環(huán)磷酸腺苷顆粒劑的制備

張義軍,撒玉良,陳 文,*

(1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科，新疆石河子 832000;2.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆石河子 832000)

紅棗(Zizyphusjujubadates),是鼠李科棗屬植物棗樹(shù)的果實(shí),原產(chǎn)于我國(guó),栽培歷史悠久,在中國(guó),紅棗的栽培面積及產(chǎn)量占世界產(chǎn)量的90%以上。但是我國(guó)紅棗產(chǎn)業(yè)存在產(chǎn)品單一,技術(shù)含量較低及生產(chǎn)規(guī)模不夠大等問(wèn)題。新疆所產(chǎn)的紅棗由于其擁有日照時(shí)間長(zhǎng),晝夜溫差大等特殊的自然條件,所產(chǎn)紅棗中的營(yíng)養(yǎng)成分更是豐富。紅棗中的主要營(yíng)養(yǎng)成分有蛋白質(zhì)、天冬氨酸、谷氨酸等多種氨基酸，維生素A、維生素B及環(huán)磷酸腺苷(cAMP)等[1],糖類主要是多糖以及水溶性糖等。

紅棗中各種活性成分最為突出的則是cAMP,它是重要的生命物質(zhì),相關(guān)研究證實(shí),包括癌癥、高血壓、心肌梗死及冠心病等多種疾病[2-3]的發(fā)生都與cAMP的代謝有關(guān),cAMP是核苷酸的衍生物,由腺嘌呤、核糖和磷酸組成,磷酸與核糖的3′,5′位相連成環(huán)狀,由此稱為環(huán)磷酸腺苷,它是蛋白激酶的致活劑,是一種具有生理活性的重要物質(zhì),作為生命信息傳遞的第二信使,能參與細(xì)胞分裂與分化、形態(tài)形成、類固醇生成、糖原和脂肪分解等多種生理生化過(guò)程,在基因表達(dá)中發(fā)揮至關(guān)重要的作用,能抑制細(xì)胞增殖、癌細(xì)胞、過(guò)敏性疾病等,對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)也有調(diào)節(jié)作用,還能誘導(dǎo)激素或酶的合成,促進(jìn)機(jī)體合成代謝[4]。cAMP的合成方法較多,有化學(xué)合成法、微生物發(fā)酵法以及從天然產(chǎn)物中提取(包括水浴提取法、超聲波輔助提取法、微波輔助提取法等)[5-7],但是合成法與微生物發(fā)酵法成本較高,而且產(chǎn)率較低,故從天然產(chǎn)物中提取是獲得cAMP比較重要的途徑。有數(shù)據(jù)表明,紅棗中cAMP的含量高達(dá)100～600 nmoL/g,其含量是已經(jīng)測(cè)定的180中動(dòng)植物種最高的一種,是制備cAMP的最佳植物[8]。目前cAMP臨床使用的產(chǎn)品主要是其注射劑,但在用藥依從性等方面存在著問(wèn)題,本研究通過(guò)對(duì)已報(bào)道的cAMP提取方法進(jìn)行選擇及優(yōu)化,將獲得的cAMP制備成為用藥依從性較好的顆粒劑,不僅解決cAMP用藥依從性差的問(wèn)題,而且有攜帶方便等諸多優(yōu)點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)以和田紅棗為研究目標(biāo),采用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法進(jìn)行cAMP提取工藝的優(yōu)化,通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化顆粒劑最佳輔料配比,采用HPLC法進(jìn)行含量分析,為新疆紅棗產(chǎn)業(yè)多元化,商品多元化及對(duì)cAMP的充分利用奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新疆和田紅棗 2016年10月采摘,去核,在40 ℃下干燥,粉碎后粉末過(guò)40目篩,室溫保存;cAMP標(biāo)準(zhǔn)品 純度98%，北京索萊寶科技有限公司;甲醇 色譜醇，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;無(wú)水乙醇 分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司;乳糖 分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠;可溶性淀粉 分析純，天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司;糊精 分析純，天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司;蒸餾水 實(shí)驗(yàn)室自制。

AL204電子分析天平 奧豪斯國(guó)際貿(mào)易(上海)有限公司;島津高效液相色譜儀 島津企業(yè)(管理)有限公司;WD800-微波爐 樂(lè)金電子(天津)電氣有限公司;KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗儀 昆山市超聲儀器有限公司;DHG-9240電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司;TDL-5型低速大容量離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 原料預(yù)處理 將紅棗清洗后去核,粉碎,過(guò)40目篩,備用。

1.2.2 提取方法選擇 參考文獻(xiàn)[9-11],對(duì)水浴提取法、微波輔助提取法和超聲波輔助提取法三種方法進(jìn)行比對(duì)。

水浴提取法:準(zhǔn)確稱取50.000 g棗粉,加入100 mL蒸餾水,于室溫下浸泡12 h。經(jīng)過(guò)浸泡后將其加熱至約60 ℃,然后經(jīng)打漿機(jī)打漿1 h,抽濾,再將其棗渣同上述操作重復(fù)一次,合并濾液,得cAMP提取液,在50 ℃條件下減壓濃縮,濃縮至50 mL,取濃縮液2 mL置于50 mL的容量瓶,用蒸餾水稀釋至刻度,用0.45 μm濾膜過(guò)濾,進(jìn)行HPLC測(cè)定。

微波輔助提取法:準(zhǔn)確稱取棗粉2.000 g,以料液比1∶30溶解于體積分?jǐn)?shù)10%的乙醇溶液常溫浸泡6 h,300 W微波功率處理3 min,所得溶液在3000 r/min下離心5 min,上清液即cAMP提取液,經(jīng)抽濾、在60 ℃下真空濃縮后,用雙蒸水在50 mL的容量瓶中定容,過(guò)0.45 μm濾膜,進(jìn)行HPLC測(cè)定。

超聲輔助提取法:準(zhǔn)確稱取棗粉4.000 g,放入錐形瓶中,加入體積分?jǐn)?shù)為15%的乙醇,按料液比1∶20,超聲功率75 W,超聲溫度40 ℃,超聲時(shí)間15 min進(jìn)行超聲波輔助萃取,超聲萃取后取出放入40 ℃的水浴中繼續(xù)提取8 h,以轉(zhuǎn)速3000 r/min離心5 min,取上清液置入100 mL濃縮瓶中,殘?jiān)偌芋w積分?jǐn)?shù)為15% 的乙醇溶液10 mL,同條件再次離心,合并上清液,所得上清液經(jīng)真空濃縮后轉(zhuǎn)入50 mL的容量瓶中,最后用pH為3(用體積分?jǐn)?shù)為10%的乙酸調(diào)節(jié)pH達(dá)酸性條件)的雙蒸水定容至刻度。取上述稀釋液25 mL再稀釋一倍,所得稀釋液過(guò)0.45 μm濾膜,進(jìn)行HPLC測(cè)定。

1.2.3 環(huán)磷酸腺苷含量測(cè)定方法 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,以0.2%的甲酸溶液-甲醇(80∶20)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為259 nm。取cAMP對(duì)照品約10.0 mg,加雙蒸水5 mL使溶解,加稀鹽酸溶液與氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性,用雙蒸水稀釋成0.1 mg/mL的溶液,取20 μL注入液相色譜儀,調(diào)整色譜系統(tǒng),環(huán)磷酸腺苷峰與相鄰雜峰的分離度應(yīng)符合要求。理論塔板數(shù)按環(huán)磷酸腺苷計(jì)算不低于2000,拖尾因子應(yīng)小于1.4。

取適量環(huán)磷酸腺苷提取液,稀釋至一定濃度,作為供試液,精密量取20 μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另取環(huán)磷酸腺苷對(duì)照品適量,同法測(cè)定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,即得cAMP含量。

cAMP標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制:準(zhǔn)確稱取一定質(zhì)量的cAMP標(biāo)準(zhǔn)品,置于10 mL的容量瓶中,用去離子水稀釋成濃度為5.8、17.4、29、40.6、52.2 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,取配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液20 μL,注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖中峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo),峰面積(即mAU)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4 響應(yīng)面法優(yōu)化最佳提取工藝 在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,選用微波輔助提取法作為 cAMP的提取方法,以cAMP的提取率為指標(biāo)。根據(jù)BOX-Behnken中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,應(yīng)用Design-Expert-8.0.6軟件,選取料液比(A),提取時(shí)間(B),微波功率(C),乙醇體積分?jǐn)?shù)(D),微波處理時(shí)間(E)5個(gè)因素,每個(gè)因素進(jìn)行三水平實(shí)驗(yàn),分別以-1、0、1進(jìn)行編碼,以cAMP的提取率為響應(yīng)面響應(yīng)值,實(shí)驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 響應(yīng)面分析因素與水平Table 1 Variables and levels in response surface design

cAMP提取率(%)=提取液濃度×提取液體積÷棗粉質(zhì)量

1.2.5 環(huán)磷酸腺苷顆粒劑的制備

1.2.5.1 輔料的篩選 稱取浸膏5.000 g,分別取可溶性淀粉、乳糖、糊精以及這三種輔料以質(zhì)量比1∶1混合后的混合輔料各20.000 g,將輔料與浸膏混合,以體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇為潤(rùn)濕劑,用手指不斷的搓捏,混合均勻,以“手握成團(tuán),輕壓即散”作為制軟材的標(biāo)準(zhǔn),在16目篩上制粒,制得的顆粒放入烘箱,55 ℃下,干燥3 h。

1.2.5.2 輔料篩選指標(biāo)確定 通過(guò)測(cè)定輔料與浸膏混合均勻后制備的顆粒的成型性、堆密度、休止角、溶化率以及吸濕性等指標(biāo),并以成型性分值、堆密度分值、休止角分值、溶化率分值以及吸濕性分值來(lái)評(píng)選出最優(yōu)的輔料[12]。

綜合指標(biāo)=成型性分值(15)+堆密度分值(15)+休止角分值(15)+溶化率分值(20)+吸濕性分值(35)。

上述5項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)分,對(duì)比每個(gè)輔料所積的分?jǐn)?shù),分值最高的即為顆粒劑最佳輔料。

成型性測(cè)定:對(duì)所制備的顆粒精確稱重,先過(guò)1號(hào)篩,再過(guò)5號(hào)篩進(jìn)行整粒,通過(guò)1號(hào)篩而不過(guò)5號(hào)篩的顆粒進(jìn)行稱重,按公式計(jì)算顆粒劑成型率及成型性分值。

成型率(%)=過(guò)篩后的顆粒質(zhì)量/過(guò)篩前的顆粒質(zhì)量×100。

成型性分值=(15/最大成型性值)×成型性值。

堆密度檢測(cè):將過(guò)篩整粒后的顆粒稱重后放入干燥的量筒中,輕輕震搖后讀取刻度(V)mL,并記錄質(zhì)量(M)g,堆密度值及堆密度分值計(jì)算公式如下:

堆密度值=M/V;

堆密度分值=(15/最大堆密度值)×堆密度值

休止角的檢測(cè):采用固定漏斗法,將3只漏斗串聯(lián)并固定在水平的坐標(biāo)紙上1～2 cm的高度,將顆粒從最上面的漏斗壁慢慢加入,直到顆粒在坐標(biāo)紙上形成一個(gè)圓錐體,圓錐體的頂端與最下面的漏斗口為止,由坐標(biāo)紙測(cè)出圓錐的直徑(2R),并測(cè)出圓錐體的高度(H),計(jì)算出休止角tga=H/R,重復(fù)測(cè)定5次,計(jì)算出平均值。

休止角分值的運(yùn)算公式:

休止角分值=(最小休止角值×15)/休止角值

溶化率檢測(cè):精密稱取干燥顆粒0.5000 g,加入10 mL的干燥恒重的離心管中,加入沸水5 mL,振蕩5 min,在3000 r/min下離心15 min,棄上清液,在80 ℃下將殘?jiān)娓芍梁阒?精密稱定,計(jì)算溶化率及溶化率分值。

溶化率(%)=溶化的顆粒質(zhì)量/顆?？傊亓俊?00

溶化率分值=(20/最大溶化率)×溶化率值

吸濕性檢測(cè):精密稱取按1.3.1中制備的6種顆粒劑放入稱量瓶中,平鋪厚度約為2 mm,然后放入底部裝有NaCl飽和溶液的干燥器中(相對(duì)濕度為75%),48 h后取出,精密稱定。按照如下方式計(jì)算吸濕率:

吸濕率(%)=(吸濕后的質(zhì)量-吸濕前的質(zhì)量)/稀釋前的質(zhì)量

吸濕率分值=(最小吸濕率×35)/最大吸濕率

1.2.6 正交法優(yōu)化成型工藝

選擇浸膏與乳糖(輔料)比例、乙醇體積分?jǐn)?shù)、干燥溫度作為考察因素,以成型性作為評(píng)價(jià)指標(biāo),用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn),見(jiàn)表2。

表2 L9(34)正交表Table 2 L9(34) Orthographic table

1.2.7 質(zhì)量控制

1.2.7.1 性狀鑒別 顆粒劑外觀從顏色、氣味與外觀形狀驚醒觀察,取3批顆粒劑樣品,分別編號(hào)1、2、3進(jìn)行鑒別,顆粒劑應(yīng)干燥、均勻、色澤一致、無(wú)潮濕、軟化、結(jié)塊、潮解等現(xiàn)象。

1.2.7.2 溶化性檢查 按照《中國(guó)藥典》2010版中關(guān)于溶化性檢查方法,精密稱取3份顆粒劑10.000 g,加熱水200 mL,進(jìn)行溶化性檢查。

1.2.7.3 粒度檢查 按照《中國(guó)藥典》2010版附錄中的雙分法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.7.4 干燥失重 取3批顆粒劑各一定質(zhì)量,在105 ℃干燥至恒重,含糖顆粒應(yīng)在80 ℃,減失重量不得超過(guò)2.0%。

1.2.7.5 微生物限度 依據(jù)2010版《中華人民共和國(guó)藥典》一部附錄XIII C項(xiàng)下方法檢查。

1.2.7.6 顆粒劑含量測(cè)定 取3份不同批次的顆粒劑樣品各1.000 g,于10 mL的容量瓶中溶解并稀釋至刻度,精密吸取20 μL,在上述色譜條件下進(jìn)行含量測(cè)定。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理采用Excel 2010處理,結(jié)果取3次重復(fù)的平均值。使用Design-Expert-8.0.6軟件的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),完成數(shù)學(xué)回歸模型的建立、顯著性分析、響應(yīng)曲面分析[13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 含量測(cè)定方法

按照1.2.1項(xiàng)下方法以縱坐標(biāo)為峰面積,橫坐標(biāo)為cAMP的量,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得cAMP回歸曲線為Y=19864X-27656,r=0.9991,表明cAMP進(jìn)樣在5.8～52.2 μg/mL濃度間線性關(guān)系良好。cAMP標(biāo)準(zhǔn)品圖譜如圖1,樣品圖譜如圖2。

圖1 cAMP標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatogram of cAMP standard

圖2 樣品溶液HPLC圖譜Fig.2 HPLC chromatogram of Sample solution

2.2 提取方法選擇

以cAMP提取率為實(shí)驗(yàn)方法選擇依據(jù),方法選擇結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 提取方法的選擇Table 3 Selection of extraction methods

由表3可知,這三種提取方法中微波輔助提取法的產(chǎn)率最高,同時(shí)考慮到水浴法操作步驟繁瑣,因此選擇微波輔助提取法為cAMP的提取方法。

2.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

以cAMP的提取率為響應(yīng)值(Y)進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 響應(yīng)面分析結(jié)果Table 4 Response surface analysis results

2.4 響應(yīng)面結(jié)果分析

應(yīng)用Design-Expert.v.8.0.6版軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行響應(yīng)面分析,對(duì)各單因素進(jìn)行多元線性回歸,得到模擬回歸方程:cAMP提取率(%)=28.46-0.49A-0.22B+0.15C-0.053D+0.50E-0.83AB-0.58AC-1.40AD-0.23AE-1.16BC-0.42BD+0.48BE-0.61CD-0.23CE+0.88DE-1.42A2-1.87B2-1.48C2-0.53D2-0.42E2,響應(yīng)面回歸顯著性方差分析見(jiàn)表5。

表5 cAMP提取率響應(yīng)面結(jié)果的方差分析Table 5 ANOVA analysis of cAMP extraction rate response surface results

從表5可知,該模型具有高度顯著性(p<0.05),失擬項(xiàng)不顯著,同時(shí)模型相關(guān)系數(shù)R2=0.9123,大于0.9,模型相關(guān)度較好。其響應(yīng)值的變化有91.23%與所選變量有關(guān),由表5可知,各因素對(duì)cAMP的提取率影響的主次順序?yàn)?D>A>E>B>C,由于該模型相關(guān)性很好,所以可以利用該模型進(jìn)行分析預(yù)測(cè)最佳工藝。

2.4.1 工藝優(yōu)化與預(yù)測(cè) 根據(jù)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果運(yùn)用Design-Expert.v 8.0.6軟件繪制響應(yīng)值與其中任意兩個(gè)因素的三維效應(yīng)面曲線圖,響應(yīng)曲面的陡峭程度,曲面越陡峭,顯著程度越高,陡峭程度越小,則表示交互作用顯著程度越低。各因素之間交互影響直觀效果如圖3(a)～(j)圖所示為當(dāng)料液比(A)、提取時(shí)間(B)、微波功率(C)、乙醇體積分?jǐn)?shù)(D)、以及微波處理時(shí)間(E)中任意三個(gè)因素為零水平時(shí),其余兩個(gè)因素交互作用對(duì)cAMP提取率的影響[14]。

由響應(yīng)面圖(圖3)及p值的分析可得,兩兩因素間對(duì)響應(yīng)值均有一定的交互作用,其中料液比-提取時(shí)間、料液比-微波功率、料液比-乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比-微波處理時(shí)間、提取時(shí)間-乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取時(shí)時(shí)間-微波處理時(shí)間、微波功率-乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波功率-微波處理時(shí)間以及乙醇體積分?jǐn)?shù)-微波處理時(shí)間交互作用不顯著,提取時(shí)間-微波功率的交互作用對(duì)cAMP提取率影響較為顯著(p<0.05)。

為了進(jìn)一步確證最優(yōu)工藝條件,對(duì)回歸方程取一階偏導(dǎo)等于零,得到曲面最大點(diǎn),求導(dǎo)方程最后得出各個(gè)因素最優(yōu)條件為:料液比1∶14.55 (g/mL),提取時(shí)間7.5 h,微波功率270 W,乙醇體積分?jǐn)?shù)為30%,微波處理時(shí)間10 min,在此條件下,cAMP理論提取率403.6 μg/g。

2.4.2 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 為驗(yàn)證模型的可行性,在模型預(yù)測(cè)的基礎(chǔ)上,在料液比1∶15 (g/mL),提取時(shí)間7.5 h,微波功率270 W、乙醇體積分?jǐn)?shù)為30%、微波處理時(shí)間10 min的條件下重復(fù)6次實(shí)驗(yàn),取平均值,得到cAMP提取率為387.8 μg/g,實(shí)際提取率與理論已提取率的吻合度為96.1%,表明采用響應(yīng)面法得到的最優(yōu)提取條件各參數(shù)可靠。

2.5 顆粒劑優(yōu)化結(jié)果

2.5.1 輔料篩選結(jié)果 對(duì)所選輔料進(jìn)行綜合評(píng)分,由表6可知,乳糖的評(píng)分最高(97.19),可溶性淀粉含量最低,因此選用乳糖作為cAMP顆粒劑的最優(yōu)輔料。

表6 綜合評(píng)分Table 6 Comprehensive score

2.5.2 正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 每份取浸膏5.000 g,按照表3確定的浸膏與輔料的比例以及稀釋劑乙醇體積分?jǐn)?shù)進(jìn)行混合制軟材,通過(guò)16目篩制粒,按表3所確定的干燥溫度下進(jìn)行干燥,然后測(cè)定能通過(guò)1號(hào)篩且不能通過(guò)5號(hào)篩的顆粒重量,以成型性作為考察指標(biāo),進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析,見(jiàn)表7、表8。

表 7 L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及測(cè)定結(jié)果Table 7 L9(34)orthogonal test design and determination results

表8 方差分析表Table 8 Analysis of variance table

由表7分析可知,由極差R可知,對(duì)成型率影響因素大小依次為浸膏與輔料配比、干燥溫度與乙醇體積分?jǐn)?shù)。表8的方差分析表明,輔料與浸膏比例對(duì)成型性有顯著影響(p<0.05)。

以cAMP顆粒劑成型率為評(píng)價(jià)指標(biāo),最佳制粒工藝條件為A2B2C2,即浸膏與輔料配比1∶4,乙醇體積分?jǐn)?shù)為75%,干燥溫度50 ℃。根據(jù)最佳工藝條件A2B2C2制備3批顆粒劑并進(jìn)行合格率測(cè)定,成型率分別為97.2%、96.9%、96.1%,平均成型率為96.73%,符合《中國(guó)藥典》2015版中對(duì)顆粒劑粒度的要求,雖然其成型率小于正交實(shí)驗(yàn)中的第6、7組實(shí)驗(yàn)結(jié)果,但是考慮到顆粒劑粒度均一性,前者較后兩者的均勻,第6、7組實(shí)驗(yàn)所得顆粒均勻性較差,因此選擇A2B2C2為最佳制備條件。符合《中國(guó)藥典》2015版中對(duì)顆粒劑粒度的要求。

2.6 顆粒劑質(zhì)量檢查結(jié)果

2.6.1 性狀檢查 本品為顆粒劑,通過(guò)多批樣品屬性檢查,均為棕黃色顆粒,味微甜,顆粒均勻,色澤一致,無(wú)吸潮、軟化現(xiàn)象

2.6.2 粒度檢查 按照《中國(guó)藥典》2010版附錄記載的合格率檢查方法,雙分法進(jìn)行測(cè)定。能通過(guò)1號(hào)篩而不能通過(guò)5號(hào)篩的顆粒為合格顆粒,計(jì)算合格顆粒收率為95.8%,符合要求。

2.6.3 溶化性檢查 按照1.5.2項(xiàng)下方法測(cè)定。顆粒劑在30 s內(nèi)全部溶解,溶液為棕紅色澄清液體,符合《中國(guó)藥典》2010版的要求。

2.6.4 干燥失重 按1.5.4項(xiàng)下方法測(cè)定。稱取3批顆粒劑質(zhì)量為2.0021、2.0092、2.0056 g,其在105 ℃下干燥至恒重,失重百分比為1.3%、1.24%、1.28%,均小于2%,所以符合《中國(guó)藥典》2010版要求。

2.6.5 微生物檢查 依據(jù) 《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部附錄XIII C項(xiàng)下方法檢驗(yàn),3批cAMP顆粒劑每1 g含需氧菌為700 cfu/g,符合 《中華人民共和國(guó)藥典》顆粒劑項(xiàng)下要求。

2.6.6 顆粒劑含量測(cè)定 取環(huán)磷酸腺苷顆粒劑3批樣品(20170715,20170718,20170721),按上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定,得顆粒劑平均含量為156.2 μg/g。cAMP顆粒劑每袋(10 g)cAMP含量不得少于1.5 mg,因此本品符合質(zhì)量要求。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以新疆紅棗為原料,選取料液比、提取時(shí)間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、微波功率與微波處理時(shí)間為自變量,cAMP提取率為響應(yīng)值,利用響應(yīng)面分析,建立微波提取新疆紅棗中cAMP的工藝模型。由回歸分析表明,該模型穩(wěn)定性好,通過(guò)顯著性分析得到各因素的主效應(yīng)關(guān)系為:乙醇體積分?jǐn)?shù)>料液比>微波處理時(shí)間>微波頻率>提取時(shí)間。研究結(jié)果還表明,新疆紅棗落地棗cAMP微波提取最佳工藝參數(shù)為:料液比1∶15、提取時(shí)間7.5 h,微波功率270 W,乙醇含量30%,微波處理時(shí)間10 min。cAMP理論提取率為403.6 μg/g,實(shí)際提取率為387.8 μg/g,兩者吻合度達(dá)到96.1%。

實(shí)驗(yàn)采用綜合評(píng)分的方法對(duì)cAMP顆粒劑的幾種輔料乳糖、可溶性淀粉、糊精以及其混合輔料進(jìn)行選擇,最終選擇乳糖作為cAMP顆粒劑的輔料,通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇出最優(yōu)的輔料配比,以浸膏:乳糖比為1∶4、乙醇體積分?jǐn)?shù)為75%、干燥溫度為55 ℃為最優(yōu)的制備方案,所制得顆粒劑在粒度、溶化率、吸濕性等方面均符合藥典要求。因此,本實(shí)驗(yàn)的提取方法以及顆粒劑的輔料選擇是正確的,適用于cAMP顆粒劑的制備。