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    銀杏葉提取物制備工藝研究

    2018-08-20 06:35:06楊京
    醫(yī)藥前沿 2018年25期
    關(guān)鍵詞:黃酮醇細(xì)粉銀杏葉

    楊京

    (上海中醫(yī)藥大學(xué) 上海 201203)

    銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉,味甘、苦、澀,平。歸心、肺經(jīng)。具有活血化瘀,通絡(luò)止痛,斂肺平喘,化濁降脂之功效[1]。銀杏葉提取物為銀杏葉經(jīng)加工制成的提取物,對心血管、神經(jīng)、呼吸、免疫等多系統(tǒng)疾病均有效[2-3]。因而對銀杏葉提取物的制備工藝進(jìn)行研究具有重要意義。

    1.儀器與材料

    1.1 儀器

    高效液相色譜儀(Aligent公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);電子分析天平(賽多利斯)。

    1.2 材料

    銀杏葉(上??禈蛑兴庯嬈邢薰荆?;無水乙醇、甲醇、鹽酸、磷酸均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司

    2.實驗方法與結(jié)果

    2.1 銀杏葉提取物的制備

    精確稱取10g 銀杏葉細(xì)粉于圓底燒瓶中,加入乙醇加熱回流提取,合并提取液,過濾,回收乙醇,并濃縮至適量,精密量取1ml置于100ml容量瓶中,甲醇定容。

    2.2 銀杏葉提取物中總黃酮醇苷含量測定

    2.2.1 色譜條件 色譜柱:Dikma Diamonsil Plus C18(5μm,4.6mm×250mm),流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(53∶47),檢測波長:360nm,柱溫:30℃。

    2.2.2 供試品溶液的制備 取銀杏葉提取物0.1g,精密稱定,加甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)的混合溶液25ml,置水浴中加熱回流30min,迅速冷卻至室溫,轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。

    2.3 單因素考察試驗

    2.3.1 乙醇濃度對總黃酮醇苷提取率的影響

    精確稱取10g 銀杏葉細(xì)粉,分別加入8倍量的不同濃度的乙醇(20%、40%、60%、80%)加熱回流提取3次,考察不同濃度乙醇對總黃酮醇苷提取率的影響。結(jié)果表明,隨著乙醇濃度升高,總黃酮醇苷的提取率逐漸升高,當(dāng)乙醇濃度升至60%之后,總黃酮醇苷的提取率升至85.2%±12.1%,并且提取率趨于穩(wěn)定。當(dāng)乙醇濃度升至80%,提取率為87.3%±9.7%。因此,將選擇乙醇濃度為60%、70%、80%進(jìn)行正交試驗,結(jié)果見圖1。

    圖1 乙醇濃度對銀杏葉提取物總黃酮醇提取率的影響

    2.3.2 提取次數(shù)對總黃酮醇苷提取率的影響

    精確稱取10g銀杏葉細(xì)粉,分別加入8倍量的60%乙醇加熱回流提取,考察不同提取次數(shù)(1次、2次、3次、4次)對總黃酮醇苷提取率的影響。結(jié)果顯示采用60%乙醇提取銀杏葉總黃酮醇苷,提取3次以上,提取率基本趨于穩(wěn)定,結(jié)果見圖2。為了節(jié)省時間,特選擇提取次數(shù)為3次。

    圖2 不同提取次數(shù)對銀杏葉提取物總黃酮醇提取率的影響

    2.4 正交試驗

    單因素考察結(jié)果顯示,影響銀杏葉提取物收率的主要因素有乙醇濃度、溶媒用量、提取時間,對以上三個因素各選三個水平,利用L9(34)表進(jìn)行正交試驗,見表1。

    表1 因素水平表

    由方差分析結(jié)果顯示,銀杏葉乙醇回流過程中,乙醇濃度(A)、乙醇體積(B)、回流時間(C)三因素中的主要因素是乙醇濃度(A),最佳提取工藝為A2B2C2,見表2~3。即稱取銀杏葉藥材粉加入8倍量的70%乙醇回流提取3次,每次2h,合并提取液,過濾,回收乙醇,真空干燥,即得。

    表2 正交實驗設(shè)計表及結(jié)果

    表3 評價指標(biāo)正交試驗方差分析結(jié)果

    2.5 銀杏葉乙醇回流工藝條件驗證

    按照正交試驗優(yōu)選的實驗條件進(jìn)行提取,平行三次,測定回流液中總黃酮醇苷的提取率,測定結(jié)果見表4。結(jié)論:正交實驗優(yōu)選的乙醇回流工藝穩(wěn)定可靠,可用于銀杏葉提取物的制備。

    表4 正交試驗驗證

    3.結(jié)論

    本研究通過單因素試驗和正交試驗,確定了銀杏葉提取物制備的最佳工藝條件為:8倍量的70%乙醇回流提取3次,每次2h。

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