玉簪白絹病菌最適培養(yǎng)基的篩選

劉智會(huì)，鄧小芳，許曉明

(長(zhǎng)春市園林植物保護(hù)站，長(zhǎng)春130022)

?

玉簪白絹病菌最適培養(yǎng)基的篩選

劉智會(huì)，鄧小芳，許曉明

(長(zhǎng)春市園林植物保護(hù)站，長(zhǎng)春130022)

摘要：采用了從不同采集地得到的3個(gè)玉簪白絹病菌株，選用了5種常見培養(yǎng)基，對(duì)3個(gè)白絹病菌株進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所有供試菌株在5種培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)、產(chǎn)核。但是菌絲生長(zhǎng)與產(chǎn)核量存在差異，3個(gè)菌株在PDA、玉米粉瓊膠培養(yǎng)基和燕麥片瓊膠培養(yǎng)基上均生長(zhǎng)良好，以PDA最佳，營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最差；平均產(chǎn)核量以PDA上最多；故得出，PDA為最適培養(yǎng)基。且菌株之間的在菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)核量方面也存在差異，具體表現(xiàn)為Y1>Y3>Y2，菌絲生長(zhǎng)與產(chǎn)核量成正相關(guān)關(guān)系。

關(guān)鍵詞：玉簪；白絹病菌株；菌絲生長(zhǎng)；產(chǎn)核量；最適培養(yǎng)基

玉簪是玉簪屬(Hosta)植物的統(tǒng)稱，屬百合科(Liliaceae)多年生宿根草本植物，主要分布在東北亞的溫帶與亞熱帶地區(qū)，如中國(guó)、日本、朝鮮及蘇聯(lián)的遠(yuǎn)東地區(qū)[1]。玉簪屬名從1712年開始進(jìn)行簡(jiǎn)單分類，經(jīng)過多次更改確認(rèn)，直到1905年Hosta才成為合法屬名。目前美國(guó)玉簪協(xié)會(huì)及國(guó)際登陸以專著《The Genus Hosta》(1991)為基準(zhǔn)[2]Schmid在研究新資料的前提下將玉簪屬分3個(gè)亞屬10個(gè)組，共43種，而中國(guó)有4種。目前，世界已命名的玉簪品種多達(dá)4000種，每年還有許多新的優(yōu)良品種培育出來[3-4]。玉簪以品種繁多、花葉觀賞俱佳、抗逆性強(qiáng)，深受人們的喜愛，至20世紀(jì)末成為世界銷量第一的草本花卉[5-6]。另外，玉簪全株均可入藥，主要具有清熱、解毒、止血、止咳等功效。

玉簪在生長(zhǎng)過程中極易遭受病原菌的危害，使葉片出現(xiàn)大片枯黃，影響開花觀賞甚至發(fā)生莖基部腐爛引起整株死亡。其中發(fā)生最普遍最常見造成危害最嚴(yán)重的要屬玉簪白絹病，發(fā)生面積大，危害時(shí)期長(zhǎng)，危害程度嚴(yán)重，常常對(duì)玉簪的葉片造成極為嚴(yán)重的危害，影響觀賞效果，常常是整個(gè)生長(zhǎng)季，大片的玉簪都是遍地枯黃，只留一株株花蕊獨(dú)立，而且不易防治。本文選用了從長(zhǎng)春市區(qū)的御花園、勝利公園、杏花邨3處采集到的玉簪白絹病的病株，通過菌株分離純化得到的3個(gè)白絹病原菌菌株。由于白絹病在三處所表現(xiàn)的致病力不同，所以為了更深入了解玉簪白絹病的生物學(xué)特性，更好的防治白絹病在玉簪上的發(fā)生及有效的防治，現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室條件下，選取5種不同培養(yǎng)基，進(jìn)行培養(yǎng)，選出最適合玉簪白絹病菌株菌絲生長(zhǎng)、更利于菌核產(chǎn)生的培養(yǎng)基。通過觀察其對(duì)菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)核量的影響，明確不同營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)玉簪白絹病菌株是否存在影響以及不同來源的菌株之間是否存在差異。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試的3個(gè)菌株分別來自長(zhǎng)春市的御花園、勝利公園、杏花邨三個(gè)公園，將在3處采集到的帶病植株進(jìn)行病原菌組織分離、純化得到3個(gè)玉簪白絹病病原菌，并采用常規(guī)方法將其在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)[2]，得到相應(yīng)菌株，編號(hào)分別為Y1、Y2、Y3，放于4℃的冰箱中保存。

1.2試驗(yàn)方法

供試培養(yǎng)基供試培養(yǎng)基為PDA、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、寄主葉片培養(yǎng)基、玉米粉瓊膠培養(yǎng)基、燕麥片瓊膠培養(yǎng)基，配方如下[6-8]。馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)：葡萄糖20.0g、馬鈴薯200.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10g、氯化鈉5g、牛肉膏粉3g、瓊脂15g、蒸餾水1000mL；寄主汁液(加葡萄糖)培養(yǎng)基：寄主葉10.0g、瓊脂20.0g、葡萄糖20.0g、蒸餾水1000mL；玉米粉瓊脂培養(yǎng)基：玉米粉30.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；燕麥片瓊脂培養(yǎng)基：燕麥片30.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；將上述培養(yǎng)基高溫滅菌后，取10mL倒入培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后，接入5mm菌塊，每個(gè)處理3次重復(fù)，25℃下培養(yǎng)，3d后測(cè)量菌落直徑，并在無菌室拍照[8]。菌落在測(cè)量直徑后繼續(xù)培養(yǎng)10d，開始觀察，35d后統(tǒng)計(jì)菌核產(chǎn)量。

2結(jié)果與分析

圖1　供試菌株在各個(gè)培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況

圖2　供試菌株在各個(gè)培養(yǎng)基上的產(chǎn)核狀況(第21d)

培養(yǎng)基名稱菌株編號(hào)菌落平均直徑/mm菌絲生長(zhǎng)狀況平均產(chǎn)核量/個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基Y1Y2Y326.323.622.7******1321511玉簪葉片培養(yǎng)基Y1Y2Y34034.633**********402420玉米粉瓊膠培養(yǎng)基Y1Y2Y343.34139************1644882燕麥片瓊膠培養(yǎng)基Y1Y2Y340.838.838.6************675252PDAY1Y2Y3454440************24464136

備注：“**”，生長(zhǎng)差，“***”生長(zhǎng)良好，“****”生長(zhǎng)特別好。

2.13個(gè)菌株在5種培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)情況

從圖1和表1可以看出，3個(gè)供試菌株在5種培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)速度存在一定差異，以PDA、玉米粉瓊膠培養(yǎng)基和燕麥片瓊膠培養(yǎng)基最佳，營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最差。其中，菌絲生長(zhǎng)最好的是在PDA培養(yǎng)基上，菌絲不但生長(zhǎng)速度快，而且菌絲粗壯、濃密；其次是玉米粉瓊膠培養(yǎng)基和燕麥片瓊膠培養(yǎng)基，3天后菌絲也幾乎長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基表面，但是菌絲與PDA上的比較，較為稀薄，纖細(xì)。3個(gè)供試菌株在營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基上生長(zhǎng)都很緩慢，只有PDA上平均生長(zhǎng)直徑的一半。而且在5種培養(yǎng)基上，3個(gè)菌株之間的生長(zhǎng)狀況也有明顯差異，Y1>Y3>Y2。Y1生長(zhǎng)狀況最好，其次是Y3，Y2最差。

2.23個(gè)菌株在5種培養(yǎng)基上的產(chǎn)核情況

從表1、圖2可以看出來，3個(gè)供試菌株在5種培養(yǎng)基上均能夠產(chǎn)生菌核尤其是PDA培養(yǎng)基，所有供試菌株產(chǎn)核的數(shù)量最多，菌核也最大；同時(shí)在產(chǎn)生菌核的時(shí)間上也有顯著差異。燕麥片瓊膠培養(yǎng)基最先產(chǎn)生菌核，是在接種后的第10天產(chǎn)生，且菌核分散、大小也極其均勻；然后依次是PDA培養(yǎng)基，第11天產(chǎn)核，菌核密集，個(gè)別菌核極大，顏色深，成熟度好，但是大小不均；玉米粉瓊膠培養(yǎng)基第12天產(chǎn)核，且菌核分散、大小也較均勻；寄主汁液培養(yǎng)基第13天產(chǎn)核，菌核分散、大小均勻，顏色深，但是數(shù)量最少；營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基最后產(chǎn)生菌核，是在培養(yǎng)21天后，產(chǎn)生菌核,整個(gè)培養(yǎng)基表面布滿氣生菌絲，但不產(chǎn)生菌核，即使產(chǎn)生極少的菌核，菌核也極小，顏色很淺，直至第35天菌核才接近成熟，可以清洗統(tǒng)計(jì)。所以，無論是產(chǎn)核時(shí)間還是產(chǎn)核數(shù)量都是PDA最佳，而且菌核較大，成熟快。

實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)在產(chǎn)核能力方面，3個(gè)菌株之間的也存在顯著差異。從產(chǎn)核總數(shù)來看Y1(647個(gè))>Y3(301)>Y2(203)。尤其在營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基上Y1產(chǎn)核數(shù)為132個(gè)，而Y2為15，Y3則為11個(gè)，菌核數(shù)量相差最大；差異最小的是燕麥片瓊膠培養(yǎng)基Y1產(chǎn)核數(shù)為67個(gè)，Y2、Y3則均為52個(gè)。

3結(jié)論

玉簪是目前園林綠化上比較常用的宿根花卉，廣泛用于各個(gè)庭院、綠地。而玉簪的白絹病是目前危害較重的常見病害，且不易防治，給園林養(yǎng)護(hù)工作帶來極大困擾。鑒于園林花卉的特性，各地白絹病發(fā)生情況也不同，故本實(shí)驗(yàn)采集不同發(fā)病地點(diǎn)病株通過分離純化得到的菌株，以探知其致病力的強(qiáng)弱，并篩選出最適合的培養(yǎng)基，為以后的深入實(shí)驗(yàn)做好基礎(chǔ)，也有助于對(duì)該病害的進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3個(gè)供試菌株均能在5種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)且產(chǎn)核，只是菌絲生長(zhǎng)與產(chǎn)核量存在差異。除營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)較差外，供試菌株均能在PDA、玉米粉瓊膠培養(yǎng)基、燕麥片瓊膠3種培養(yǎng)基快速、良好，以PDA最佳，菌絲濃密、粗壯，生長(zhǎng)速度最快；供試菌株在PDA上平均產(chǎn)核量最多。而且所選用的5種常用的培養(yǎng)基中，PDA培養(yǎng)基成本低廉最易取得，制作也很簡(jiǎn)單。故綜合來看，PDA才是最適合玉簪白絹病菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

同時(shí)，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中通過比較實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)3個(gè)菌株的在菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)核量方面存在顯著差異，證明3個(gè)菌株之間的致病力存在較大差異，以Y1最強(qiáng)，其次是Y3、Y2，即，Y1>Y3>Y2，而且，在同一培養(yǎng)基上，一般來說，菌絲生長(zhǎng)越好的，產(chǎn)核也越多。

參考文獻(xiàn)

[1]傅立國(guó)，陳潭清．中國(guó)高等植物[M]．13卷．青島：青島出版社，2002：91-92．

[2]Schmid W G.Hosta Species Update W.George Schmid 2007[EB/OL].http://www.hostalibrary.org.

[3]李錢魚,夏宜平.玉簪屬植物種質(zhì)資源及其園林應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中國(guó)園林，2004，20(2)：77-79．

[4]Schmidw G.The Genus Hosta[M].London:Tmi ber Press,1991.

[5]Grenfell D.The gardener’s guide to growing Hosta[M].Portland,Oregon:Tinber Press,1996:160.

[6]方中達(dá).植病研究法[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1998.

[7]李小霞.貴州省草烏病害調(diào)查及白絹病菌生物學(xué)特性研究[D].貴陽:貴州大學(xué),2007.

[8]肖仲久,李曉霞.6種培養(yǎng)基對(duì)不同來源白術(shù)白絹病菌培養(yǎng)的影響[J].廣州農(nóng)業(yè)科技，2012(6).

中圖分類號(hào):S436.8+1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

收稿日期：2015-12-10

作者簡(jiǎn)介：張麗(1976-)，女，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣工作，E-mail:wjk8272915@163.com。 劉智會(huì)(1980-)，女，工程師，主要從事園林植物保護(hù)工作，E-mail:woliuzhihui@163.com。

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.02.016