豬瘟疫苗免疫抗體檢測(cè)與分析

段正贏，周志忠，周丹娜，楊克禮，郭 銳，劉 威，劉澤文，袁芳艷，焦祖武，田永祥

（1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/農(nóng)業(yè)部畜禽細(xì)菌病防治制劑創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/動(dòng)物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430064；2.湖北省洪湖市農(nóng)業(yè)綜合執(zhí)法大隊(duì)，湖北 洪湖 433200）

豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起豬的一種高度接觸性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報(bào)告的傳染病[1]，我國(guó)將豬瘟列入一類動(dòng)物疫病病種，是目前危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的主要疫病，也是我國(guó)重點(diǎn)防范的主要疫病。1956年我國(guó)研制出了豬瘟兔化弱毒疫苗，經(jīng)免疫的豬具有持久免疫能力，也減少了被其他病毒感染的概率，該疫苗被認(rèn)為是最具有安全性和免疫原性最好的疫苗[2]。至今該疫苗仍被許多國(guó)家應(yīng)用于豬瘟病毒的防控。

目前，規(guī)模豬場(chǎng)在豬瘟疫苗高密度免疫下，豬瘟的發(fā)生與流行已逐步減少，但“非典型豬瘟”以及疫苗免疫失敗現(xiàn)象仍時(shí)有發(fā)生。對(duì)豬群進(jìn)行抗體水平監(jiān)測(cè)，是我們?cè)u(píng)價(jià)免疫效果及優(yōu)化免疫程序的重要手段。為了使豬群保持較高而整齊的豬瘟抗體水平，保證豬瘟疫苗免疫確實(shí)有效，2017年對(duì)湖北洪湖某豬場(chǎng)的豬瘟疫苗免疫抗體水平進(jìn)行了檢測(cè)與分析，為豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫效果的評(píng)價(jià)與免疫程序的優(yōu)化提供參考與指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 血清

該場(chǎng)存欄母豬610頭，種公豬13頭。該豬場(chǎng)豬瘟疫苗免疫程序：種豬一年接種4次，免疫劑量為4頭份/頭；商品豬21日齡進(jìn)行首免，60日齡進(jìn)行二免，免疫劑量為2頭份/頭。根據(jù)該豬場(chǎng)養(yǎng)殖數(shù)量與豬瘟疫苗免疫現(xiàn)狀，分別抽檢后備母豬血清樣品20份，妊娠母豬血清樣品30份，哺乳母豬血清樣品50份，種公豬血清樣品13份，21日齡（首免前）哺乳仔豬血清樣品100份，42日齡（首免后21 d）保育豬血清樣品100份，81日齡（二免后21 d）肥育豬血清樣品100份，共計(jì)抽檢血清樣品413份。血液樣品采集時(shí)間為2017年10月，血樣在實(shí)驗(yàn)室分離血清后，置-20℃冰箱中保存，備用。

1.2 檢測(cè)試劑

豬瘟抗體ELISA檢測(cè)試劑盒為IDEXX公司生產(chǎn)，其余試劑、儀器及耗材均由農(nóng)業(yè)部畜禽細(xì)菌病防治制劑創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 方法

采用IDEXX公司生產(chǎn)的豬瘟抗體ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)所有血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)，檢測(cè)程序和判斷標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格參照試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行操作。樣品豬瘟抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：阻斷率≥40%為陽(yáng)性，阻斷率≤30%為陰性，30%＜阻斷率＜40%為可疑。并計(jì)算和分析抗體的離散度、平均值。

2 結(jié)果

豬瘟抗體檢測(cè)樣品共計(jì)413份，其中種豬群檢測(cè)樣品113份，商品豬群300份。種公豬的抗體陽(yáng)性率為100%，離散度為13%，平均值為83，表明抗體水平高且整齊度較好；后備母豬、妊娠母豬及哺乳母豬的抗體陽(yáng)性率分別為100%、97%、98%，離散度分別為23%、21%、17%，平均值分別為 78、79、81，顯示抗體水平均較高且較整齊。哺乳仔豬、保育豬及肥育豬的抗體陽(yáng)性率分別為67%、54%、93%，離散度分別為39%、45%、24%，平均值分別為 53、49、67，可以看出，哺乳仔豬和保育豬抗體水平的整齊度和效價(jià)均不高，肥育豬抗體水平較整齊且較高。結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 豬瘟抗體檢測(cè)

3 小結(jié)與討論

目前，疫苗免疫接種仍是控制豬瘟的最重要手段，而豬瘟疫苗免疫抗體水平檢測(cè)是評(píng)價(jià)豬群豬瘟疫苗免疫效果的主要方法，對(duì)指導(dǎo)豬場(chǎng)制定科學(xué)的免疫程序至關(guān)重要[3]。本次檢測(cè)的豬場(chǎng)種豬群的抗體平均值均在78以上，抗體陽(yáng)性率均達(dá)97%以上，離散度均在23%以下，顯示抗體效價(jià)較高，整齊度較好，豬瘟疫苗免疫效果較好，免疫程序合理科學(xué)。

但在商品豬群的豬瘟抗體檢測(cè)中，哺乳仔豬群首免前母源抗體陽(yáng)性率達(dá)67%，抗體平均值為53，表明此時(shí)母源抗體尚維持在較高水平，而選擇此時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗的首次免疫，疫苗中的抗原將被較高水平的母源抗體所中和，疫苗抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答反應(yīng)十分有限，導(dǎo)致首次免疫后豬瘟抗體水平提高緩慢，至首免后21 d的保育豬群免疫抗體效價(jià)平均值為49，離散度達(dá)45%，抗體陽(yáng)性率僅為54%，顯示抗體滴度較低，整齊度較差。而二免后21 d的肥育豬群，免疫抗體陽(yáng)性率達(dá)93%，抗體平均值為67，離散度為24%，顯示抗體水平較高且整齊度較好。表明該豬場(chǎng)首免時(shí)間應(yīng)調(diào)整，應(yīng)在連續(xù)監(jiān)測(cè)母源抗體水平變化后進(jìn)行優(yōu)化，調(diào)整其免疫程序，而二免的免疫時(shí)機(jī)掌握較準(zhǔn)確，疫苗免疫效果較理想。

因此，抗體水平檢測(cè)對(duì)調(diào)整優(yōu)化免疫程序、保證疫苗免疫效果至關(guān)重要。通過(guò)此次檢測(cè)，也表明我國(guó)的豬瘟疫苗免疫效果確實(shí)，在豬瘟的防控中有不可替代的作用。按照國(guó)家《動(dòng)物疫病防控中長(zhǎng)期規(guī)劃（2012—2020年）》，豬瘟是列入凈化的病種之一，目前我國(guó)已研發(fā)出標(biāo)記疫苗及配套的檢測(cè)試劑盒，豬瘟的防控和凈化又有了更為有力的工作手段。