肺癌液體活檢研究進(jìn)展

陳萬(wàn)進(jìn)　雷冰

【摘要】 肺癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其具有病理機(jī)制復(fù)雜、發(fā)病率高、早期癥狀無(wú)特異性、治療效果差等特征。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)腫瘤標(biāo)志物有利于協(xié)助臨床診斷，其具有無(wú)創(chuàng)性、操作簡(jiǎn)單、可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，故筆者特進(jìn)行此次綜述，具體內(nèi)容如下。

【關(guān)鍵詞】 肺癌； 液體活檢； 循環(huán)腫瘤細(xì)胞； 循環(huán)腫瘤DNA； 外泌體

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.12.088 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1674-6805（2018）12-0182-03

Progress in Liquid Biopsy of Lung Cancer/CHEN Wanjin，LEI Bing//Chinese and Foreign Medical Research，2018，16（12）：182-184

【Abstract】 Lung cancer is one of the most common malignant tumors in China.It has the characteristics of complex pathological mechanism， high incidence，early symptoms，and poor treatment effect.With the development of medical technology，it is found that tumor markers are helpful for clinical diagnosis.They are non-invasive，simple and repeatable.Therefore，the author carried out the research as follows.

【Key words】 Lung cancer； Liquid biopsy； Circulating tumor cells； Circulating tumor DNA； Exocrine body

First-authors address：Red Cross Hospital of Yulin City，Yulin 537000，China

原發(fā)性肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率、病死率均較高，據(jù)文獻(xiàn)[1]報(bào)道，全世界每年大概新發(fā)1 800萬(wàn)例肺癌，且患者的預(yù)后較差，患者的5年生存率在15%左右。病理活檢作為目前診斷肺癌的“金標(biāo)準(zhǔn)”，診斷準(zhǔn)確性高，但其是一種有創(chuàng)性診斷方法，患者可能會(huì)出現(xiàn)氣胸、出血等并發(fā)癥，使其臨床發(fā)展受到一定程度的限制[2]。癌胚抗原、鱗狀細(xì)胞癌抗原等腫瘤標(biāo)志物在臨床應(yīng)用廣泛，但其診斷的特異性、敏感度較低?；顧z組織標(biāo)本肺癌病理診斷的作用主要是明確患者是否存在腫瘤、腫瘤的類型[3]。隨著醫(yī)療的發(fā)展，對(duì)于液體活檢的研究深入，發(fā)現(xiàn)其是一種無(wú)創(chuàng)、可重復(fù)、有效的檢查手段，有利于協(xié)助早期診斷肺癌[4]。目前臨床液體活檢主要包括循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）、外泌體、循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA），具體內(nèi)容見(jiàn)下文。

1 肺癌的概述

近年來(lái)，隨著生活節(jié)奏加快，生活習(xí)慣不規(guī)律，致使罹患肺癌的人數(shù)呈直線上升。肺癌具有較高的發(fā)病率和死亡率，對(duì)人們的身體健康和日常生活造成嚴(yán)重威脅。尤其是近50年以來(lái)，大多數(shù)國(guó)家患有肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位。目前肺癌的病因尚未完全查明，大量資料表明，長(zhǎng)期大量吸煙患者罹患肺癌的概率較常人要高，是不吸煙者的10～20倍，開始吸煙的年齡越小，患肺癌的概率越高。此外，吸煙不僅對(duì)本人的身體健康造成影響，還會(huì)對(duì)周圍人群的健康產(chǎn)生不良影響，致使被動(dòng)吸煙者肺癌發(fā)病率明顯增加。另外，城市居民肺癌的發(fā)病率比農(nóng)村高，這可能與城市大氣污染和煙塵中含有致癌物質(zhì)有關(guān)。除此之外，所處的職業(yè)環(huán)境、電離輻射、慢性肺部感染、遺傳等因素都是誘發(fā)肺癌的緣由之一。其臨床表現(xiàn)也較為復(fù)雜，初期患者并無(wú)明顯特征，還要取決于腫瘤病變位置，患者會(huì)出現(xiàn)咳嗽、痰中帶血、胸痛、胸悶、聲帶嘶啞等癥狀；并經(jīng)病情長(zhǎng)時(shí)間發(fā)展累及全身，會(huì)伴有發(fā)熱、消瘦等癥狀，甚至出現(xiàn)肺源性關(guān)節(jié)增生癥及異位激素分泌綜合征；待發(fā)展到終末期，腫瘤會(huì)擴(kuò)散到淋巴、胸膜、消化道、腎臟等處，嚴(yán)重危及患者的生命安全。目前，臨床中針對(duì)肺癌患者除基本的體格檢查外，還采用X線、CT檢查、MRI檢測(cè)、細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)等手段，雖然可為肺癌的診斷和進(jìn)一步的治療提供依據(jù)，但對(duì)患者都會(huì)造成不同程度的創(chuàng)傷。因此，采用無(wú)創(chuàng)、快捷、便宜、有效的檢測(cè)手段對(duì)肺癌患者進(jìn)行檢查是非常重要的，不僅可提高疾病診斷效率，而且減少對(duì)患者的損傷。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，肺癌液體活檢逐漸走到相關(guān)患者和檢驗(yàn)醫(yī)生的眼中，這種液體活檢的方式通過(guò)對(duì)肺癌患者液體中腫瘤細(xì)胞的檢驗(yàn)，不僅縮短檢驗(yàn)時(shí)間，為患者治療提供充分時(shí)間，而且減少其他檢查對(duì)患者的創(chuàng)傷，成為肺癌檢驗(yàn)中常用的方式之一。

2 循環(huán)腫瘤細(xì)胞的研究進(jìn)展

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）是原發(fā)肺癌細(xì)胞脫落進(jìn)入到血液循環(huán)中，作為潛在的生物標(biāo)志物，其可作為評(píng)價(jià)療效的指標(biāo)。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于非小細(xì)胞癌的患者，在行放射治療前對(duì)CTCs的數(shù)量進(jìn)行了檢測(cè)，放射治療后CTCs的數(shù)目隨著腫瘤的縮小而減少，有明顯的相關(guān)性，故可把CTCs當(dāng)成評(píng)價(jià)療效的指標(biāo)[5]。還有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，CTCs在肺癌診斷的特異性為84.1%～100%，敏感性為30.4%～89.0%[6]。有學(xué)者采取熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)50例非小細(xì)胞癌患者的CTCs，臨界值為3.2 ml/2細(xì)胞單位，特異性為97.60%，敏感性為84.0%[7]。文獻(xiàn)[8]報(bào)道，采取PCR檢測(cè)225例非小細(xì)胞癌患者CTCs，將臨界值設(shè)置為8.64～8.65單位CTCs，發(fā)現(xiàn)其特異性為84.10%和93.20%，敏感性為73.20%和81.80%。CTCs在血液中的含量非常少，在每毫升血液中大約含有100萬(wàn)血細(xì)胞，但其中大約混雜有1個(gè)腫瘤細(xì)胞[9]。故進(jìn)行CTCs檢測(cè)時(shí)需要富集，可采取RT-PCR、干細(xì)胞計(jì)數(shù)、免疫磁珠標(biāo)志等方法進(jìn)行富集。CTCs的檢測(cè)方法主要有免疫熒光法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法、核酸檢測(cè)法、CTC-chip法、CellSearch系統(tǒng)法、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法、原位雜交法、測(cè)序法等。

3 外泌體的研究進(jìn)展

外泌體是細(xì)胞主動(dòng)朝細(xì)胞外分泌的囊泡樣小體，且大小一致，具有促進(jìn)血管新生和抗腫瘤免疫等功能[10]。外泌體主要包括miRNA、脂類、mRNA、蛋白質(zhì)等[11]。外泌體可協(xié)助肺癌的臨床診斷、預(yù)測(cè)預(yù)后[12]。來(lái)自于腫瘤的外泌體會(huì)促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖。有學(xué)者認(rèn)為外泌體可以對(duì)核酸物質(zhì)進(jìn)行有效的保護(hù)，可以使ctDNA易降解的問(wèn)題得到有效解決[13]。外泌體比較容易富集，臨床常用的檢測(cè)技術(shù)有色譜法、納米微粒追蹤分析術(shù)、免疫磁珠法等[14]。

4 循環(huán)腫瘤DNA的研究進(jìn)展

攜帶腫瘤特有突變信息的血漿游離DNA即為循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）。其主要存在源于凋亡或是壞死的腫瘤細(xì)胞[15]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于ctDNA是EGFR基因突變檢測(cè)中十分有效、具有特異性的生物標(biāo)志物，其對(duì)于非小細(xì)胞肺癌的診療具有重要價(jià)值[16]。在非小細(xì)胞肺癌血液ctDNA中，可發(fā)現(xiàn)雜合性缺失、基因甲基化、基因突變、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性等多基因改變[17]。有學(xué)者認(rèn)為ctDNA檢測(cè)腫瘤變異的敏感性遠(yuǎn)超過(guò)CTCs，其可作為有效的手段監(jiān)測(cè)非小細(xì)胞型肺癌[18]。ctDNA在肺癌患者體內(nèi)的含量特別少，大約占血漿游離DNA的1%，其半衰期非常短[19]。故對(duì)檢測(cè)的靈敏度有較高要求。目前臨床多采取測(cè)序、digital PCR法[20]。

5 液體活檢的優(yōu)勢(shì)和局限性

隨著醫(yī)療的發(fā)展進(jìn)步，對(duì)于腫瘤的診斷，不僅需要結(jié)合臨床癥狀、還需要腫瘤位于組織、細(xì)胞、分子層面的技術(shù)檢測(cè)，進(jìn)行綜合考慮[21]。雖然病理組織活檢診斷價(jià)值較高，但是腫瘤的異質(zhì)性導(dǎo)致其檢查結(jié)果不可全面揭示腫瘤基因圖譜，在一定程度上可出現(xiàn)誤診[22]。且對(duì)于晚期肺癌患者、不宜手術(shù)的患者組織取樣較為困難。液體活檢技術(shù)是抽取肺癌患者體內(nèi)的外周血進(jìn)行檢測(cè)分析，是一種無(wú)創(chuàng)性、可重復(fù)取樣的檢測(cè)手段[23]。且可以有效地反映腫瘤基因圖譜全貌。

但液體活檢也存在一定的局限性。進(jìn)行CTCs分離必須采取特殊設(shè)備，很難鑒定和確認(rèn)真正的腫瘤細(xì)胞，需對(duì)測(cè)序技術(shù)有所依賴[24]。且以上報(bào)道中不同的研究方法，特異性和敏感性有所不同，說(shuō)明PCR檢測(cè)、熒光原位雜交技術(shù)等檢測(cè)方法不同，數(shù)據(jù)存在一定的誤差。選取的樣本數(shù)量、納入的腫瘤分期均可有效檢測(cè)差異，故CTCs檢測(cè)具有一定的局限性。外泌體檢測(cè)亦具有一定的局限性，進(jìn)行外泌體分離時(shí)需要特殊設(shè)備，且無(wú)法進(jìn)行細(xì)胞層面的深入研究。ctDNA檢測(cè)因體內(nèi)ctDNA含量特別少，且非常容易被正常血漿游離DNA所掩蓋，無(wú)法從細(xì)胞層面進(jìn)行深入研究[25]。

綜上所述，腫瘤液體活檢具有無(wú)創(chuàng)、操作簡(jiǎn)便、可展示腫瘤基因圖譜全貌，但也具有局限性，對(duì)測(cè)序技術(shù)有一定依賴性，故需要進(jìn)一步在臨床進(jìn)行探討。

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（收稿日期：2018-03-23）