HPLC法同時(shí)測(cè)定胃康靈膠囊中芍藥苷和甘草次酸含量

龍玉瓊

（吉安市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心化學(xué)室，江西 吉安 343000）

胃康靈膠囊由白芍、白及、甘草等八味中藥提取加工制成，具有柔肝和胃，散瘀止血，緩急止痛，止痛生新的功效[1]。其是急慢性胃炎，胃、十二指腸潰瘍，胃出血常用藥，是近幾年治療胃炎、胃潰瘍很好的一種中藥復(fù)方制劑，其處方出自張仲景《傷寒論》中記載的芍藥甘草湯，經(jīng)過(guò)現(xiàn)代工藝加工而成。其中臣藥甘草具有抗炎、抗菌作用，也具有抗?jié)?、解痙和促進(jìn)胰腺分泌的作用，因此很有必要保證胃康靈中甘草的含量[2]。其現(xiàn)行國(guó)家檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為2015年版藥典，其標(biāo)準(zhǔn)中僅針對(duì)君藥白芍的芍藥苷成分進(jìn)行含量測(cè)定，為提高藥品質(zhì)量，保證用藥安全，且同時(shí)提高檢驗(yàn)效率，參考文獻(xiàn)[1-5]建立本HPLC方法，同時(shí)檢測(cè)了君藥白芍中芍藥苷和臣藥甘草中甘草次酸的含量，獲得了滿意的結(jié)果。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 InfinityⅡ高效液相色譜儀（安捷倫公司）；BP211D電子分析天平（賽多利斯公司）；AR2140電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；KW-1000DC恒溫水浴鍋 (金壇市中大儀器廠)；色譜柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5 μm ，4.6×150 mm；DAD檢測(cè)器；芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所，批號(hào)MUST-17031901，純度99.3%），甘草次酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110723-201514，純度99.3%），乙腈為色譜純；水為超純水；磷酸為分析純；胃康靈膠囊樣品共3批，均由當(dāng)?shù)厮幍曩?gòu)買。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Anglient ZORBAX SB-C18，5μm，4.6×150 mm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5μL；流動(dòng)相：0.1%磷酸溶液-乙腈梯度洗脫（見(jiàn)表1）；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm，以及190～400 nm紫外掃描光譜。此色譜條件下，2種待測(cè)化學(xué)物質(zhì)的對(duì)照品分離度大于1.5，拖尾因子符合要求，典型的色譜圖見(jiàn)圖1。

表1 0.1%磷酸溶液-乙腈梯度洗脫

2.2 供試品溶液的制備 取樣品內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，精密稱取0.8 g，置50 mL燒瓶中，加入鹽酸1 mL，氯仿20 mL，水浴回流提取1 h，過(guò)濾，濾液蒸干，用乙醇10 mL溶解，即為A液，備用。取上述濾渣揮干后，轉(zhuǎn)移置燒瓶中，加乙醇15 mL，回流1 h，濾過(guò)，即為B液，合并A液和B液置25 mL量瓶中，用乙醇定容，混勻，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 混合對(duì)照品溶液的制備 取各對(duì)照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL中含芍藥苷0.25 mg、甘草次酸0.26 mg，即得混合對(duì)照品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方量制備不含芍藥和甘草的陰性樣品，按2.2項(xiàng)下方法制得。

2.5 測(cè)定法 分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液，供試品溶液、陰性對(duì)照溶液、按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明混合對(duì)照品分離度好，陰性對(duì)照溶液無(wú)干擾，陽(yáng)性對(duì)照溶液能達(dá)到分離 (見(jiàn)圖1～3)。

圖1 混合對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 陰性溶液色譜圖

2.6 線性關(guān)系的考察 分別精密稱取芍藥苷，甘草次酸2種對(duì)照品，加乙醇稀釋成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)X，各自對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，2種化學(xué)成分的線性回歸方程、r值及線性范圍見(jiàn)表2。

表2 2種成分的線性范圍、r值及回歸方程

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.3混合對(duì)照液，按2.1項(xiàng)下色譜條件和方法，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定芍藥苷和甘草次酸的峰面積，并以芍藥苷和甘草次酸的峰面積分別計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.36%和1.17%。2.8重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)201609014供試品，分別多次進(jìn)行含量的測(cè)定，考察實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，并以芍藥苷和甘草次酸含量測(cè)定結(jié)果分別計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.42%和1.21%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的制劑（批號(hào)：201609014；芍藥苷含量：0.439%；甘草次酸含量：0.234%）約0.8 g樣品9份，精密稱定，分別精密加入精密稱定的對(duì)照品，照2.2項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，按上述方法進(jìn)行測(cè)定芍藥苷、甘草次酸，分別計(jì)算其回收率（見(jiàn)表3），平均回收率分別99.5%和98.8%，其RSD分別為0.43%和0.82%。

2.10 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.3項(xiàng)下混合對(duì)照液，按2.1項(xiàng)下色譜條件和方法，于0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，測(cè)得芍藥苷、甘草次酸2種成分的峰面積在24 h內(nèi)無(wú)明顯變化，并以芍藥苷和甘草次酸峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為1.73%和1.47%。

2.11 樣品的測(cè)定 取市售3批胃康靈膠囊，分別按2.2項(xiàng)下方法提取各樣品供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件及方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品中芍藥苷、甘草次酸含量測(cè)定

3 討論

3.1 提取方法的選擇 本研究對(duì)樣品的提取條件進(jìn)行了考察，因甘草次酸顯弱酸性，采用鹽酸酸化后用氯仿提取，提取回收率高，重現(xiàn)性好，芍藥苷直接用溶劑乙醇提取，有良好的回收率和重現(xiàn)性。故本法用鹽酸酸化后用氯仿提取后濾過(guò)，濾渣再用乙醇提取，該提取方法甘草次酸和芍藥苷均有良好的回收率和重現(xiàn)性。

表3 芍藥苷、甘草次酸回收率

3.2高效液相色譜法檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 參照中國(guó)藥典2015年版一部及有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[2-5]，芍藥苷在230 nm處有最大吸收，甘草次酸在249 nm處有最大吸收，本實(shí)驗(yàn)采用DAD檢測(cè)器，同時(shí)選取230 nm和249 nm兩個(gè)參比波長(zhǎng)進(jìn)行比較，通過(guò)光譜圖對(duì)比，230 nm兩個(gè)成分峰型較好，峰高響應(yīng)值相當(dāng)，最后選定檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。

3.3 流動(dòng)相的選擇 參照中國(guó)藥典2015年版一部及有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[2-5]，用0.1%磷酸溶液-乙腈為流動(dòng)相按不同時(shí)間、不同比例分別實(shí)驗(yàn)記錄圖譜，比較圖譜，結(jié)果以表1的梯度洗脫得到的圖譜最為滿意，兩種化學(xué)成分在15 min內(nèi)均出峰，且有良好的峰型及分離度。

3.4 本方法的實(shí)用性 該方法在一個(gè)色譜條件下，可同時(shí)檢測(cè)胃康靈膠囊中的芍藥苷和甘草次酸兩種成分，且重現(xiàn)性好，靈敏度高，方法簡(jiǎn)便快捷，可以作為胃康靈膠囊的質(zhì)量控制。