺癌組織中表達(dá)明顯上調(diào)，肺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞中RGC32基因表達(dá)降低后，細(xì)胞增殖活力明顯降低，并且發(fā)現(xiàn)RGC32受 TGF?β1 信號(hào)通路調(diào)控。ESKANDARI?NASAB等［12］研究發(fā)現(xiàn)在乳腺癌組織中RGC32高表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)RGC32的啟動(dòng)子發(fā)生甲基化。

本研究發(fā)現(xiàn)RGC32在正常宮頸僅有少量表達(dá)，而在宮頸上皮內(nèi)病變及SCC組織中的陽(yáng)性率逐漸升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），宮頸鱗狀細(xì)胞癌及高度鱗狀上皮內(nèi)病變中RGC32的陽(yáng)性率顯著高于低度鱗狀上皮內(nèi)病變及正常宮頸（P＜0.05）。低度鱗狀上皮內(nèi)病變并發(fā)癌或?qū)?lái)發(fā)生癌的風(fēng)險(xiǎn)低，高度鱗狀上皮內(nèi)病變具有顯著的進(jìn)展為浸潤(rùn)性癌的風(fēng)險(xiǎn)，是癌前病變，RGC32在癌前病變及SCC中的表達(dá)顯著高于非癌前病變，提示RGC32可能參與了正常宮頸到癌前病變?cè)俚谨[狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展演變過(guò)程。其次，筆者發(fā)現(xiàn)RGC?32在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)水平顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P=0.014），提示RGC32可能在宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程起重要作用。

本研究與既往研究大致相符，發(fā)現(xiàn)RGC32在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用，并且發(fā)現(xiàn)其可能參與了宮頸鱗狀細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移。本研究具有局限性：僅采用了免疫組化方法檢測(cè)RGC32蛋白的表達(dá)，而對(duì)RGC32的基因水平的未進(jìn)行檢測(cè)，并且未進(jìn)行作用機(jī)制的探討，不能進(jìn)行因果的說(shuō)明。下一步擬檢測(cè)RGC32的基因表達(dá)情況以及探討其在腫瘤中的作用機(jī)制。